临床实验室生物安全管理体系的构建与思考

《病原微生物实验室生物安全管理条例》的实施标志着我国对生物安全的管理进入了法制化的轨道.但是近期我国部分省市的临床实验室生物安全现状调查表明,条例颁发几年后,临床实验室的生物安全防护现状仍不容乐观[1].

外源性骨桥蛋白对人大肠癌LS-174T细胞增殖和侵袭能力的影响

目的观察人重组骨桥蛋白(recombinated human osteopontin,rhOPN)对大肠癌LS-174T细胞增殖、侵袭及其相关基因表达的影响,探讨骨桥蛋白在大肠癌演进中的作用。方法添加不同浓度rhOPN于人大肠癌LS-174T细胞培养液中,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验检测细胞的增殖能力,重组人工基底膜实验评价细胞侵袭能力,并运用实时荧光定量RT-PCR检测大肠癌细胞中尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)等mRNA表达水平。结果LS-174T细胞经不同浓度rhOPN作用24h后,实验组的MTT值显著高于对照组(P<0.01),并呈剂量依赖关系。Transwell上室加入5nmol/L、30nmol/L的rhOPN后,实验组LS-174T细胞穿膜数量明显多于对照组(P<0.05)。经5nmol/L、30nmol/L的rhOPN处理24h后,实验组LS-174T细胞的uPA mRNA及VEGF mRNA的表达水平明显高于对照组(P<0.05),而MMP-2 mRNA表达水平与对照组无显著性差别(P>0.05)。结论rhOPN促进人大肠癌LS-174T细胞的增殖,并提高其侵袭能力,可能与uPA和VEGF基因表达上调有关。

1314例肿瘤患者血清GPDA活性变化分析

目的 观察常见肿瘤患者的血清 GPDA活性变化 ,并探讨 GPDA在肿瘤诊断中的应用价值。方法 常规条件下 ,用速率法检测 13种肿瘤共 1314例患者的血清 GPDA活性 ,并分别与 12 2例健康人的血清 GPDA活性进行比较。结果 肝癌患者血清 GPDA活性增高 ;胃癌、肺癌、肠癌、宫颈癌、食管癌、淋巴瘤、鼻咽癌、乳腺癌、卵巢癌等患者的血清 GPDA活性呈不同程度下降 ;甲状腺癌、甲状腺瘤、子宫肌瘤患者该酶活性与正常对照组比较无统计学意义。结论 血清 GPDA测定可作为肝癌、胃癌、肺癌。

血清miR-223的表达及联合CEA、CYFRA21-1对非小细胞肺癌的诊断价值

目的探讨血清miR-223的表达及其联合血清肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）对非小细胞肺癌的诊断价值。方法收集57例非小细胞肺癌患者、30例肺部良性疾病患者和30例正常人血清,提取总RNA后采用RT-PCR方法检测miR-223,同时对CEA、CYFRA21-1进行检测,分析血清miR-223相对表达量及其与NSCLC临床病理特征的关系,评估血清miR-223联合CEA、CYFRA21-1对NSCLC的诊断效能。结果 NSCLC组血清miR-223表达水平显著高于健康组和肺部良性病变组,差异均具有统计学意义（二者的P均〈0.001）,其相对表达量与患者年龄、性别、病理类型、淋巴结转移及CEA、CYFRA21-1的表达无关（P〉0.05）,和临床分期有统计学相关（P〈0.05）。NSCLC患者miR-223、CEA、CYFRA21-1的ROC曲线下面积分别为0.891（95%CI：0.834-0.946）、0.724（95%CI：0.632-0.816）、0.737（95%CI：0.647-0.827）。当miR-223取0.58为其cut off值时,在以健康人为对照组和以肺部良性病变为对照组的敏感性、特异性分别为71.9%、86.7%;63.2%、83.3%,其联合CEA、CYFRA21-1后在上述两组中的敏感性、特异性分别为80.7%、85.4%;78.9%、83.3%。结论 miR-223在NSCLC患者血清中高表达,提示其可作为NSCLC患者早期诊断的潜在标志物之一;并且联合CEA、CYFRA21-1可提高NSCLC的诊断效能。

磁珠核酸提取方法在血浆EBV-DNA实时荧光定量PCR检测中应用的性能评价

目的评价磁珠核酸提取方法在血浆EB病毒DNA(EBV-DNA)实时荧光定量PCR检测中应用的性能。方法采用自动化磁珠法提取核酸,并结合实时荧光定量PCR测定EBV-DNA,利用第三方定值参考物质评价该方法的检测性能。同时选取100例鼻咽癌患者,分别用磁珠法与煮沸法定量检测其血浆EBV-DNA,比较分析两种方法的相关性。结果基于自动化磁珠法的实时荧光定量PCR系统检测EBV-DNA,其低、中、高水平的重复性精密度均<3/5 TEa(TEa=靶值±0.4 lg),中间精密度<4/5 TEa;在5.4×101~5.4×10~5U/mL范围内具有良好的线性;最低检测限约为3.334×10~1U/mL;样本中Hb干扰物浓度低于8.667 g/L,对磁珠法检测结果无明显影响。磁珠法与煮沸法的检测结果呈线性相关,阴阳性符合率为83%。结论采用自动化磁珠核酸提取方法结合实时荧光定量PCR检测血浆EBV-DNA,具备良好的检测性能。

分离胶原始管冻存血清用于酶联免疫吸附试验的可行性探讨

目的探讨用含分离胶的原始样本管冻存血清作为酶联免疫吸附试验（ELISA）的标本的可行性。方法采用ELISA法对分离胶管采集的61例血清样本测定乙肝两对半、丙肝抗体、梅毒抗体、艾滋病抗体等指标,检测完后分别用样本原始管冻存血清及用聚苯烯管分离血清冻存,两者冻存6个月后,再检测上述指标,比较两者的结果。结果用分离胶原始管冻存血清与用聚苯烯管分离血清冻存的定性结果及S/CO值比较差异均无统计学意义。结论用离心后的分离胶原始样本管冻存血清进行ELISA检测是可行的。

含分离胶的样本原管冻存血清的可行性初探

目的探讨生化检验中采用含分离胶的样本原管冻存血清的可行性。方法在全自动生化分析仪上,对分离胶原管冻存血清及常法分离冻存血清进行批内测定,并对检测结果进行比较和评价。结果冻存标本中的分离胶保持完整,绝大多数生化指标与常法冻存血清的检测结果具有良好的可比性。结论直接采用含分离胶样本原管冻存血清作为备查样本的保存手段是可行的。

Coulter HMX血细胞分析仪在白细胞分类计数中的应用评价

目的 评价 Coulter HMX血细胞分析仪在白细胞分类计数中的应用价值。方法 用含 EDTA- K2 抗凝剂的一次性真空采血管采集静脉血 ,分别用血细胞分析仪及人工显微镜下做白细胞分类计数 ,对两者结果进行分析比较。结果 仪器对异常细胞的检出效率为真阳性 34.8% ,假阳性 6 5 .2 % ,真阴性 93.8% ,假阴性 6 .2 %。仪器分类法与手工分类法的相符率为 78.7%。结论 Coulter HMX血细胞分析仪能有效提高白细胞分类计数的效率 。

不作MEDx图利用数学解析法可判断检测方法的分析性能

目的介绍一种判断检测方法分析性能的快捷方法。方法基于Westgard方法性能决定图(MEDxChart)建立数学直角坐标系,以不精密度为X轴,偏倚为Y轴,得到3条总误差判断线TE=bias+2S/3S/4S的直线方程式,借助计算机Excel表格的公式计算函数值,分析判断预期性能点所在位置,即检测方法分析性能。结果 Westgard方法性能决定图将检测方法性能分为不符合要求、临界、良好、优秀4类,传统判断检测方法的性能是通过作MEDx图,标出预期性能点,其所在位置即性能区,而利用数学解析法分析不作MEDx图可判断检测方法的分析性能。结论不作MEDx图利用数学解析法分析判断检测方法的分析性能要比用坐标纸作MEDx图标出性能点的方式易于操作、快捷实用。

食管癌三野根治术围术期心肌损伤标志物的变化

目的了解行三野根治术的食管癌患者围术期心肌损伤标志物的动态变化，评估其监测围术期心肌损伤的价值。方法对96例术前心肌损伤标志物正常的食管癌患者，于术前、术毕、术后1～3d采集静脉血，分别进行谷草转氨酶（AST）、肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶MB同工酶（CK—MB）、心肌肌钙蛋白I（cTnI）等心肌损伤标志物的测定，并对检测结果进行统计分析。结果7例围术期≥1次血清cTnI水平超过参考值范围，其中4例被确诊为心肌损伤。余89例均未发现心肌损伤，但术后1d血清AST、LDH、CK及CK—MB均高于术前。结论食管癌患者围术期心肌损伤的生化监测首选心肌肌钙蛋白。

肿瘤标志物与胃泌素17联合检测在胃癌早期诊断中的分析

目的探讨肿瘤标志物与胃泌素17联合检测在胃癌早期诊断中的应用分析。方法选取住院收治的130例疑似胃癌患者作为本次的研究对象,将其作为研究组,收治时间在2015年2月—2018年1月,另选取同期的胃部良性病变的患者94例,将其作为疾病对照组,对比两组的PGⅠ、PGⅡ、CEA、CA199、CA724与胃泌素17等指标。结果研究组胃癌患者的PGⅠ、CA724均低于疾病对照组,PGⅡ、CEA、CA199、胃泌素17均高于疾病对照组,P <0.05;PGⅠ、PGⅡ、CEA、CA199、CA724及胃泌素17均随着伴随疾病程度的提高而呈持续升高,P <0.05;PGⅡ、CEA、CA199、CA724联合胃泌素17的诊断敏感度、特异度、准确率分别为98.26%、93.33%、97.69%。结论肿瘤标志物与胃泌素17联合检测在胃癌早期诊断中的应用效果显著。

三种核酸提取方法用于检测血浆EBV—DNA的性能及应用评价

目的评价并比较用于检测血浆EBV-DNA的3种核酸提取方法的分析性能及临床应用价值。方法分别采用硅膜离心柱法、浓缩煮沸裂解法或自动化磁珠吸附法平行提取核酸，并通过实时荧光定量PCR测定EBV-DNA。利用第三方定值参考物质，比较三种方法的检测性能，并配对检测100例NPC患者及100名健康体检者血浆，评估3种方法的临床应用价值。结果3种方法提取并检测EBV-DNA的正确度、不精密度均符合要求，且对临床样本的测定结果均呈线性相关。但磁珠法的重复性不精密度和中间不精密度较离心柱法与煮沸法均小且稳定（均〈3%）；最低检测限（约3.334×101 IU/ml）较离心柱法（4.159×101 IU/ml）与煮沸法（8.511×101 IU/ml）稍灵敏；线性范围（5.4×101～5.4×105 IU/ml）较煮沸法（5.4×102～5.4×105 IU/ml）稍宽；抗Hb干扰能力优于煮沸法；而且对NPC样本检测的阳性率及平均病毒载量（95%，8.342×103 IU/ml）均显著高于离心柱法（84%，4.707×103 IU/ml）与煮沸法（78%，2.571×103 IU/ml）（P均〈0.05）。 结论采用自动化磁珠吸附法提取检测血浆EBV-DNA可以实现更好的检测性能，并具备更高的临床应用价值。