益身清对斑马鱼的肠道蠕动促进作用研究

目的:探讨益身清对斑马鱼肠蠕动的促进作用。方法:随机选取受精后5 d(5 dpf)野生型AB品系斑马鱼于培养皿中,用尼罗红喂饲斑马鱼建立肠蠕动模型,分组后药效学组分别给予不同浓度的益身清和多潘立酮,24 h后每个实验组随机选取10尾斑马鱼在荧光显微镜下拍照并采集数据,以荧光强度的统计学分析结果评价益身清对斑马鱼肠蠕动的促进作用。结果:益身清不同剂量组(125、250、500、1000、2000μg/mL)斑马鱼的肠蠕动促进作用分别为25%、45%、49%、62%和66%,与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.001),提示在本实验浓度条件下益身清对斑马鱼肠蠕动有明显的促进作用。结论:在本实验浓度条件下,益身清对斑马鱼肠蠕动有明显的促进作用。

尖尾芋醇提物保护黑色素瘤小鼠脾的作用机制

目的研究尖尾芋醇提物对荷瘤小鼠脾保护的作用机制。方法C57BL/6小鼠背部右侧皮下接种黑色素瘤B16-F10细胞后,将未造模的6只小鼠作为正常组(normal),造模的30只小鼠随机分为模型组(model)、环磷酰胺组(CTX)和低、中、高剂量的尖尾芋醇提物组(lEAC、mEAC、hEAC),每组各6只。连续给药10 d,末次给药24 h后,小鼠眼球采血后颈椎脱臼处死,剥离脾组织并称重计算脏器指数,以苏木精-伊红(HE)染色观察脾组织的病理变化,以TUNEL荧光染色检测不同组小鼠脾组织中细胞凋亡的情况,以免疫组化检测脾组织中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达水平,以细胞计数法-8(CCK-8)法检测尖尾芋醇提物对正常小鼠脾细胞的生长活性的影响。结果模型组和高剂量尖尾芋醇提物组脾指数分别为5.26±0.94和7.78±1.63,差异有统计学意义(P<0.01)。免疫组化中,正常组、模型组和高剂量尖尾芋醇提物组小鼠脾组织中Bcl-2阳性细胞IOD值分别为8171.34±1210.74,712.79±203.90和7437.72±1342.33;Bax阳性细胞IOD值分别为1235.50±302.81,1.14×10^(4)±882.91和5241.06±991.12;caspase-3阳性细胞IOD值分别为2197.56±388.14,1.08×10^(4)±700.90和3267.04±531.23。模型组与正常组相比,高剂量尖尾芋醇提物组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论尖尾芋醇提物能够抑制荷瘤小鼠的脾组织在肿瘤微环境下发生异常凋亡,对荷瘤小鼠脾组织具有一定的保护作用,其作用机制与上调Bcl-2抗凋亡的蛋白的活性,降低Bax促凋亡的蛋白的活性,减低caspase-3蛋白表达相关。

钩藤叶水提物对TH-GFP转基因斑马鱼甲基苯丙胺依赖的影响

目的培育TH-GFP转基因斑马鱼幼鱼,建立转基因斑马鱼幼鱼甲基苯丙胺依赖模型,观察钩藤叶水提物对模型幼鱼的影响。方法收集健康斑马鱼受精卵,向卵黄囊中注射TH-GFP质粒,构建TH-GFP转基因斑马鱼幼鱼。取转基因斑马鱼幼鱼,随机放入含有60,6,0. 6,0. 06 mg·L-1甲基苯丙胺溶液中,3d后,将斑马鱼幼鱼固定,然后放入液态的低熔点琼脂糖中,用荧光体视显微镜观察其头部的荧光变化。取转基因斑马鱼幼鱼,随机分为空白组、对照组(甲基苯丙胺0. 6 mg·L-1)、高剂量实验组(钩藤叶水提物330 mg·mL-1)和低剂量实验组(钩藤叶水提物33 mg·mL-1)。除空白组外,将各组斑马鱼幼鱼放入0. 6 mg·L-1的甲基苯丙胺溶液中自由游动。48 h后,将高、低剂量实验组斑马鱼幼鱼放入相应浓度的钩藤叶水提物中,甲基苯丙胺模型组放入鱼用生理盐水中,自由游动。24 h后,将各组斑马鱼幼鱼固定,放入液态的低熔点琼脂糖中,用激光扫描共聚焦显微镜观察其荧光变化。结果与空白组相比,显微注射THGFP质粒后的斑马鱼幼鱼头部出现明显荧光。在绿色荧光下,与空白组斑马鱼幼鱼相比,对照组斑马鱼幼鱼头部荧光变化不明显,其余各组斑马鱼幼鱼头部荧光变化明显。将各组斑马鱼幼鱼放入相应浓度的钩藤叶水提物中24 h后,在共聚焦显微镜下观察,与空白组相比,对照组斑马鱼幼鱼头部荧光明显增强。与对照组相比,钩藤叶水提物组斑马鱼幼鱼头部荧光有所减弱。结论 TH-GFP转基因斑马鱼可以用于观察斑马鱼甲基苯丙胺依赖变化。0. 6 mg·L-1的甲基苯丙胺溶液可以使TH-GFP转基因斑马鱼头部荧光发生明显增强,而钩藤叶水提物可以降低这种荧光的改变。

益甘舒抗乙醇诱导斑马鱼兴奋期醉酒的作用研究

目的评价药食同源健康产品益甘舒对斑马鱼的解酒作用,为益甘舒的应用提供理论依据。方法随机选取240尾受精后5 d(5 dpf)野生型AB品系斑马鱼于六孔板中,每孔(实验组)均处理30尾斑马鱼。设立益甘舒不同浓度组、阳性对照药"RU21"组、正常对照组和模型对照组。益甘舒与阳性对照药"RU21"分别处理24 h后,每个实验组随机选取10尾斑马鱼于96孔板中,每孔1尾斑马鱼,容量为200μL,除正常对照组外,其余实验组均给予1.5%乙醇诱导建立斑马鱼兴奋期醉酒模型,用运动/行为分析记录仪拍摄并记录斑马鱼在1 h内的总运动距离。通过对总运动距离的统计分析,评价益肝舒对斑马鱼酒精中毒模型的影响。结果模型对照组斑马鱼的总运动距离与正常对照组比较P<0.001,表明模型建立成功。与模型对照组比较,阳性对照药"RU21"组、益甘舒500、1000和2000μg·m L^-1浓度组对乙醇诱导的兴奋期醉酒模型斑马鱼均有显著的醒酒作用(P<0.05),且剂量越大作用越明显。结论在本实验浓度条件下,益甘舒对乙醇诱导的兴奋期醉酒模型斑马鱼具有明显的解酒作用。