抗体修饰DNA测序酶的开发及其应用

【目的】开发一种新型DNA测序酶,解决一代测序技术应对复杂DNA结构模板所面临的主要挑战,如测序信号中断或测序信号快速衰减。【方法】从NCBI数据库中挖掘到了Taq DNA聚合酶和单链结合蛋白SSB基因信息,利用遗传融合、定点突变及基因设计技术获得了一种新型的测序酶Sso-Sequenase。利用亲和层析和离子交换层析,获得了纯化的测序酶。利用抗体修饰技术改良了Sso-Sequenase的性能,并且利用STR技术对其热启动性能进行了表征。选取多组不同类型的复杂模板,采用一代技术对比分析了Sso-Sequenase测序酶试剂盒和传统BigDye测序试剂盒的测序表现。【结果】Sso-Sequenase在大肠杆菌中稳定表达,纯度达到95%以上,产量高达10.5 mg/L。当温度低于35℃时,Sso-Sequenase表现出热启动活性。在复杂模板的一代测序反应中,如重复序列、高GC和发夹结构等样本,Sso-Sequenase测序酶成功完成了所有样本的测序,序列的平均碱基质量QV大于20。相比而言,BigDye测序试剂盒在处理这些复杂样本时,多数样本测序信号出现了显著衰减或中断。【结论】开发了一种纯度好、产量高,兼具热启动活性的DNA测序酶Sso-Sequenase及测序试剂盒,显著提高了复杂DNA结构模板(重复序列、高GC和发夹结构)测序成功率。

质粒DNA Fast NGS测序方法的开发和应用

质粒DNA是最常用的基因运载工具,在基因合成技术中扮演着至关重要的角色。如何实现合成质粒DNA的准确且快速检测,是确保基因组完整性和提高基因合成效率的关键。尽管基于一代DNA的测序方法,其准确性已成为行业标准,但在检测通量、检测速度和检测成本等方面仍然存在局限性,这促使科学家们不断寻求新的解决方案。基于生物酶库,开发了DNA建库酶TN5,建立了高通量质粒DNA检测方案——Fast NGS。利用不同长度、不同质量的质粒DNA样本评估了Fast NGS的可行性,并对质粒DNA样本进行了高通量测序,最后对比了Fast NGS与Sanger测序的效率。结果表明,DNA建库酶TN5蛋白的纯度和质量符合二代测序要求。Fast NGS适用于3~8 kb基因合成质粒的测序检测,其检测通量高达2500个·12 h-1,测序成功率超过95%,测序准确性与一代测序相当,并且无明显序列偏好性。Fast NGS实现了质粒DNA的高通量、快速且低成本检测,为基因合成技术的发展提供了新的方向。

DR与CR诊断肋骨骨折的准确性及敏感性比较

目的探讨DR较CR对诊断肋骨骨折准确性、敏感性及其应用价。方法随机选取骨科收治的肋骨骨折患者120例,对其骨折部位进行CR、DR影像检查,并与后期临床确诊结果进行对比分析,比较两种检查方法成像准确性及对隐匿性骨折检出敏感性。结果 DR检查影像资料质量明显高于CR检查,DR成像胸片达到优级片数量明显高于CR胸片,差异有统计学意义(P <0. 01),两种方法总合格率差异无统计学意义(P> 0. 05); 120例患者经CR检查后发现219处骨折部位,DR检查后发现279处骨折部位,在采取相应的临床治疗后,确诊骨折部位共计298处,其中CR检查标记正确的181处,标记错误8处,漏诊87处; DR检查标记正确的275处,标记错误4处,漏诊23处,DR检查诊断假阳性率稍低于CR检查,但两种方法间比较差异无统计学意义(P> 0. 05),DR检查诊断肋骨骨折漏诊率明显低于CR检查,差异有统计学意义(P <0. 01);对影像易重叠的隐匿部位的成像效果比较发现,CR检查检出隐匿性骨折101处,其中正确79处,DR检查检出隐匿性骨折153处,其中正确143处,DR检查隐匿性肋骨骨折的检出率和正确率明显高于CR检查,差异均有统计学意义(P <0. 01)。结论 DR检查影像资料质量较CR检查更高,在肋骨骨折诊断的准确率及敏感性方面优于CR检查,值得在临床上推广应用。

探究无创通气在急性左心衰治疗中的应用价值

目的:探究和分析急性左心衰患者在常规药物治疗的基础上采用无创通气方法的临床应用价值。方法:选取我院于2014年5月至2017年5月收治的60例急性左心衰患者作为研究对象,随机平均分为研究组、对照组,前组采用无创通气+常规药物治疗,后组采用常规药物治疗,比较两组患者采用不同治疗方式后的临床疗效。结果:两组患者分别采用不同治疗方式后临床症状均有一定程度改善,且研究组总有效率(93.33%)显著高于对照组(73.33%),血氧饱和度、动脉氧分压、左室射血分数等呼吸、心功能指标显著优于对照组,具有统计学差异(P<0.05)。结论:在药物治疗的基础上运用无创通气方法,可有效改善急性左心衰竭患者的通气、换气功能和心功能等病症,临床疗效显著,具有良好的临床运用价值。

流动儿童免疫规划管理干预效果观察

目的:对流动儿童免疫情况进行管理干预,对其干预效果进行讨论研究。方法:参与本实验的流动儿童共230例(开始时间:2016-05),所有儿童均不是本地户籍,其均在本地生活超过3mo以上,对所有儿童进行免疫规划管理干预1年(截止时间:2017-05),对干预前后儿童免疫规划各指标数据进行比较核算。结果:相比于规划管理前,流动儿童免疫规划管理干预后国家免疫规划疫苗疫苗接种率和建卡率均更高(P<0.05),免疫规划管理干预后流动儿童的疫苗接种率更高。结论:对流动儿童进行免疫规划管理干预能够从根本上改善儿童的免疫情况,加强相关部门对流动儿童疫苗接种的重视程度,提高儿童的疫苗接种率,这对于保证儿童健康成长具有重要意义。

鲤、鲢、鳙、草鱼消化道消化酶种类和活性的比较研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法研究了鲤、鲢、鳙、草鱼亲鱼消化道消化酶的种类;用比色法及滴定法分别测其消化酶相对活性。结果表明:鲤、鲢、鳙、草鱼4种鱼消化道的蛋白酶、淀粉酶活性与食性有明显的相关性。其中,蛋白酶活性依次为鲤>鲢>鳙>草鱼;淀粉酶活性依次为草鱼>鲤>鳙>鲢。脂肪酶活性与食性的关系不明显。四种鱼消化酶的表达与消化道的组织结构特征相一致,消化道前2/5部位(G1、G2)的消化酶活性最高,是无胃鱼消化道的主要消化场所。消化道中央部位(G3)的消化酶活性次之,能将未消化完全的食糜进一步消化,而消化道后段(G4、G5)消化酶活性最低。可见,消化酶活性及消化功能呈递减形式,食物在消化道中随着消化、吸收,逐渐排出体外。本研究为鲤、鲢、草鱼、鳙4种鱼的营养生理学、高效饲料配比的研制及种质资源的科学管理提供理论依据。

重症肺炎致急性呼吸窘迫综合征患者血NT-proBNP、cTnI水平的临床观察及其与炎性反应的相关性研究

目的本研究通过观察重症肺炎致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者血N末端B型钠尿肽前体(NT-proBNP)、肌钙蛋白I(cTnI)水平及其与C-反应蛋白(CRP)之间的关系,从而进一步深入探讨ARDS,尤其是ARDS后继发心肌损伤的病理生理过程及临床意义。方法将确诊为重症肺炎致ARDS的患者33例分为轻度、中度、重度3组,收集患者入院时血气分析、CRP、NT-proBNP、cTnI等相关指标数据,并进行统计学分析。结果重度组NT-proBNP水平明显高于轻、中度组(P<0.01),中度组NT-proBNP水平也较轻度组升高(P<0.05);重度组cTnI水平与轻、中度组比较明显增高(P<0.01),而轻、中度组间比较差异无统计学意义(P>0.05);3组间CRP水平也有随着病情加重而逐渐升高,重度组CRP水平显著高于轻度组(P<0.05);ARDS患者血NT-proBNP水平与CRP水平呈显著正相关(P<0.05),且与cTnI水平呈正相关关系(P<0.05)。结论 ARDS病程中过度活化的炎性反应很可能直接参与并介导心肌损伤的病理生理过程;联合NT-proBNP、cTnI检测对ARDS病程早期评价,及早期实施器官功能保护有着重要临床意义。

卒中协调员及卒中护理小组在急性缺血性脑卒中急诊救治中的作用观察

目的:分析设立“卒中协调员”及“卒中护理小组”在急性缺血性脑卒中(AIS)救治的作用。方法:选取2019年10月—2020年10月在佛山市第二人民医院急诊科确诊为AIS并接受静脉溶栓的47例患者作为观察对象。2019年10月—2020年5月时段的21例患者(为卒中中心创建阶段及运行初期)为对照组,执行原版急诊救治流程;2020年7月—10月时段26例患者(为卒中协调员及卒中护理小组成立并进入正常工作状态,卒中中心进入正常运行阶段)为观察组,执行新版急诊救治流程。比较两组患者基本情况、各种检查、治疗时间及治疗效果。结果:观察组DNT、入门-CT开始时间以及CT完成-溶栓开始时间等短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组入门-抽血完成时间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。溶栓前后NIHSS评分对比,对照组溶栓后即刻较溶栓前有明显下降,溶栓后7 d较溶栓前亦存在明显下降;观察组溶栓后即刻较溶栓前有明显下降;溶栓后7 d较溶栓前亦存在明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组溶栓后即刻临床症状改善率(57.69%)高于对照组(42.86%);观察组溶栓后7 d临床症状改善率(84.62%)高于对照组(76.19%),差异无统计学意义(P>0.05)。结论:设立“卒中协调员”和“卒中护理小组”并充分发挥其协同作用,可明显缩短急性缺血性脑卒中各抢救环节所用时间,可改善患者预后。

高校财务管理统一核算的思考

高校财务管理统一核算的思考◇肖晓文一计划经济时期高等学校的经费来源完全是国家财政预算拨款，财务工作只是单纯的记帐、算帐、报帐和简单比较分析，财务管理基本上不涉及搞活、用活资金的功能。随着社会主义市场经济的建立，高等学校教育体制改革和高等学校经济的建立...

600MW超临界机组RB功能控制策略及应用研究

以惠来靖海电厂600MW超临界机组为例,针对超临界机组故障减负荷(runback,RB)功能的稳定投运对提高机组运行安全性、经济效益和社会效益的重要作用,研究和分析了超临界机组送引风机RB、给水泵RB、一次风机RB和空气预热器RB的控制策略、超临界直流炉RB动态特性、具体优化措施和现场试验情况,对同类机组RB试验的实施提供参考依据。

合流制排水系统雨季污染物溢流的截流与调蓄控制研究

截流式合流制排水系统是我国主要的排水体制之一。以昆明市主城区明通河合流制排水系统为背景,研究了雨季产污及迁移规律及削减入湖污染物的措施,并进行了工程示范。示范研究结果表明,在CODCr截留率小于80%、截流倍数n0=1-3、调蓄量2-20 mm（以不透水地面计）,提高截流倍数或调蓄量均可显著提高污染物截留率。截流倍数与调蓄量可表述为截留系数的函数,截流倍数增加1等效于调蓄量增加8 mm,截留系数为CODCr截留比率的幂函数。

幼儿心理健康教育中家园合作策略探讨

幼儿园的一个重要合作伙伴是每个在园幼儿的家庭。对幼儿的健康互动,特别是幼儿心理健康教育来说,家庭的积极配合能促进幼儿全面发展,为有效实施幼儿心理健康教育奠定基础并提供条件。提出幼儿心理健康教育中的家园合作策略,为相关实践工作提供参考,是自觉的幼儿工作者应作的功课。

龙泉山上客家人

在成都东郊的龙泉山西麓,有一历史悠久,古风犹存的小镇,该镇唐时建成,因绕镇而过的小溪形如玉带,故名洛带。这里距成都市区不过20多公里,然而人们的语言竟似广东岭南话。比如“你吃饭没有?”洛带人说作“伲食饭咧?”“你的衣服如何卖?”被说作“伲格衫两门子埋?”置身其间,人们仿佛到了异地他乡。这种语言,四川人称之为“

长江沿岸四市经济外向型程度仍需提升

四川长江流域经济带包括成都、宜宾、泸州和攀枝花四市（以下简称长江四市）。该地区不仅拥有得天独厚的长江航道水运优势，而且拥有全国第三大航空港，是四川连接滇黔渝的重要通道，也是四川克服物流短板，打通向东向南出海口的重要通道。

2013年上半年四川外贸增速回落

据海关统计，2013年1～6月四川省实现对外贸易进出口总额299．5亿美元，比去年同期（下同）增长6．5％，低于同期全国8．6％的整体进出口增速。其中出口总值为195．9亿美元，增长4％，同期全国整体出口增长10．4％；进口总值为103。6亿美元，增长11．5％，同期全国整体进口增长6．7％。1～6月四川外贸进出口总值列全国第11位，其中，出口值列全国第11位；进口值列全国第12位。6月四川外贸进出口总值为43．2亿美元，同比下降24．9％，这也是继今年5月后，全省外贸进出口总值再现负增长，环比亦下降12．6％。其中出口27．6亿美元，同比下降32％，环比亦下降12．1％；进口15．6亿美元，同比下降8％，环比亦下降13．4％。

2013年一季度四川外贸进出口快速增长

一季度四川外贸进出口总值列全国第10位，居中、西部之首，落后于辽宁，领先于河北。其中，出口总值列全国第10位，落后于天津，领先于重庆；进口总值列全国第12位，落后于黑龙江，领先于河南。据海关统计，2013年第一季度四川省实现对外贸易进出口总额150．4亿美元，比去年同期（下同）增长42．1％，远高于同期全国13．4％的整体进出口增速。

矿砂进口:资源为王的时代来临——2007年我国矿砂进口情况

近年来全球性钢铁及有色金属市场快速升温，一路走高的价格极大地刺激了国内产能的扩张，铁、铝、锰等各类矿砂进口快速增长。目前我国已是世界上最大的铁矿石、煤、铝、铜、镍等资源消费国，其中铁矿石消费量占世界消费总量的47％、铝占32％、铜占25％，且这一串数字还在上升之中，据世界第二大矿业公司——英国力拓集团首席执行官汤姆·阿尔巴尼预测，再过几年上述三个比例将分别增至58％、45％和33％。

2014年前三季度四川外贸 9月进出口增速略有下降

据海关统计，今年1～9月四川省实现对外贸易进出口总值3208．4亿元人民币，较去年同期（下同）增长11．9％，同期全国整体进出口略增1．8％。其中出口2062．1亿元，增长11％，同期全国出口增长3．6％；进口1146．3亿元，增长13．4％，同期全国进口下降0．1％。

前三季度四川外贸：进出口保持增长进口再创新高

据海关统计，2013年1～9月四川累计实现对外贸易进出口总额460．4亿美元，比去年同期（下同）增长7％，进口总值为162．4亿美元，增长7．4％，同期全国整体进口增长7．3％。

欧盟“双绿指令”:挑战还是契机?

今年7月1日,欧盟《关于在电子电器设备中禁止使用某些有害物质指令》(ROHS)开始实施,如果说去年8月13日欧盟实施的《关于报废电子电器设备指令》(WEEE)还只是给国内企业增加了出口成本的话,ROHS指令则将众多的不能达标的中国机电产品直接拒之于欧盟市场之外,企业要么更多地转向其他市场,要么尽快引进、采用不含铅、汞、镉等6种有害物质的新工艺、新技术,而对于在激烈竞争中苦战的四川家电企业而言欧盟的“双绿指令”无疑是一味苦药,但另一方面,新的标准在推动市场竞争方式转变的同时也为经济后发地区的企业,提供了一个迎头赶上的契机。