恶性疟原虫重组蛋白HGXPRT免疫原性及免疫保护作用的研究

目的探讨在毕赤酵母中表达的恶性疟原虫重组蛋白次黄嘌呤-鸟嘌呤-黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGX-PRT)诱导小鼠产生的免疫原性和免疫保护作用。方法35只BALB/c小鼠随机分为HGXPRT+ISA720实验组、HGXPRT+福氏佐剂试验组、ISA720对照组、福氏佐剂对照组和空白对照组等5组。HGXPRT(50μg/200μl)经小鼠后腿皮下免疫3次,间隔3周。每次免疫后2周尾静脉采血,ELISA检测血清特异性抗体水平。以间接免疫荧光试验(I-FAT)分析免疫血清对恶性疟原虫天然抗原的识别情况。于末次免疫后10d,各组小鼠经腹腔攻击感染约氏疟原虫致死株105个,继而每隔1d采尾血制薄血片,观察原虫感染的动态变化。结果重组蛋白HGXPRT经与佐剂乳化后免疫的小鼠均诱导出针对HGXPRT的体液免疫应答,3次免疫后血清中特异性抗体滴度达到1∶105以上,而两佐剂组和空白对照组小鼠均未产生特异性抗体。经HGXPRT诱导血清能识别恶性疟原虫天然HGXPRT抗原。经约氏疟原虫致死株攻击感染后4d,两佐剂对照组和空白对照组疟原虫感染高峰相比实验组提前1d。HGXPRT+ISA720实验组平均原虫率(29.3%)明显低于ISA720对照组(70.0%)和空白对照组(70.0%)(P<0.05);HGXPRT+福氏佐剂实验组平均原虫率(51.0%)亦明显低于福氏佐剂对照组(60.7%)与空白对照组(70.0%)(P<0.05)。结论恶性疟原虫重组蛋白HGXPRT对小鼠有较强的免疫原性,产生的抗体能识别恶性疟原虫HGXPRT天然蛋白,并对疟原虫攻击感染后的小鼠有一定免疫保护作用。

牛裂体吸虫线粒体DNA序列和基因排序分析

目的为探讨牛裂体吸虫(Schistosoma bovis)在裂体属内的系统发生位置,测定牛裂体吸虫线粒体基因部分序列,并分析该编码区域的基因序列和基因排序。方法以GNT-K法抽提牛裂体吸虫成虫基因组DNA,用兼并和特异引物扩增目的基因。扩增产物经纯化后克隆于pGEM1T质粒载体,并转化大肠埃希菌。抽提和纯化阳性质粒DNA,并测序。以纯化后的阳性质粒DNA为模板,根据已获得的序列设计内部特异引物,采用引物步移法获得全长目的片段。在GenBank中查找曼氏血吸虫等相关血吸虫线粒体基因序列,作基因排序及比较分析后,以邻接法绘制系统发生树。结果测定了牛裂体吸虫线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基Ⅳ～Ⅰ基因序列(nicotinamide adeninedinucleotide dehydrogenase subunit4-1gene,nad4-nad1),其长度为2214bp。分析该编码区基因排序为nad4-trnQ(Gln)-trnK(Lys)-nad3-trnD(Asp)-nad1。牛裂体吸虫在该区域的线粒体基因排序与非洲支系血吸虫相似,与亚洲支系血吸虫有很大的不同;根据牛裂体吸虫与其他8种吸虫部分nad4,nad3,部分nad1和部分nad4+nad3+nad1基因序列比对结果,分别构建系统发生树。结果表明,牛裂体吸虫与埃及血吸虫位于同一簇,归属于非洲血吸虫支系,这与由基因排序推测的牛裂体吸虫的系统发生位置结果相一致。结论牛裂体吸虫属于非洲支系而非亚洲支系血吸虫。

感染伯氏疟原虫的小鼠树突状细胞体外扩增培养及形态观察

目的:体外诱导和扩增感染伯氏疟原虫小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),并探讨其与疟疾发病机制的关系。方法:感染伯氏疟原虫的BALB/c实验小鼠组与正常对照组小鼠各7只,将其股骨骨髓细胞分离。去除悬浮细胞,贴壁细胞中加入细胞因子(IL-4和GM-CSF)继续进行培养,2周后,诱导的DC经相差显微镜进行观察。结果:DC在体外经细胞因子的刺激可增殖,但实验组小鼠DC增殖速度和数量明显低于对照组小鼠(P<0.05)。结论:感染伯氏疟原虫的小鼠DC形态和数量的改变,可能由此导致其功能的改变,这可能是造成疟疾患者感染持续发展的原因之一。

细胞因子IL-4对小鼠骨髓来源树突状细胞培养的影响

目的:建立从小鼠骨髓中分离、纯化、培养、扩增树突状细胞(DC)前体的方法,研究细胞因子IL-4对小鼠DC体外增殖、分化成熟的影响.方法:将健康小鼠股骨骨髓细胞分离,去除悬浮细胞,将贴壁细胞分为2组,第1组加入重组细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)培养;第2组加入GM-CSF和白细胞介素-4(IL-4)联合培养.诱导的DC经相差显微镜观察.结果:分离的DC前体经8～9d的培养,镜下随机取8个视野进行细胞计数,第1组细胞数量是85.38±3.42;第2组细胞数量是119.25±3.96,两组间DC数量有显著差异(t=3.19,P<0.05).且细胞纯度达90%以上,具有典型的树枝状或裙褶状突起.结论:用GM-CSF和IL- 4联合作用更能促进DC的体外扩增及分化.

小鼠树突状细胞的体外扩增培养及形态观察

目的:建立体外诱导和扩增小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)的方法,并进行形态学观察。方法:将健康小鼠股骨骨髓细胞分离,去除悬浮细胞,贴壁细胞中加入细胞因子(IL-4和GM-CSF)继续进行培养,2周后,诱导的DC经相差显微镜和透射电镜进行观察。结果:培养的DC表面有几个大而长的突起,具有DC的典型形态学特征。结论:小鼠骨髓细胞经贴壁处理后,加入细胞因子(IL-4和GM-CSF)进行培养是可行的,采用这种方法能获得大量较高纯度的具有典型形态特征的DC。

华支睾吸虫病患者细胞因子水平与肝功能关系的研究

目的 探讨华支睾吸虫病患者细胞因子水平与肝功能的关系。 方法 47例确诊、但未经药物治疗的华支睾吸虫病患者 ,参照Child Pugh肝功能分级法 ,按照评分将其分成A ( 3～ 4分 ) 2 0例、B( 5～ 6分 ) 15例、C( 7～ 9分 )12例等 3组。用放射免疫法及双抗体夹心酶联免疫吸附测定 (ELISA)法 ,检测血清白细胞介素 2 (IL 2 )、可溶性白细胞介素 2受体 (sIL 2R )、白细胞介素 8(IL 8)、肿瘤坏死因子α(TNF α) ;用全自动生化分析仪检测患者血清总胆红素(TBL)、血清白蛋白 (ALB)、丙氨酸氨基转移酶 (ALT)。并进行统计分析。 结果 华支睾吸虫病患者sIL 2R、IL 8、TNF α水平明显高于健康人对照组 (P <0 0 5 ,P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,而IL 2含量明显减少 (P <0 0 1)。随着患者肝功能受累程度的加重 ,sIL 2R、IL 8、TNF α含量依次递增 ,IL 2含量依次递减 ,A组和C组间差异具有显著性意义 (P <0 0 5 )。sIL 2R、TNF α含量与其TBL(r =0 3 3 1 P <0 0 5 ,r =0 5 18 P <0 0 1)及ALT (r =0 475 P <0 0 1,r =0 2 85 P <0 0 5 )呈正相关 ,与ALB呈负相关 (r =-0 3 19 P <0 0 5 ,r =-0 665 P <0 0 1)。 结论 华支睾吸虫病患者细胞免疫功能降低 ,血清IL 2、sIL 2R、TNF

旋毛虫感染小鼠血清干扰素-γ、白介素-4含量的变化

目的通过检测血清干扰素(IFN)-γ、白介素(IL)-4的含量,探讨小鼠感染旋毛虫后免疫功能的变化。方法将70只小鼠随机分为两组,模型组每只小鼠喂食感染旋毛幼虫200条,对照组小鼠不做处理,分别于小鼠感染旋毛虫后第7、14、21、28、35天,随机取模型组和对照组小鼠,常规眼眶静脉取血分离血清,用ELISA法测定IFN-γ、IL-4的值。结果模型组IFN-γ分泌水平在感染后7 d达峰值,感染后14和21 d水平虽有下降但仍高于对照组(P<0.05),至感染后28、35 d与对照组相比无差异。模型组IL-4分泌水平于感染后14 d达峰值,随后缓慢下降但始终高于对照组(P<0.01)。结论旋毛虫感染小鼠细胞免疫和体液免疫均成功地建立和转化,体液免疫在清除旋毛虫过程中至关重要。

留学生人体寄生虫学教学初探

针对留学生英语水平高、发音不标准、知识水平及个体素质差异大、组织纪律性差等特点分析,提出在以下四方面来解决这些问题:激发学习兴趣,鼓励课堂互动;强调自主学习,侧重个别指导;提高学生素质,考察学习效果;采取赏识教育,及时提出期望进行鼓励,取得了良好的效果。

临床基础课互交式教学模式的探索

本文针对临床基础课的特点,在实践中通过调整教学计划、教学重点、课堂上以病例导学式教学法为中心、开辟临床基础课学习园地、改革其考试内容、建立实用的小型实习基地、全面提高临床基础课教师的素质等多种途径,力求改革临床基础课的课程设置,建立符合其特点的互交式教学模式,以适应实用型、创新型人才培养的机制.

基于线粒体nad4基因探讨土耳其斯坦东毕吸虫的系统发生位置

为探讨土耳其斯坦东毕吸虫在血吸虫中的系统发生位置,本研究设计一对特异性引物,通过PCR方法对土耳其斯坦东毕吸虫(绵羊源)线粒体烟酰胺脱氢酶亚基Ⅳ基因(nad4)进行扩增和测序分析,并与GenBank中相关血吸虫nad4基因进行比对。结果显示,本研究克隆的该吸虫线粒体nad4基因序列大小约为1030bp,与已发表的其它血吸虫线粒体nad4基因的同源性为51.6%～66.7%,其系统发生位置属于非洲血吸虫种群。

华支睾吸虫病患者血清sVCAM-1水平的动态观察

目的:探讨华支睾吸虫病患者可溶性血管内皮细胞粘附分子(sVCAM-1)和白细胞介素4(IL-4)水平的变化及临床意义。方法:采用双抗体夹心EL ISA法、放射免疫法,分别检测患者血清中sVCAM-1和IL-4的含量。结果:华支睾吸虫病患者sVCAM-1和IL-4的水平明显增高,与对照组相比有显著差异(P<0.01)。结论:sVCAM-1和IL-4通过多种免疫调控作用,参与了华支睾吸虫病的发病过程。