糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)对髓性白血病骨髓细胞黏附功能的影响及机制探讨

为了探讨糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPIPLD)对髓性白血病骨髓单个核细胞黏附功能的影响及其机制,利用具有完整糖基化磷脂酰肌醇(GPI)结构的胎盘碱性磷酸酶(PLAP)做底物,通过TX114分相,定量检测骨髓单个核细胞中GPIPLD活性,用1,10二氮杂菲抑制GPIPLD的活性,用MTT方法检测抑制组和非抑制组骨髓细胞对纤连蛋白的黏附率,用免疫组织化学方法检测GPI锚定蛋白CD24的表达。结果显示:1,10二氮杂菲(1mmol/L)作用骨髓单个核细胞5小时可使细胞的GPIPLD的活性由(42.08±7.21)%降为(5.4±2.96)%,GPIPLD活性被抑制后细胞的黏附率增加,由(49.78±26.73)%升为(61.19±29.14)%,与此同时,CD24的表达率上调,由(16.02±9.68)%升为(18.5±11.14)%。结论:降低GPIPLD活性能增加骨髓单个核细胞对纤连蛋白的黏附率,与此同时,骨髓单个核细胞上GPI锚定蛋白CD24的表达增强。

P73基因在长春新碱诱导髓性白血病细胞系U937细胞凋亡过程中的表达

目的 :探讨长春新碱诱导U937细胞凋亡过程中P73mRNA的表达变化 ,以进一步了解P73基因在U937细胞凋亡中的作用。方法 :用长春新碱诱导U937细胞凋亡 ,凋亡指标采用细胞形态学、DNA片段电泳、流式细胞术检测DNA含量等方法 ;采用半定量逆转录PCR(RT -PCR)检测P73mRNA的表达变化。结果 :长春新碱可诱导U937细胞凋亡。 2 0 μg/ml的长春新碱使用于U937细胞 1 8h ,光镜下见细胞明显聚集、体积缩小 ,荧光染色见染色质明显浓缩、核碎裂等现象 ,而对照组未出现上述现象 ;DNA片段电泳见清晰的梯形条带 ;流式细胞仪检测 :长春新碱作用于U937细胞 1 8h ,2 4h ,细胞的凋亡率分别为 1 0 .54 %、35 .1 5 % ,而对照组的凋亡率仅为 0 .93 % ;半定量RT -PCR结果 :在U937细胞凋亡前后 ,P73mRNA的表达差异无显著性。结论

低龄多发性骨髓瘤一例并文献复习

目的提高对低龄多发性骨髓瘤的认识,减少其误诊率和漏诊率。方法分析1例19岁多发性骨髓瘤患者的实验室检查结果及治疗,并进行相关文献复习。结果患者首先表现为皮肤紫癜,血细胞沉降率明显增快,免疫球蛋白明显增高;后出现骨痛,放射性核素扫描全身骨显像示胸骨、肋骨、脊柱等多处骨质代谢异常;骨髓穿刺涂片显示大量异常原始浆细胞和幼稚浆细胞,成熟红细胞呈缗钱状分布。结论对于皮肤紫癜伴有血细胞沉降率明显增快、免疫球蛋白明显增高、不能用过敏性紫癜等引起紫癜的常见疾病解释者,即使是低龄患者,亦应警惕MM的可能性。

异基因造血干细胞移植术后供体型复发及文献复习

目的 :提高对异基因造血干细胞移植术后供体型复发的认识水平 ,分析其发生原因。方法 :回顾性分析 2 0 0 1年 9月～ 2 0 0 3年 12月在我院行异基因造血干细胞移植术后供者复发 3例的移植前状态、治疗和预后。结果 :3例患者移植后全部重建造血 ,DNA序列分析表明 1个月内移植物植入 ,复发时嵌合体检查为完全供体型。结论 :移植前未达完全缓解 ,或反复复发的白血病患者移植后易复发 ;STR PCR结果显示 。

以特殊症状为首发表现的白血病临床分析

目的讨论以髓外浸润为首发表现的白血病的临床特点,提高对这一类白血病的认识。方法分析3例以髓外浸润为首发表现的白血病患者的临床表现、实验室及影像学检查,并进行文献复习。结果 3例白血病患者在确诊前均分别出现不同的髓外浸润症状:头痛、呕吐及颅骨破坏表现;会阴部感觉障碍,小便失禁;肢体麻木、疼痛。3例患者均经骨髓细胞形态学检查确诊为白血病,经抗白血病治疗,上述浸润症状得到明显改善。结论以颅骨破坏、颅高压、脊髓压迫症等为首发表现的白血病罕见,易给早期诊断带来困难,需提高对这一类白血病的警惕。

8-溴-7-甲氧基白杨素诱导K562细胞凋亡作用研究

本研究探讨8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxyhysin,BrMChR)对人髓系白血病细胞株K562细胞增殖和凋亡的影响及细胞凋亡过程中caspase-3活性与p-Akt蛋白表达的变化。采用MTT方法检测BrMChR对K562细胞生长抑制的影响,用细胞形态学观察和流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot方法检测p-Akt蛋白的表达。结果显示:与同浓度的白杨素(chrysin,ChR)相比,BrMChR对K562细胞的生长抑制作用及凋亡诱导作用更强,并随药物剂量的增加而加强;3μmol/L BrMChR作用K562细胞12小时细胞凋亡率可达21.8%,而同浓度的ChR作用K562细胞12小时细胞凋亡率仅为3.68%。随着BrMChR浓度增加,caspase-3活性增加(p<0.05),p-Akt蛋白表达下调(p<0.01)。结论 :BrMChR能诱导K562细胞凋亡,其作用强于ChR;p-Akt可能参与了BrMChR诱导K562细胞凋亡过程。

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D对髓系白血病骨髓细胞黏附功能的影响及其机制(英文)

背景:据作者查新检索medline,cnki等数据库,鲜见国内外有关体外研究糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(glycosylphosphatidilinoditol-specific phospholipaseD,GPI-PLD)对白血病细胞黏附功能影响方面的报道。目的:观察GPI-PLD对髓系白血病骨髓单个核细胞黏附功能的影响及其机制。设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2004-01/06在湘雅医院血液实验室完成。对象:骨髓标本来自于髓系白血病患者,由湘雅医院血液科提供。方法:利用具有完整糖基化磷脂酰肌醇(GPI)结构的胎盘碱性磷酸酶做底物,通过TX-114分相,定量检测骨髓单个核细胞中GPI-PLD活性,利用1,10-二氮杂菲抑制GPI-PLD的活性,实验分2组:处理组加二氮杂菲,使其终浓度为1mmol/L,对照组加入等量的PBS。用MTT方法检测处理组和对照组骨髓细胞对纤维连接蛋白的黏附率、免疫组织化学方法检测GPI-锚定蛋白CD24的表达。主要观察指标:髓系白血病细胞GPI-PLD活性,细胞黏附率及CD24的表达。结果:1mmol/L1,10-二氮杂菲作用髓系白血病骨髓单个核细胞5h细胞的GPI-PLD活性较对照组降低[(5.40±2.96)%,(42.08±7.21)%,P<0.01];GPI-PLD的活性被抑制后处理组细胞的黏附率较对照组增加[(61.19±29.14)%,(49.78±26.73)%,P<0.01],同时CD24的表达率上调[(18.5±11.14)%,(16.02±9.68),P<0.01]。结论:降低GPI-PLD活性能增加骨髓单个核细胞对纤维连接蛋白的黏附率,同时骨髓单个核细胞上GPI-锚定蛋白CD24表达增强。

如何上好骨髓细胞学实验探讨

骨髓细胞学实验课是实验诊断学的重要组成部分之一,但由于骨髓细胞形态变化多端,学生难以掌握。就中南大学湘雅三医院在骨髓细胞学实验课教学过程中的一些做法和体会进行简要总结以提高骨髓细胞学实验课的教学质量。

急性白血病骨髓单个核细胞糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的表达(英文)

背景:据作者查新检索,国内外有关急性白血病骨髓单个核细胞糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D活性及mRNA表达与白血病类型、患者肝脾淋巴结肿大关系的报道罕见。目的:探讨糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的表达与急性白血病类型、急性髓系白血病患者肝脾淋巴结肿大的关系。方法:急性髓系白血病组骨髓标本43例,急性淋巴细胞白血病组骨髓标本28例,以21例健康志愿者作为正常对照组。密度梯度离心法获得骨髓单个核细胞,用GPI锚定的胎盘碱性磷酸酶作为底物,Triton-X114分相法检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的活性,半定量RT-PCR法检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶DmRNA的表达,并分析糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D活性和mRNA表达水平与急性白血病类型、急性髓系白血病患者肝脾淋巴结肿大的关系。结果与结论:与正常对照组比较,急性髓系白血病组骨髓单个核细胞糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D活性和mRNA表达均明显升高(P<0.01);急性淋巴细胞白血病组骨髓单个核细胞糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D活性和mRNA表达均明显降低(P<0.01)。在43例急性髓系白血病患者中,13例患者检查发现有肝脾淋巴结肿大,30例患者检查无肝脾淋巴结肿大,无肝脾淋巴结肿大标本骨髓单个核细胞糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D活性和mRNA表达均明显高于有肝脾淋巴结肿大标本(P<0.05)。结果证实急性白血病骨髓单个核细胞糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的活性与mRNA变化一致,其表达水平与急性白血病类型及急性髓系白血病患者有无肝脾和/或淋巴结肿大有关。

p73基因在甲氨蝶呤诱导髓性白血病细胞系U937细胞凋亡过程中的表达

为了探讨甲氨蝶呤 (MTX)诱导U937细胞凋亡过程中p73mRNA的表达变化 ,用MTX诱导U937细胞凋亡 ,凋亡指标采用细胞形态学、DNA片段电泳、流式细胞术检测DNA含量及细胞周期的变化等方法 ;采用半定量反转录PCR(RT PCR)检测 p73mRNA的表达变化。研究结果显示 :MTX可诱导U937细胞凋亡。 5 μmol/L的MTX作用于U937细胞 6小时 ,可见部分细胞体积缩小 ,染色质明显浓缩和核碎裂。DNA片段电泳 ,MTX处理组可见清晰的梯形条带。流式细胞仪检测发现MTX作用于U937细胞 6 ,8,10小时 ,细胞的凋亡率分别为 5 .15 % ,11.4 3%和 14 .7% ,并使细胞阻滞在G2 /M +S期 ,而对照组细胞不发生凋亡。半定量RT PCR结果显示在U937细胞凋亡前后 ,p73mRNA的表达无明显变化。结论提示 ,在MTX诱导U937细胞凋亡过程中 。

急性髓系白血病骨髓单个核细胞糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D mRNA的表达与意义

本研究探讨糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(glycosylphosphatidilinoditol-specific phospholipase D,GPI-PLD)在急性髓系白血病病人骨髓单个核细胞中的表达及其意义。采用半定量RT-PCR和酶转化底物的百分率的方法检测急性髓系白血病初发组、难治复发组、缓解组与正常对照组骨髓单个核细胞GPI-PLD酶活性和mRNA表达,并比较它们之间的差异。结果显示:急性髓系白血病初治组骨髓单个核细胞GPI-PLD mRNA表达和GPI-PLD活性分别为1.86±0.32、(46.96±7.15)%;缓解组分别为1.26±0.29和(33.36±5.13)%;难治复发组分别为1.79±0.19和(44.31±7.22)%;而正常对照组分别为1.27±0.23和(35.38±5.15)%。初治组和难治复发组的GPI-PLD活性与mRNA表达均明显高于正常对照组,差异具有统计学意义(p<0.01);而缓解组与正常对照组之间比较,差异无统计学意义(p>0.05)。结论:GPI-PLD活性和mRNA表达水平变化一致;初治组和难治复发组急性髓系白血病病人骨髓单个核细胞GPI-PLD活性与mRNA表达水平明显高于正常组。GPI-PLD是否在白血病的发生、发展过程中发挥一定作用,有待进一步研究。

DLK1在急性白血病中的表达及其在K562细胞红系分化中的作用

目的:探讨急性白血病(acute leukemia,AL)患者骨髓单个核细胞DLK1基因的表达水平及其在K562细胞红系分化中的作用。方法:采用RT-PCR对65例AL患者及34例正常骨髓对照进行DLK1mRNA水平的检测,对其中20例AL患者及13例正常骨髓用Western印迹法检测DLK1蛋白表达水平。培养K562细胞,用氯化高铁血红素(hemin)诱导其分化,观察DLK1在红系分化中的变化。结果:在AL患者和正常骨髓对照的骨髓单个核细胞中DLK1基因均存在明确表达。DLK1mRNA的表达水平AL组高于对照组,差异有统计学意义(P=0.018),但在ALL和ANLL之间DLK1mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05),且DLK1mRNA的表达水平与患者初诊时骨髓原始细胞数、外周血白细胞数及血小板数无关。对部分样品检测DLK1蛋白的表达,发现AL患者DLK1蛋白阳性表达率高于对照组,与mRNA表达趋势一致。在hemin诱导K562细胞向红系分化过程中,DLK1mRNA的表达水平逐渐下降。结论:DLK1基因可能参与了AL的发病过程,但DLK1mRNA的表达水平与AL患者某些临床特征无相关性。DLK1基因可能抑制K562细胞向红系分化。

绿色荧光蛋白(GFP)融合于人整合蛋白α_(Ⅱb)C端不影响α_(Ⅱb) β_3复合物在CHO细胞正常表达

本研究选择αⅡb作为靶蛋白观察绿色荧光蛋白(GFP)标记对αⅡbβ,复合物生物合成过程和表达的影响。 从人αⅡb表达载体p3.1-2b中经PCR扩增的αⅡb基因全长cDNA,插入表达载体pEGFP-N1中构建αⅡbGFP融合蛋 白表达载体,测序正确后利用脂质体将重组质粒与表达人整合蛋白β3亚基的真核表达质粒p3.1-3a共转染CHO 细胞,对转染后细胞用Western blot方法鉴定αⅡbGFP基因在CHO细胞中的表达并用激光共聚焦显微镜确定融合 蛋白的细胞内定位。结果表明:经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒, Western blot证明转基因CHO细胞有人αⅡbGFP基因的表达,融合蛋白细胞内定位研究显示αⅡbGFP可以由内质网 转运至高尔基体。结论:成功构建了人αⅡbGFP融合蛋白真核表达载体;GFP融合于αⅡbC端不影响αⅡbβ3复合物 在CHO细胞的正常表达。

自体造血干细胞移植治疗骨外尤文氏肉瘤1例

患者，女性，15岁，2005年4月因排尿困难一周入院。CT示：盆腔巨大肿块，约12cm×9cm。外院手术失败，转入我院，再次行剖腹术。术中发现肿块位于子宫前与膀胱后，与膀胱三角区紧密相连，与子宫粘连，质地较硬，位置固定，肿块侵犯膀胱壁，血运丰富，不能分离，行活检。腹部B超示：除上述肿块外。盆腔、腹股沟淋巴结肿大．右肾积水伴右侧输尿管扩张。X—ray：未发现骨质异常改变。病理检查：送检组织中见成巢小圆细胞侵润，考虑为淋巴瘤可能性大。免疫组化结果：

甲氨喋呤和三磷酸腺苷诱导U937细胞凋亡机制探讨

目的 :探讨甲氨喋吟、三磷酸腺苷诱导髓性白血病细胞系U937细胞凋亡过程中P73mRNA的表达变化 ,以进一步了解P73基因在U937细胞凋亡中的作用。方法 :用上述药物诱导U937细胞凋亡 ,凋亡指标采用细胞形态学、DNA片段电泳、流式细胞术检测DNA含量等方法 ;采用半定量逆转录PCR (RT -PCR)检测P73mRNA的表达变化。结果 :甲氨蝶呤、三磷酸腺苷均可诱导U937细胞凋亡。 5 μmol/L的甲氨蝶呤和0 .2 5g/L的三磷酸腺苷分别作用于U937细胞 6h、2 4h ,光镜下见细胞明显聚集、体积缩小 ,Wright’s +Giemsa染色见染色质明显浓缩、核碎裂等现象 ,而对照组未出现上述现象 ;DNA片断电泳见清晰的梯形条带 ;流式细胞仪检测 :5 μmol/L的甲氨蝶呤作用于U937细胞 6h、8h、10h ,细胞的凋亡率分别为 :5 .15 %、11.4 3%、14 .7% ,0 .2 5 g/L的三磷酸腺苷作用于U937细胞 2 4h、36h、4 8h细胞的凋亡率分别为 :2 .33%、11.90 %、35 .4 9% ,而对照组的细胞凋亡率分别为 :0 .0 0 %和 1.0 9% ;半定量RT -PCR结果 :与对照组相比 ,仅三磷酸腺苷处理 4 8h组P73mRNA的表达下调。结论 :在U937细胞凋亡过程中P73的mRNA表达差异无统计学意义。

耶鲁-湘雅住院医师规范化培训模式的探索与实践

中南大学湘雅三医院自1989年开始作为住院医师规范化培训试点,2006年与美国耶鲁大学合作实施耶鲁-湘雅卓越住院医师培训项目,借鉴耶鲁的住院医师培训理念,不断探索实践,以培养住院医师6大核心能力为目标。以"精教细训、精管细育、精考细评、精选细荐"为工作方针,逐步构建了管理体系、课程体系、评估体系、考核体系、师资建设5大创新体系,形成了具有湘雅特色的耶鲁-湘雅住院医师规范化培训模式。

核干细胞因子mRNA在原代白血病细胞中的表达

【目的】探讨急性白血病（AL）患者骨髓单个核细胞（BMNC）核干细胞因子（NS）基因的表达水平。【方法】采用半定量RT—PCR方法检测52例AL患者及20例骨髓正常的非恶性血液病（对照）的BMNCNS基因的表达水平。【结果】在52例AL患者的BMNC中均存在NS基因的表达，20例非恶性血液病对照的BMNC极低表达或不表达NS基因。急性淋巴细胞白血病患者和急性非淋巴细胞白血病患者NSmRNA的相对表达量均明显高于对照组（P〈0．01）。但在AL各亚型之间NSmRNA的表达无明显差异（P=0．253），NSmRNA的表达水平与患者初诊时骨髓原始细胞数呈正相关，与外周血白细胞数及血小板数无关。【结论】Ns基因在AI。原代细胞中表达上调，但NSmRNA表达水平与AL患者某些临床特征无相关性。

PDCD5与BCL-2在多发性骨髓瘤中的表达

目的:研究促凋亡基因PDCD5和抑凋亡基因BCL-2在多发性骨髓瘤中的表达情况。方法:免疫组化及逆转录-聚合酶链反应方法(RT-PCR)检测31例及25例正常对照骨髓单个核细胞中PDCD5和BCL-2蛋白及mRNA的表达,用统计软件分析其表达水平之间的关系。结果:MM组PDCD5阳性细胞率(%)和染色强度指数(SII)均显著低于对照组,BCL-2阳性细胞率(%)和SII显著高于对照组,PDCD5蛋白和BCL-2蛋白阳性细胞率(%)呈负相关(r=-0.86,P<0.05)。MM组PDCD5 mRNA的相对表达水平显著低于对照组,BCL-2 mRNA的相对表达显著水平高于对照组,PDCD5、BCL-2 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.90,P<0.05)。结论:MM患者骨髓单个核细胞中,PDCD5蛋白、mRNA表达下调,而BCL-2蛋白、mRNA上调,二者表达水平呈负相关。