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非洲猪瘟病毒无标签重组K205R抗原制备与应用
被引量:
7
1
作者
肖景景
卢会鹏
+10 位作者
李洋洋
周晓慧
刘晓明
胡威
张晓凯
徐保娟
崔晓霞
张鑫宇
张泉
夏晓莉
孙怀昌
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
北大核心
2019年第3期90-94,100,共6页
为建立敏感、特异的非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体检测方法,将ASFV K205R基因与类弹性蛋白多肽(ELP)进行融合表达,用相变循环纯化ELP-K205R融合蛋白,用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,用相变循环回收K205R蛋白,用抗体阳性血清...
为建立敏感、特异的非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体检测方法,将ASFV K205R基因与类弹性蛋白多肽(ELP)进行融合表达,用相变循环纯化ELP-K205R融合蛋白,用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,用相变循环回收K205R蛋白,用抗体阳性血清对重组K205R蛋白进行ELISA鉴定。结果表明:重组大肠埃希菌能正确表达ELP-K205R融合蛋白,相变循环纯化的融合蛋白纯度大于80%;TEV蛋白酶活性包涵体能有效切割ELP标签,回收的重组K205R蛋白纯度大于95%,能被特异抗体阳性血清识别;重组K205R抗原与抗体阴性猪血清反应阴性,与抗体阳性猪血清反应阳性,D450nm值与血清稀释倍数具有线性相关性。用重组K205R抗原对已知猪血清进行ELISA检测,结果显示24份ASFV抗体阳性血清为检测阳性,24份ASFV抗体阴性血清为检测阴性,检测符合率为100%。这一研究提示制备的无标签重组K205R抗原可用于ASFV抗体检测。
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关键词
非洲猪瘟病毒
无标签K205R抗原
制备
抗体检测
下载PDF
职称材料
非洲猪瘟病毒强免疫原性重组CD2v抗原的制备与初步应用
被引量:
11
2
作者
周晓慧
肖景景
+3 位作者
张鑫宇
张泉
夏晓莉
孙怀昌
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第10期2472-2480,共9页
旨在获得非洲猪瘟病毒(ASFV)强免疫原性重组CD2v抗原,利用生物信息学软件进行CD2v抗原指数分析,将其细胞质内免疫显性区与类弹性蛋白多肽(ELP)在重组大肠杆菌中进行融合表达,对ELP-CD2v融合蛋白的相变循环(ITC)条件进行优化,在优化条件...
旨在获得非洲猪瘟病毒(ASFV)强免疫原性重组CD2v抗原,利用生物信息学软件进行CD2v抗原指数分析,将其细胞质内免疫显性区与类弹性蛋白多肽(ELP)在重组大肠杆菌中进行融合表达,对ELP-CD2v融合蛋白的相变循环(ITC)条件进行优化,在优化条件下进行融合蛋白纯化,利用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,通过免疫转印法对重组CD2v抗原进行鉴定,利用重组CD2v抗原建立ELISA抗体检测方法,与多抗原ELISA对ASFV抗体阳性和阴性血清进行平行检测。结果显示,ELP-CD2v融合蛋白获得正确、可溶性表达,ITC条件为28℃和1.5 mol·L^-1 NaCl,在0.2%Triton X-100存在下进行ITC,纯化的融合蛋白纯度为76.3%;TEV蛋白酶活性包涵体能有效切割ELP标签,再次ITC回收的重组CD2v抗原纯度为91.7%,能被ASFV抗体识别;根据多抗原ELISA检测结果选择血清样品,用重组CD2v抗原ELISA进行检测,结果显示,15份ASFV抗体阴性血清均为CD2v抗体检测阴性,15份ASFV抗体阳性血清均为CD2v抗体检测阳性。这些研究结果表明,ASFV的CD2v蛋白胞内区存在强免疫原性表位,其重组抗原有望用于CD2v的抗体检测。
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关键词
非洲猪瘟病毒
CD2v蛋白
强免疫原性抗原
初步应用
下载PDF
职称材料
题名
非洲猪瘟病毒无标签重组K205R抗原制备与应用
被引量:
7
1
作者
肖景景
卢会鹏
李洋洋
周晓慧
刘晓明
胡威
张晓凯
徐保娟
崔晓霞
张鑫宇
张泉
夏晓莉
孙怀昌
机构
扬州大学兽医学院/江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
青岛易邦生物工程有限公司
江苏农牧科技职业学院
出处
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
北大核心
2019年第3期90-94,100,共6页
基金
国家重点研发计划项目(2017YFNC0201303、2018YFC0840404-3)
江苏高校优势学科建设工程项目(PAPD)
文摘
为建立敏感、特异的非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体检测方法,将ASFV K205R基因与类弹性蛋白多肽(ELP)进行融合表达,用相变循环纯化ELP-K205R融合蛋白,用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,用相变循环回收K205R蛋白,用抗体阳性血清对重组K205R蛋白进行ELISA鉴定。结果表明:重组大肠埃希菌能正确表达ELP-K205R融合蛋白,相变循环纯化的融合蛋白纯度大于80%;TEV蛋白酶活性包涵体能有效切割ELP标签,回收的重组K205R蛋白纯度大于95%,能被特异抗体阳性血清识别;重组K205R抗原与抗体阴性猪血清反应阴性,与抗体阳性猪血清反应阳性,D450nm值与血清稀释倍数具有线性相关性。用重组K205R抗原对已知猪血清进行ELISA检测,结果显示24份ASFV抗体阳性血清为检测阳性,24份ASFV抗体阴性血清为检测阴性,检测符合率为100%。这一研究提示制备的无标签重组K205R抗原可用于ASFV抗体检测。
关键词
非洲猪瘟病毒
无标签K205R抗原
制备
抗体检测
Keywords
African swine fever virus
tag-free K205R antigen
preparation
antibody detection
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
非洲猪瘟病毒强免疫原性重组CD2v抗原的制备与初步应用
被引量:
11
2
作者
周晓慧
肖景景
张鑫宇
张泉
夏晓莉
孙怀昌
机构
扬州大学兽医学院
江苏农牧职业技术学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第10期2472-2480,共9页
基金
国家重点研发计划项目(2017YFD0502303
2018YFC0840404-3)
江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)。
文摘
旨在获得非洲猪瘟病毒(ASFV)强免疫原性重组CD2v抗原,利用生物信息学软件进行CD2v抗原指数分析,将其细胞质内免疫显性区与类弹性蛋白多肽(ELP)在重组大肠杆菌中进行融合表达,对ELP-CD2v融合蛋白的相变循环(ITC)条件进行优化,在优化条件下进行融合蛋白纯化,利用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,通过免疫转印法对重组CD2v抗原进行鉴定,利用重组CD2v抗原建立ELISA抗体检测方法,与多抗原ELISA对ASFV抗体阳性和阴性血清进行平行检测。结果显示,ELP-CD2v融合蛋白获得正确、可溶性表达,ITC条件为28℃和1.5 mol·L^-1 NaCl,在0.2%Triton X-100存在下进行ITC,纯化的融合蛋白纯度为76.3%;TEV蛋白酶活性包涵体能有效切割ELP标签,再次ITC回收的重组CD2v抗原纯度为91.7%,能被ASFV抗体识别;根据多抗原ELISA检测结果选择血清样品,用重组CD2v抗原ELISA进行检测,结果显示,15份ASFV抗体阴性血清均为CD2v抗体检测阴性,15份ASFV抗体阳性血清均为CD2v抗体检测阳性。这些研究结果表明,ASFV的CD2v蛋白胞内区存在强免疫原性表位,其重组抗原有望用于CD2v的抗体检测。
关键词
非洲猪瘟病毒
CD2v蛋白
强免疫原性抗原
初步应用
Keywords
African swine fever virus
CD2v protein
highly immunogenic antigen
preliminary application
分类号
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
非洲猪瘟病毒无标签重组K205R抗原制备与应用
肖景景
卢会鹏
李洋洋
周晓慧
刘晓明
胡威
张晓凯
徐保娟
崔晓霞
张鑫宇
张泉
夏晓莉
孙怀昌
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
北大核心
2019
7
下载PDF
职称材料
2
非洲猪瘟病毒强免疫原性重组CD2v抗原的制备与初步应用
周晓慧
肖景景
张鑫宇
张泉
夏晓莉
孙怀昌
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
11
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职称材料
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