甲基莲心碱在K562/A02细胞对STI571敏感性中的作用

目的:研究甲基莲心碱(Nef)在多药耐药白血病细胞K562/A02对STI571敏感性中的作用,并探讨其逆转耐药的机制。方法:MTT法比较STI571单独或与Nef联合应用对K562/A02细胞的抑制作用;RT-PCR法检测mdr1mRNA转录水平及WesternBlot法检测P-gp表达水平。结果:Nef与STI571联合应用对K562/A02细胞增殖的抑制作用明显增强。单独应用STI571对K562/A02细胞的IC50为3.02μmol/L,加Nef后,IC50为0.689μmol/L,逆转倍数为4.38倍(P<0.05)。STI571与Nef联合应用使mdr1mRNA转录水平下调(45.4±2.5)%(P<0.01),使P-gp的表达下调40.58%(P<0.05)。结论:甲基莲心碱能增强K562/A02细胞对STI571的敏感性,下调其mdr1mRNA的转录和阻断P-gp的表达,从而逆转白血病的多药耐药性。

甲基莲心碱抑制K562/A02细胞GST-π的表达

目的探讨甲基莲心碱(Neferine,Nef)对谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)的影响。方法应用MTT法测定甲基莲心碱处理的K562/A02细胞对阿霉素(ADM)敏感性的影响。RT-PCR法分析Nef处理后,GST-πmRNA转录的变化。通过Western Blot观察Nef对GST-π蛋白表达的影响。结果甲基莲心碱对K562/A02的耐药性具有明显的逆转作用。用Nef处理后,对阿霉素药物敏感性的相对逆转效率第1天、第3天和第5天分别为9.6%、41.4%和10.7%;GST-πmRNA转录水平在用药后第3天下调最大,为(50.7±2.3)%。GST-π蛋白的表达于用药后第1天、第3天和第5天分别下降25.57%、48.42%和10.68%。结论甲基莲心碱具有较强的逆转K562/A02细胞多药耐药的作用,其逆转机制可能包括下调K562/A02细胞GST-πmRNA的转录和蛋白的表达。

《嵌合抗原受体T细胞疗法的免疫相关不良事件管理:ASCO指南》解读

免疫疗法革新了多种癌症的治疗现状。嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)疗法在血液肿瘤包括白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤等疾病的治疗中取得巨大成功。与传统化疗不同的是,CAR-T疗法有独特的不良反应包括细胞因子释放综合征和中枢神经毒性等。自2021年6月以来我国已经批准两款CD19为靶点的CAR-T细胞产品上市,用于治疗难治复发B细胞淋巴瘤;此外,我国有数百项CAR-T治疗血液肿瘤和实体瘤的临床试验正在开展。随着CAR-T疗法在肿瘤治疗中的应用和相关临床研究日益广泛,其不良反应管理的必要性和重要性日益凸显。美国临床肿瘤学会(American Society of Clinical Oncology,ASCO)于2021年11月推出了首部《嵌合抗原受体T细胞疗法的免疫相关不良事件管理:ASCO指南》。本文将结合临床实践对ASCO指南进行解读,以期为CAR-T疗法不良反应的管理带来更深入的理解。

三种蒽环类抗肿瘤药物对K562/A02细胞体外抑制作用

目的:比较表阿霉素,柔红霉素和吡喃阿霉素对多药耐药细胞株K562/A02体外增殖的抑制作用。方法:利用M TT观察7.5～60μg/m l的表阿霉素或柔红霉素或吡喃阿霉素处理K562/A02细胞后细胞增殖的变化。结果:吡喃阿霉素剂量逐渐增大时,抑制率逐渐增强(P<0.05)。吡喃阿霉素组对K562/A02细胞的抑制率较相同剂量表阿霉素组或柔红霉素组抑制率显著增加(P<0.01)。结论:相同剂量的吡喃阿霉素较表阿霉素或柔红霉素有更强的抑制多药耐药细胞株K562/A02细胞的作用。

pEGFP-C1/U6质粒载体介导的表达MDR1shRNA的质粒构建

为了构建pEGFP-C1/U6载体介导MDR1短发卡RNA(shorthairpinRNA,shRNA)表达的质粒,针对MDR1的19碱基大小的片段,分别设计2对寡核苷酸,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pEGFP-C1载体(命名为pEGFP-C1/U6),两对DNA双链连接后形成中间由9个碱基序列间隔的反向互补序列,构建成能产生MDR1短发卡RNA的质粒。结果表明:经酶切、连接后构建成的质粒(pEGFP-C1/U6/A和pEGFP-C1/U6/B),经酶切与测序证实构建成功,无任何碱基突变。结论:成功构建了能表达MDR1shRNA的质粒载体pEGFP-C1/U6/A和pEGFP-C1/U6/B,此项研究结果可能为临床上逆转肿瘤多药耐药提供一种有效的方法。

医学生医患沟通能力培养的实践与研究

良好的医患沟通能力是医学生成为一名合格医生不可缺少的条件。从临床教学角度,探讨医学生医患沟通能力存在的问题及提高医学生医患沟通能力的方法。通过对学员培训前医患沟通能力的评估,进行个性化的培训,提高学员的医患沟通能力,为日后的工作创造更好的条件,更好地服务病患。

甲基莲心碱增强蒽环类药物对K562/A02细胞增殖抑制作用实验研究

目的比较甲基莲心碱体外对三种不同蒽环类抗肿瘤药物的化疗增敏作用。方法利用MTT法观察甲基莲心碱合用表阿霉素或柔红霉素或吡喃阿霉素处理K562/A02细胞后细胞增殖的变化。结果吡喃阿霉素合用甲基莲心碱处理细胞后,与同浓度的表阿霉素或柔红霉素合用甲基莲心碱比较,前者对K562/A02细胞的抑制率明显高于后者(P<0.01)。结论甲基莲心碱对三种不同的蒽环类抗肿瘤药物均具有化疗增敏作用,而甲基莲心碱能更好地增强吡喃阿霉素对K562/A02细胞的抗肿瘤作用。

当归多糖促进慢性粒细胞白血病细胞性树突状细胞的诱导生成

目的 探讨当归多糖 (APS)对慢性粒细胞白血病细胞诱导生成树突状细胞 (DCs)的影响。方法 取慢性粒细胞白血病 (CML )患者骨髓单个核细胞 ,分别予粒 -巨噬集落刺激因子 (GM- CSF) /白介素 - 4 (IL - 4 )培养或GM- CSF/ IL- 4联合各浓度 APS(5 0 ,10 0 ,2 0 0 mg/ L)培养 ,普通光镜和电镜观察细胞形态 ,台盼蓝拒染法检测细胞成活率 ,流式细胞仪检测 DCs的免疫表型 (CD80 ,CD86 ,CD83) ,自体或异体混合淋巴细胞反应检测 DCs刺激 T淋巴细胞的增殖能力。结果 GM- GSF/ IL - 4或 GM- CSF/ IL - 4 / APS诱导培养的慢性粒细胞白血病骨髓单个核细胞均表现出典型的树突状形态而且表达高水平的免疫表型。GM- CSF/ IL- 4 / APS培养的 DCs的细胞成活率和增殖能力显著提高 ,CD83,CD80 ,CD86 表达显著升高 ,APS组慢性粒细胞白血病细胞诱导的树突状细胞 (CML - DCs)刺激 T淋巴细胞的增殖能力更强。结论 GM- CSF/ IL- 4 / APS培养的 DCs的 CD83、CD80 、CD86 表达率明显高于 GM-CSF/ IL - 4组。 GM- CSF/ IL - 4 / APS诱生的 CML - DCs刺激 T淋巴细胞增殖能力强于 GM- CSF/ IL - 4组。 APS能促进 IL- 4和 GM- CSF对 CML- DCs的诱生与成熟。

PDTC加强柔红霉素对多药耐药白血病细胞增殖的抑制作用

为了观察吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrroledithiocarbomate,PDTC)体外对柔红霉素的化疗增敏作用,利用MTT法观察联用PDTC和柔红霉素处理难治性白血病患者骨髓单个核细胞增殖的变化。结果表明,加入PDTC后柔红霉素对白血病耐药细胞的抑制率增强(P<0.05)。当PDTC的浓度为50μmol/l时柔红霉素对白血病耐药细胞的抑制最明显。结论:PDTC体外能增敏柔红霉素对耐药白血病细胞的抗肿瘤作用,其中以50μmol/L浓度的PDTC为最佳抑制浓度。

甲基莲心碱联合mdr-1shRNA对K562/A02细胞mdr-1/P-gp表达的影响

目的:探讨甲基莲心碱(Nef)联合mdr-1shRNA表达的载体对K562/A02细胞mdr-1/P-gp表达的影响。方法:采用MTT方法比较Nef,mdr-1 shRNA单独或二者联合对K562/A02细胞增殖的抑制作用;采用RT-PCR和Western印迹法检测mdr-1/P-gp的表达。结果:Nef与mdr-1shRNA联合组对K562/A02细胞的抑制率显著高于mdr-1shRNA,Nef单独处理组(P<0.01);联合组对K562/A02细胞mdr-1/P-gp表达的抑制作用强于单独处理组(P<0.01)。结论:甲基莲心碱能增强mdr-1shRNA表达载体对K562/A02细胞的增殖抑制作用及mdr-1/P-gp表达的抑制作用,逆转mdr-1基因编码蛋白P-gp介导的多药耐药。

Survivin反义寡核苷酸逆转K562/A02细胞的耐药研究

目的:探讨Survivin反义寡核苷酸(an-tisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)对K562/A02细胞耐药的作用和机制。方法:以脂质体转染SurvivinASODN,以MTT法检测多柔比星(adriamycin,ADM)和SurvivinASODN+ADM对K562/A02细胞的IC50,以RT-PCR、蛋白印迹、荧光分光光度计和流式细胞术分别检测SurvivinmRNA、蛋白表达及半胱氨蛋白水解酶-3(Caspase-3)的活性和细胞凋亡的变化。结果:ADM和ASODN+ADM对K562/A02细胞的IC50分别为45·56和19·01mg/L,SurvivinmRNA和蛋白水平表达分别降低36·2%和71·5%,Caspase-3活性增加67·5%,凋亡率较对照组增加[(14·5±5·6)%vs(2·4±1·0%),P<0·05]。结论:SurvivinASODN通过抑制Survivin表达激活Caspase-3,诱导凋亡,逆转耐药。

木犀草素抑制白血病耐药株K562/A02的GST-π表达

目的探讨木犀草素(luteolin)对白血病耐药株K562/A02细胞谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)的影响。方法木犀草素30 mmol/L预处理K562/A02细胞第1、35、d后,MTT法测定阿霉素IC50,采用722分光光度计测定细胞内GSH含量及Western Blot法测定木犀草素处理后GST-π蛋白表达。结果木犀草素对K562/A02的耐药性具有明显的逆转作用,用木犀草素处理后,对阿霉素药物敏感性的相对逆转效率第1、3、5 d分别为10.7%4、2.7%和15.8%;木犀草素显著降低K562/A02细胞内GSH含量,GST-π蛋白的表达于用药后第1、35、d分别下降22%5、6%和34%。结论木犀草素具有较强的逆转K562/A02细胞多药耐药的作用,其逆转机制可能与降低细胞内GSH含量,下调K562/A02细胞GST-π蛋白的表达相关。

基于MOOC的翻转课堂+BOPPPS混合式教学在血液科本科生临床决策能力培养中的应用

目的:探讨基于MOOC的翻转课堂+BOPPPS混合式教学应用于血液科本科生临床决策能力的教学效果。方法:选取2014、2015级浙江大学临床医学专业的实习生,共128名。分别采用基于MOOC的翻转课堂+BOPPPS混合式教学及传统教学,评估教学效果。结果:实验组对新的混合式教学模式认可率较高;两组基础及临床考核成绩比较,有统计学意义(P<0.05)。结论:新的混合式教学模式可更好地促进知识获取,培养临床决策能力,达到教学目的。

沙利度胺联合化疗治疗难治性多发性骨髓瘤16例

目的:观察沙利度胺(thalidomide)联合化疗治疗难治性多发性骨髓瘤(MM)的疗效及副作用。方法:16例难治性MM患者,沙利度胺起始剂量为100mg/d,每周增加剂量100mg/d至不能耐受,应用10～32周,同时每月联合MP或COMP方案化疗,观察疗效。结果:16例患者中,2例获完全缓解,4例部分缓解,有效率为38%。副作用为便秘、乏力、嗜睡,均可耐受。结论:沙利度胺联合MP或COMP方案治疗难治性MM有一定疗效,且副作用小,给药方便,为难治性MM患者提供了一种新的治疗方法。

TBL教学在住院医师规范化培训典型病例讨论中的应用

目的:探讨住院医师规范化培训中基于团队的学习(TBL)应用于典型病例讨论的带教方式。方法:选择浙大二院内科基地39名学员作为研究对象。对照组采用常规病例讨论形式;实验组采用TBL形式。分析两组出科考成绩,评价对TBL方式的满意度。结果:两组学员出科考核总成绩、临床思维与决策能力成绩,实验组显著高于对照组(P<0.05)。TBL在提高课堂学习专注度、提高临床思维与决策能力上评价较高。结论:TBL用于典型病例讨论更有助于提高临床带教效果。

氟达拉滨、米托蒽醌对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226 KM3的增殖抑制作用

目的:观察氟达拉滨、米托蒽醌对两株不同多发性骨髓瘤细胞RPMI8226、KM3体外增殖的抑制作用。方法:采用MTT法观察1.25～20μg/ml氟达拉滨及联合应用米托蒽醌处理RPMI8226、KM3细胞后其增殖的变化。结果:氟达拉滨剂量逐渐增大时,对两株多发性骨髓瘤细胞抑制率逐渐增强(P<0.01)。氟达拉滨对RPMI8226细胞的IC50为5.26μg/ml,对KM3细胞的IC50为4.93μg/ml。氟达拉滨联合米托蒽醌对RPMI8226、KM3细胞的增殖抑制作用显著强于氟达拉滨或米托蒽醌单独处理组(P<0.01)。结论:氟达拉滨对两种不同性质的多发性骨髓瘤细胞株均有明显的杀伤作用。氟达拉滨联合米托蒽醌能更有效地抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖,为临床治疗多发性骨髓瘤提供实验依据。

急性髓细胞白血病转化为慢性粒细胞白血病1例

慢性粒细胞白血病（CML）发病率相对较高,对治疗药物产生耐药性后易进展为急性白血病,其主要为急性髓细胞变,偶见急淋或急性双系列变[1-6]。由急性髓细胞白血病（AML）转化为CML的相关报道在国内外罕见。我院发现的1例AML转化为CML,报道如下。1病历资料患者,男,37岁。2005年于我院确诊为伴成熟型急性髓细胞白血病（AML-M2）,染色体核型分析未见明显异常。

反应停治疗难治多发性骨髓瘤的临床研究

目的:观察沙利度胺(thalidomide,反应停)治疗难治多发性骨髓瘤的疗效及副作用。方法:男性5例,女性4例,均为难治性多发性骨髓瘤,反应停治疗起始剂量为100 mg/d,根据患者耐受情况,逐渐加量,最高达400 mg/d。结果:56%(5/9)的患者对治疗有效,其中2例为完全缓解,2例部分缓解,1例进步,2例无效;患者出现不同程度的嗜睡、便秘、头晕、皮疹等副作用。结论:沙利度胺治疗难治性多发性骨髓瘤有效。