造血干细胞移植条件对小鼠造血重建的影响

通过同种基因型小鼠构建造血干细胞移植模型,将预处理的全骨髓单个核细胞或c-Kit+造血干细胞移植至致死剂量照射的受体小鼠体内,动态监测移植2~16周后受体小鼠体内供体来源细胞造血重建以及嵌合情况,以期揭示不同群体的供体细胞以及预处理等因素对小鼠造血干细胞移植后造血重建的影响。实验结果显示,移植后早期(2周)全骨髓单个核细胞组髓系比例要高于c-Kit+细胞移植组,但全骨髓移植组受体小鼠呈现出较大的移植后不良反应,出现脱毛、食欲不振以及体重减轻的症状。c-Kit+细胞移植组在淋系重建上要早于全骨髓移植组,供体细胞的嵌合植入也早于全骨髓移植组,但两组实验组最终均能完成造血重建过程。实验结果表明c-Kit+细胞移植组在移植后能够较快地实现供体细胞植入,进而开始造血重建,且c-Kit+细胞移植组的不良反应要低于全骨髓移植组。结果说明在整体造血重建效果上c-Kit+细胞移植组要优于全骨髓移植组。

泛素蛋白酶体抑制剂在急性髓系白血病中的研究进展

泛素蛋白酶体系统(UPS)在真核生物蛋白质循环中具有重要生物学作用,出现异常可导致肿瘤的发生。目前包括白血病在内的多种肿瘤患者体内均检测到高水平的泛素蛋白酶体活性。泛素蛋白酶体抑制剂通过影响泛素蛋白酶体系统的E3连接酶、去泛素化酶以及蛋白质降解活性位点能够有效地杀伤肿瘤细胞。临床上已经将相关泛素蛋白酶体抑制剂用于治疗血液系统肿瘤,但在急性髓系白血病中的应用相对较少。本文对影响蛋白质泛素化降解不同阶段的抑制剂在急性髓系白血病中的研究进展进行相关总结,为研发急性髓系白血病有效疗法提供新思路。

ASXL1缺失对人白血病HEL细胞生物学特性的影响

目的本研究以携带JAK2 V617F纯合突变的人红白血病细胞HEL为基础,建立ASXL1和JAK2 V617F双突变模型,为研究JAK2 V617F与ASXL1协同参与MPN疾病进展的机制以及寻找新的药物治疗靶点奠定基础。方法利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术建立ASXL1基因敲除的HEL细胞系,并进行一系列细胞功能实验来验证ASXL1敲除对HEL细胞增殖、克隆形成以及对化疗药物的敏感性的影响。结果成功构建ASXL1基因完全敲除的HEL细胞系(HEL-AKO),模拟JAK2 V617F突变与ASXL1基因功能缺失性突变并存。细胞功能实验发现,HEL-AKO细胞较HEL细胞迁移能力变强,增殖能力变慢,细胞周期G 2/M期的进程延长,且HEL-AKO细胞的克隆形成能力减弱,药物敏感实验表明,与HEL细胞相比,HEL-AKO细胞对JAK抑制剂芦可替尼产生一定耐受。结论运用CRISPR-Cas9基因编辑技术能够实现对JAK2 V617F突变的人红白血病细胞系HEL细胞系的特定编辑,且ASXL1基因敲除之后会对HEL细胞的生物学功能产生明显影响。

芦可替尼和地西他滨协同抑制TET2敲降的HEL细胞生长作用

目的探索地西他滨和芦可替尼对TET2敲降HEL细胞的杀伤及协同作用。方法利用shRNA构建TET2敲降的HEL细胞系;利用CCK-8法检测TET2敲降HEL细胞的增殖情况;通过测定半数致死量(IC_(50))和克隆形成实验评价TET2敲降HEL对芦可替尼和地西他滨的敏感性,并结合Chou-Talalay法计算地西他滨和芦可替尼在TET2敲降HEL细胞中的协同抑制效应。结果成功建立TET2敲降HEL细胞系两株,TET2敲降后HEL细胞增殖能力增加。72 h的药物敏感试验证实TET2敲降HEL细胞对地西他滨耐药。另外,克隆形成实验表明,TET2敲降后HEL细胞对芦可替尼和地西他滨的敏感性均有所下降。芦可替尼和地西他滨在TET2敲降HEL细胞中有显著的协同抑制效应。结论地西他滨与芦可替尼协同作用提示其可能是加速急变期JAK2^(V617F)和TET2双突变MPN患者有效的联合用药方案。