绝经后骨质疏松症与血清中BCL-2、Bak相关性研究

目的：研究绝经后骨质疏松症与血清中Bcl-2、Bak蛋白表达的相关性。方法：自2016年1月—2016年12月,在广州中医药大学附属骨伤科医院入院治疗的患者,将符合纳入标准、排除标准的85例绝经后女性患者作为研究对象。所有患者运用双能X线（DXA）骨密度仪检测骨密度,收集每例患者4 m L外周血,并采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清标本中Bcl-2、Bak蛋白表达。对不同组间各项指标进行数据统计分析。结果：（1）绝经后骨质疏松症组与非骨质疏松症组之间年龄、身高、体重、体重指数进行比较,年龄、体重及体重指数差异具有统计学意义（P〈0.05）,身高差异不具有统计学意义（P〉0.05）,与非骨质疏松症组相比较,绝经后骨质疏松症组年龄较高,体重及体重指数均较低。（2）绝经后骨质疏松症患者与非骨质疏松症组间Bcl-2、Bak比较,差异具有统计学意义（P〈0.05）,同非骨质疏松症组相比,绝经后骨质疏松症组中Bcl-2蛋白水平较低,Bak蛋白水平较高。（3）所有绝经后女性Bcl-2、Bak蛋白水平与L1~4平均骨密度之间具有显著相关性（P〈0.05）,Bcl-2与L1-4平均骨密度之间呈正相关,Bak与L1~4平均骨密度之间呈负相关。结论：（1）与非骨质疏松症患者相比,绝经后骨质疏松症患者血清Bcl-2蛋白水平较低,Bak蛋白水平较高。（2）血清Bcl-2蛋白水平与腰椎骨密度呈正相关;血清Bak蛋白水平与腰椎骨密度呈负相关。

抑制Dickkopf-1和Sclerostin表达对人成骨肉瘤细胞MG63骨代谢调节相关蛋白表达水平的影响

目的:观察抑制Dickkopf-1和Sclerostin表达对人成骨肉瘤细胞MG63骨代谢调节相关蛋白表达水平的影响。方法:培养MG63细胞,构建沉默Dickkopf-1重组腺病毒载体和沉默Sclerostin重组腺病毒载体。将培养好的MG63细胞(每孔2×105个)分为4组,Scr组以Scr腺病毒转染、Dickkopf-1组以沉默Dickkopf-1重组腺病毒载体转染、Sclerostin组以沉默Sclerostin重组腺病毒载体转染、Dickkopf-1+Sclerostin组以沉默Dickkopf-1重组腺病毒载体和沉默Sclerostin重组腺病毒载体共同转染。各组MG63细胞转染重组腺病毒48 h后以Western Blot法测定各组细胞中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、低密度脂蛋白受体相关蛋白-5(low density lipoprotein receptor-related protein-5,Lrp-5)、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)、Runt相关转录因子-2(Runt-related transcription factor-2,Runx-2)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等骨代谢调节相关蛋白的表达水平。结果:Dickkopf-1组的OPG表达量与Scr组、Sclerostin组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.050,P=0.196);Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的OPG表达量均高于Scr组(P=0.010,P=0.000);Dickkopf-1组和Sclerostin组的OPG表达量均低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000)。Dickkopf-1组、Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的Lrp-5表达量均高于Scr组(P=0.012,P=0.010,P=0.000);Dickkopf-1组的Lrp-5表达量与Sclerostin组比较,差异无统计学意义(P=0.119);Dickkopf-1组和Sclerostin组的Lrp-5表达量均低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000)。Dickkopf-1组的BMP-2表达量与Scr组比较,差异无统计学意义(P=0.185);Dickkopf-1组的BMP-2表达量低于Sclerostin组(P=0.037);Dickkopf-1组和Sclerostin组的BMP-2表达量均低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000)。Dickkopf-1组、Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的FGF-2表达量均高于Scr组(P=0.010,P=0.000,P=0.000);Dickkopf-1组的FGF-2表达量低于Sclerostin组和Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000);Sclerostin组的FGF-2表达量低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000)。Dickkopf-1组、Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的Runx-2表达量均高于Scr组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);Dickkopf-1组的Runx-2表达量低于Sclerostin组和Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000);Sclerostin组的Runx-2表达量低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000)。Dickkopf-1组、Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的CTGF表达量均高于Scr组(P=0.010,P=0.000,P=0.010);Dickkopf-1组的CTGF表达量与Sclerostin组比较,差异无统计学意义(P=0.080);Dickkopf-1组和Sclerostin组的CTGF表达量均低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.004)。Dickkopf-1组、Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的OPN表达量均高于Scr组(P=0.002,P=0.000,P=0.000);Dickkopf-1组和Dickkopf-1+Sclerostin组的OPN表达量与Sclerostin组比较,差异均无统计学意义(P=0.050,P=0.170);Dickkopf-1组的OPN表达量低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000)。Dickkopf-1组、Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的TNF-α表达量均低于Scr组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);Dickkopf-1组的TNF-α表达量高于Sclerostin组和Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000);Sclerostin组和Dickkopf-1+Sclerostin组的TNF-α表达量比较,差异无统计学意义(P=0.125)。结论:抑制MG63细胞Dickkopf-1和Sclerostin表达,均能上调具有骨形成和双向调节作用的骨代谢调节相关蛋白表达水平、下调具有骨吸收作用的骨代谢调节相关蛋白表达水平,其中抑制Sclerostin表达对骨代谢调节相关蛋白表达水平的影响强于抑制Dickkopf-1表达,而且抑制Dickkopf-1和Sclerostin表达在调节骨代谢调节相关蛋白表达水平方面具有协同作用。

XCT-790对沉默Dkk1腺病毒载体转染MG63细胞活性和OPN、Lrp5、BMP2影响研究

目的 :研究XCT-790对沉默Dickkopf-1(Dkk1)腺病毒转染MG-63细胞活性和OPN、Lrp5、BMP2的影响。方法 :构建沉默Dkk1腺病毒载体,实验分为空白对照组、沉默Dkk1组、XCT-790处理空载腺病毒组、XCT-790处理沉默Dkk1组,根据组别不同分别用上述重组腺病毒转染MG63细胞,观察细胞增殖及OPN、Lrp5、BMP2表达情况。结果 :(1)与空白对照组比较,沉默Dkk1组和XCT-790处理空载腺病毒组MG63细胞活性增强,OPN、Lrp5、BMP2的表达量升高((P<0.05);(2)与Dkk1沉默组比较,XCT-790处理Dkk1沉默组的MG63细胞活性减弱,OPN、Lrp5、BMP2的表达量降低(P<0.05)。结论 :XCT-790可以降低因DKK1沉默而增强的MG63细胞活性,可以降低因DKK1沉默而增高的OPN、Lrp5、BMP2的表达量。

XCT-790对沉默DKK1、Sost腺病毒载体转染MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα的影响研究

目的研究ERRα抑制剂(XCT-790)对沉默Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)重组腺病毒载体转染MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα的影响。方法本实验将培养好的MG63细胞分为空白对照组、沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默(DKK1+Sost)组、XCT-790处理空载腺病毒组、XCT-790处理沉默DKK1组、XCT-790处理沉默Sost组、XCT-790处理沉默(DKK1+Sost)组,根据组别不同分别用包装好的沉默DKK1、Sost腺病毒载体转染MG63细胞,应用Western blot检测MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2、TNFα蛋白的表达量。结果 (1)与空白对照组对比,沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost可以提高OPG、CTGF、FGF2表达量(P<0.05),降低TNFα表达量(P<0.05);XCT-790干预MG63细胞可降低OPG、CTGF、FGF2表达量(P<0.05),增加TNFα表达量(P<0.05);(2)与沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost组比较,XCT-790处理沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost组可降低因沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost而增加OPG、CTGF、FGF2的表达量的作用(P<0.05),增加因沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost而降低TNFα的表达量(P<0.05)。结论 XCT-790可以降低MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2表达量,升高TNFα表达量;还可以调节因沉默DKK1、Sost、DKK1+Sost而改变的MG63细胞中OPG、CTGF、FGF2及TNFα的表达量。