目的探讨BALB/c小鼠肝组织中NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体活化与日本血吸虫(Schistosoma japonicum)感染所致肝纤维化程度的关系。方法 6~8周龄BALB/c雌性小鼠48只,分为未感染组(n=8)、感染后第5、6、8...目的探讨BALB/c小鼠肝组织中NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体活化与日本血吸虫(Schistosoma japonicum)感染所致肝纤维化程度的关系。方法 6~8周龄BALB/c雌性小鼠48只,分为未感染组(n=8)、感染后第5、6、8和12周组(n=10)。感染组每鼠经腹部皮肤贴片法感染日本血吸虫尾蚴(20±3)条。取小鼠肝脏组织,用天狼星红染色法检测肝组织切片中胶原的含量。抽提肝组织RNA,逆转录成cDNA,实时荧光定量PCR(qPCR)检测NLRP3、凋亡相关微粒样蛋白(apoptosis associated speck-like protein containing a CARD domain,ASC)、半胱天冬酶原1(pro-caspase-1)、白细胞介素-1β前体(proIL-1β)和IL-18前体(pro-IL-18)的RNA表达水平。用免疫组化染色结合H-score评分法检验小鼠肝脏半胱天冬酶1(caspase-1)p10和IL-1β的蛋白质表达水平。结果天狼星红染色结果显示,日本血吸虫感染后第5、6、8、12周小鼠肝脏切片的胶原面积百分比在第8周最高(29.66±1.07)%,其后依次为第6周(21.69±1.24)%、第12周(11.98±0.95)%和第5周(1.76±0.34)%。qPCR结果显示,与未感染组相比,感染后第5、6、8、12周小鼠肝脏NLPR3、ASC、pro-caspase-1、pro-IL-1β以及pro-IL-18的相对表达量为:NLRP3分别为8.12±0.66(P<0.01)、24.13±2.81(P<0.01)、14.86±0.35(P<0.01)、6.74±0.67(P<0.01),ASC为0.82±0.14、7.12±0.90、3.08±0.87、4.13±0.93(P<0.01),pro-caspase-1为1.14±0.72、2.53±0.46(P<0.05)、3.16±0.80(P<0.01)、2.19±0.87,pro-IL-1β为9.95±1.04、117.76±10.01(P<0.01)、36.98±11.73(P<0.01)、7.74±2.27,pro-IL-18为2.42±0.36、1.85±0.11、1.74±0.10、1.69±0.15。免疫组化结合H-score评分的结果显示,感染后第5、6、8和12周小鼠肝脏的caspase-1 p10和IL-1β的H-score值分别为2.80±0.12、2.10±0.06、8.57±1.00(P<0.01)、4.55±0.50(P<0.01)和0.13±0.13、0.20±0.00、3.30±0.59(P<0.01)、1.80±0.43。结论日本血吸虫感染小鼠的肝纤维化程度在第8周最明显,继而是第6周、第12周和第5周;NLRP3炎症小体在感染第6周、第8周显著活化;NLRP3炎症小体的活化与日本血吸虫感染所致的肝纤维化程度呈正相关。展开更多
文摘目的探讨BALB/c小鼠肝组织中NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体活化与日本血吸虫(Schistosoma japonicum)感染所致肝纤维化程度的关系。方法 6~8周龄BALB/c雌性小鼠48只,分为未感染组(n=8)、感染后第5、6、8和12周组(n=10)。感染组每鼠经腹部皮肤贴片法感染日本血吸虫尾蚴(20±3)条。取小鼠肝脏组织,用天狼星红染色法检测肝组织切片中胶原的含量。抽提肝组织RNA,逆转录成cDNA,实时荧光定量PCR(qPCR)检测NLRP3、凋亡相关微粒样蛋白(apoptosis associated speck-like protein containing a CARD domain,ASC)、半胱天冬酶原1(pro-caspase-1)、白细胞介素-1β前体(proIL-1β)和IL-18前体(pro-IL-18)的RNA表达水平。用免疫组化染色结合H-score评分法检验小鼠肝脏半胱天冬酶1(caspase-1)p10和IL-1β的蛋白质表达水平。结果天狼星红染色结果显示,日本血吸虫感染后第5、6、8、12周小鼠肝脏切片的胶原面积百分比在第8周最高(29.66±1.07)%,其后依次为第6周(21.69±1.24)%、第12周(11.98±0.95)%和第5周(1.76±0.34)%。qPCR结果显示,与未感染组相比,感染后第5、6、8、12周小鼠肝脏NLPR3、ASC、pro-caspase-1、pro-IL-1β以及pro-IL-18的相对表达量为:NLRP3分别为8.12±0.66(P<0.01)、24.13±2.81(P<0.01)、14.86±0.35(P<0.01)、6.74±0.67(P<0.01),ASC为0.82±0.14、7.12±0.90、3.08±0.87、4.13±0.93(P<0.01),pro-caspase-1为1.14±0.72、2.53±0.46(P<0.05)、3.16±0.80(P<0.01)、2.19±0.87,pro-IL-1β为9.95±1.04、117.76±10.01(P<0.01)、36.98±11.73(P<0.01)、7.74±2.27,pro-IL-18为2.42±0.36、1.85±0.11、1.74±0.10、1.69±0.15。免疫组化结合H-score评分的结果显示,感染后第5、6、8和12周小鼠肝脏的caspase-1 p10和IL-1β的H-score值分别为2.80±0.12、2.10±0.06、8.57±1.00(P<0.01)、4.55±0.50(P<0.01)和0.13±0.13、0.20±0.00、3.30±0.59(P<0.01)、1.80±0.43。结论日本血吸虫感染小鼠的肝纤维化程度在第8周最明显,继而是第6周、第12周和第5周;NLRP3炎症小体在感染第6周、第8周显著活化;NLRP3炎症小体的活化与日本血吸虫感染所致的肝纤维化程度呈正相关。
