跨膜蛋白16A及其抑制剂的研究进展

跨膜蛋白16A(TMEM16A)是一种具有电压依赖性的钙激活氯离子通道,广泛表达于癌细胞中。在多种癌症中,TMEM16A不仅可以调控癌细胞的增殖、侵袭和转移,还与癌症治疗的预后相关。近年来,TMEM16A以及TMEM16A抑制剂在癌症领域的相关研究不断深入。本文总结了近10年来的相关研究,旨在为今后TMEM16A抑制剂在癌症治疗中的临床应用提供新的治疗策略。

羧甲基壳聚糖对豚鼠单一心室肌细胞延迟外向钾电流的作用

研究羧甲基壳聚糖对豚鼠单一心室肌细胞延迟外向钾电流 (IK)的作用 ,从离子通道角度初步探讨其作用机理。应用膜片钳全细胞记录方式 ,设保持电位为 - 50 m V,指令电位为 - 50～ +70 m V,步阶脉冲 1 0 m V,刺激频率 1 Hz,波宽 1 0 0 0 ms,刺激间隔 5s的方波钳制方案。羧甲基壳聚糖能抑制 IK,并呈浓度依赖关系。选择指令电位 +70 m V时给药前后 IK 的变化进行统计 ,当浓度为 0 .1 %时 ,IK由给药前的 1 .1 6± 0 .30 n A减少至药后的 0 .96± 0 .2 7n A(n=4,P<0 .0 1 ) ,其抑制率是 1 7.70± 0 .0 5%。当浓度为 0 .2 %时 ,IK 由给药前的 1 .46±0 .62 n A减少至给药后的 1 .0 6± 0 .49n A(n=4,P<0 .0 1 ) ,抑制率是 2 8.66± 0 .0 6%。其它指令电位下的 IK 的改变也符合此趋势。羧甲基壳聚糖抑制豚鼠单一心室肌细胞延迟外向 K+ 电流。

N-甲基小檗胺对豚鼠单一心室肌细胞ATP敏感钾电流的影响

目的 研究Ｎ甲基小檗胺对豚鼠单一心室肌细胞ＡＴＰ敏感钾电流的作用。方法 膜片钳制技术全细胞记录模式。结果 Ｎ甲基小檗胺抑制心室肌细胞ＡＴＰ敏感钾电流（ＩＫＡＴＰ）且具浓度依赖关系。指令电位为０ｍＶ时，３种浓度Ｎ甲基小檗胺（０－１，１，１０μｍｏｌ·Ｌ－１）可使ＩＫＡＴＰ分别由给药前的（０－４６±０－０９）ｎＡ，（０－４３±０－１５）ｎＡ和（０－４７±０－１０）ｎＡ减少至给药后的（０－３７±０－０７）ｎＡ（ｎ＝４，Ｐ＜０－０５），（０－２９±０－１８）ｎＡ（ｎ＝５，Ｐ＜０－０５）和（０－２１±０－０７）ｎＡ（ｎ＝４，Ｐ＜０－０５）。其抑制率分别为１８－８１％±６－１６％（Ｐ＜０－０５），４１－４７％±２４－０５％（Ｐ＜０－０５）和５５－００％±１２－９４％（Ｐ＜０－０５）。其它指令电位下的ＩＫＡＴＰ的改变也符合此趋势。结论 Ｎ甲基小檗胺阻断豚鼠心肌细胞ＡＴＰ敏感Ｋ＋钾通道。

壳聚糖对豚鼠单一心室肌细胞延迟外向钾电流的作用

研究壳聚糖对豚鼠单一心室肌细胞延迟外向钾电流(I_k)的作用,从离子通道角度初步探讨其作用机理。应用膜片钳全细胞记录方式,设保持电位为-40mV,指令电位为-60～+70mV,步阶脉冲10mV,刺激频率1Hz,波宽300ms,刺激间隔6s的方波钳制方案。结果表明壳聚糖能抑制I_k,并具有浓度依赖关系,能抑制豚鼠单一心室肌细胞延迟外向K^+电流。

PBL+LBL教学法在留学生药理学教学中的应用

探讨PBL+LBL教学法在本科留学生药理学教学中的应用。PBL病例共分3大部分,每部分包括2段内容。评估系统由表格评价系统、期末考试笔试成绩与PBL奖励分数构成。结果显示,老师对学生的评价表中,学生各项总分平均分为(87.5±6.7)分(满分100),专业知识的掌握和小组讨论有明显改善,期末综合分析题平均分为(36.8±3.6)分(满分45分),优于2011级(P<0.01)。PBL奖励分数为(4.0±0.9)分(满分5分)。根据课程种类、教学内容和教学对象,将PBL与LBL有机地统一结合是本科留学生最合理的教学模式。

医学留学生药理学教学方法探索与实践

为提高留学生药理学教学质量,采用PBL+LBL的新型教学方法,通过调查问卷调研、期末考试笔试成绩、PBL奖励成绩等形成性评价体系对中国医科大学留学生药理学教学效果进行客观评价。结果表明,PBL+LBL新型教学方法可激发学生学习兴趣、提高学习主观能动性、增强学生分析与解决问题的综合能力,为医学留学生药理学教学提供了值得推广与应用的新型教学模式。

ceRNA调控miR-145-5p介导肿瘤发生发展的研究进展

miR-145-5p是一种微小RNA分子,基因定位于染色体5q32.1,参与恶性肿瘤的发生发展。竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)与mRNA竞争结合miRNA结合位点,进而调控miRNA的作用,可能参与调控肿瘤的生物学特性。因此,本文就ceRNA靶向调控miRNA-145-5p与肿瘤的发生发展作一综述。

老年女性乳腺浸润性导管癌患者ER等生物标志物对预后的影响

目的探讨老年女性乳腺浸润性导管癌患者雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER-2)的表达及其对患者预后的影响。方法对85例老年女性浸润性导管癌(年龄≥65岁)患者标本,分析ER、PR、HER-2的表达情况与TNM组织学分期、临床分期和肿瘤大小等临床指标的相关性以及患者生存率的关系。结果 ER、PR和HER-2的阳性表达率分别为75.3%、61.2%、16.5%;ER、PR的表达与组织学分级呈负相关(P<0.05),HER-2阳性表达与组织学分级呈正相关(P<0.05);ER、PR、HER-2阳性表达与患者肿瘤大小均无明显相关(P>0.05);乳腺癌中ER阳性表达与患者临床分期呈负相关(P<0.05)。ER、PR阳性对患者无病生存率无影响(P>0.05)。HER-2阳性患者的生存率和无病生存率低于阴性患者(P<0.05)。结论乳腺癌中HER-2表达提示患者预后不良。

跨膜蛋白16F对乳腺癌细胞增殖及迁移的影响

目的探讨跨膜蛋白16F (TMEM16F)在乳腺癌细胞中的表达,阐明敲除TMEM16F对T47D乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。方法应用Western blotting检测MDA-MB-231、T47D乳腺癌细胞TMEM16F蛋白表达。应用CCK-8细胞增殖实验检测敲除TMEM16F对T47D乳腺癌细胞增殖的影响。应用细胞划痕实验检测敲除TMEM16F对T47D乳腺癌细胞迁移的影响。结果 West-ern blotting结果显示,在乳腺癌细胞中有TMEM16F蛋白表达。CCK-8细胞增殖实验结果显示,与Scrambled shRNA组比较,敲除TMEM16F后T47D乳腺癌细胞增殖能力降低(P=0.037 0)。划痕实验结果显示,与对照组比较,敲除TMEM16F后T47D乳腺癌细胞的迁移能力增强(P=0.002 7)。结论 TMEM16F在T47D乳腺癌细胞中高表达,敲除TMEM16F能够抑制T47D乳腺癌细胞增殖而促进T47D乳腺癌细胞迁移。

钙激活氯通道密度调节Anoctamin 1电流作用的研究

目的研究钙激活氯通道(CaCCs)密度对CaCCs蛋白—Anoctamin 1(Ano1)电流特性的调节作用,探讨高表达Ano1促进肿瘤发生的机制。方法瞬时转染Ano1质粒到HEK293细胞,高密度CaCCs通过表达Ano1 24 h获得,低密度CaCCs通过表达Ano16 h获得。膜片钳方法检测钙离子激活的Ano1的全细胞电流。激活电流曲线以指数曲线拟合。结果 Ano1质粒表达6 h的电流密度显著低于表达24 h的电流密度(P<0.05)。在低CaCCs密度时,Ano1的激活电流曲线最适于用单指数拟合,τslow为(292.71±38.11)ms。在高CaCCs密度时,Ano1的激活电流曲线最适于用两指数拟合,τfast为(47.78±4.58)ms;τslow为(385.74±71.44)ms。高CaCCs密度下的Ano1电流比低CaCCs密度下的Ano1电流多了一个快速激活成分(τfast),而高CaCCs密度与低CaCCs密度比较Ano1的τslow差异没有统计学意义(P>0.05)。结论 CaCCs的密度可调节Ano1激活的动力学变化;高表达Ano1可促进CaCCs的激活。

跨膜蛋白16A通过激活表皮生长因子受体信号通路促进乳腺癌细胞增殖的研究

目的探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)在乳腺癌细胞中参与信号通路的富集分析及其对乳腺癌患者预后的影响,探究其对雌激素受体(ER)和孕酮受体(PR)阳性乳腺癌促进增殖作用的机制。方法从公共数据库癌症基因组图谱在线数据库中下载乳腺癌的转录组及临床数据,根据TMEM16A表达的中位值将患者分为高表达组和低表达组,用基因集富集分析进行基因富集和通路分析。用Kaplan-Meier法进行生存分析。用Western Blot方法检测过表达及敲减TMEM16A后ER和PR阳性乳腺癌T47D细胞的TMEM16A蛋白及下游信号通路磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)和EGFR蛋白的表达情况。用CCK-8细胞增殖实验检测乳腺癌T47D细胞转染过表达TMEM16A质粒及用EGFR通路抑制剂后的细胞增殖能力。结果高表达TMEM16A组乳腺癌患者的基因高度富集于EGFR通路、葡萄糖激酶调节蛋白通路和间质表皮转化因子(MET)等通路。Kaplan-Meier生存分析显示:TMEM16A高表达乳腺癌患者预后生存期显著降低,TMEM16A与EGFR共同高表达组的总生存显著低于共同低表达组。Western Blot结果显示:过表达TMEM16A能够增加p-EGFR蛋白表达,反之敲减TMEM16A后p-EGFR蛋白表达水平降低。CCK-8结果显示:转染空质粒与过表达(TMEM16A OE)的相对增殖力分别为(100.00±0)%和(121.40±5.99)%,并且这种促增殖作用可以被吉非替尼所逆转,TMEM16A OE+吉非替尼为(78.26±4.74)%。结论 TMEM16A可能通过EGFR信号通路促进ER、PR阳性乳腺癌T47D细胞的增殖。

基于网络药理学和生物信息学的辛伐他汀分子生物学机制研究

目的通过生物信息学分析研究辛伐他汀作用前后的差异表达基因,找出参与辛伐他汀体内作用的关键基因,并对其所涉及的功能进行分析预测。方法从美国国立生物技术信息中心公共基因芯片数据平台下载辛伐他汀对人外周血单核细胞-巨噬细胞基因表达谱影响的mRNA基因芯片数据集GSE4883,包含辛伐他汀给药组6个样本及对照组3个样本,用R语言Limma函数包筛选差异表达的mRNA,并用Benjamini&Hochberg错误发现率对原始P值进行多重矫正,并进一步用DAVID数据库对靶基因进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,之后用STRING数据库构建蛋白质相互作用网络,同时用Cytoscape对模块中的基因共表达关系进行可视化,筛选关键基因。结果共筛选出214个辛伐他汀作用前后差异表达的基因。GO分析显示,差异表达基因生物学功能主要涉及免疫反应、细胞对白细胞介素-1、干扰素的反应和单核细胞趋化性。KEGG分析显示,差异表达基因主要和细胞因子与细胞因子受体相互作用、类风湿关节炎和趋化因子信号通路等有关。蛋白质相互作用网络筛选出KIF11、CDK1、NDC80、RRM2、NCAPG、NUF2、MAD2L1、KIF15、TOP2A和HELLS 10个关键基因。结论生物信息学能有效筛选和分析辛伐他汀作用后的相关差异表达基因,通过对辛伐他汀作用后的表达谱进行分析,为进一步探讨辛伐他汀作用的分子机制及靶点提供思路,同时为他汀类药物的潜在应用探索提供理论依据。

跨膜蛋白16A分子结构及调控机制研究现状

跨膜蛋白16A(TMEM16A)是一种钙激活氯通道,参与人体多种生理及病理过程,如腺体分泌、高血压和癌症等。TMEM16A电流具有复杂的电压以及钙离子依赖性,但其调控机制并不十分清楚。本文基于最新发现的TMEM16A晶体结构,阐述具有10个跨膜域的TMEM16A二聚体结构,详细介绍TMEM16A通道的钙离子结合位点以及孔道结构以及各种分子亚型,进而总结钙离子/钙调蛋白、跨膜电压、磷酸化、细胞内分子(如膜脂质、质子氢)等对TMEM16A的调控机制。本文通过对TMEM16A分子结构及调控机制研究进展的探讨,有利于深入理解TMEM16A参与的生理过程和病理机制。

ANO1钙激活氯通道生理功能及调节机制概述

Anoctamin 1(ANO1)钙激活氯通道广泛存在于身体各个组织,促进细胞增殖,参与感觉传递,调节血压,促进上皮细胞分泌,促进肿瘤细胞迁移等。ANO1功能异常可导致许多疾病,例如癌症、高血压、胃肠道运动紊乱、囊性纤维化。本文讨论ANO1在心血管、神经系统、消化系统、呼吸系统、泌尿系统发挥的作用,以及钙离子、钙调蛋白、胆固醇、细胞因子等调控ANO1的机制。

TMEM16A在肿瘤中高表达的机制

TMEM16A在多种肿瘤中高表达,是治疗肿瘤的潜在靶点和生物标记物,但TMEM16A在肿瘤发生发展过程中的作用机制尚未阐明。染色体11q13区扩增、转录调控、表观遗传调控和下调microRNA等因素导致TMEM16A高表达。TMEM16A高表达激活MAPK、EGFR、CaMKII和NFB等信号通路参与肿瘤细胞增殖,凋亡,迁移和侵袭。