适用于犬输尿管脱细胞基质制备的灌注系统

目的探讨应用灌注系统制备输尿管脱细胞基质的可行性方案。方法利用输尿管本身存在的管腔结构,通过灌注系统制备输尿管脱细胞基质。根据化学洗涤剂的不同特性设置3个不同的灌注组,单纯SDS组、单纯Triton X-100组以及联合组(Triton X-100+SDS)。利用HE染色,DAPI染色,DNA定量,琼脂糖凝胶电泳评价输尿管脱细胞基质中细胞核的残留情况。采用Masson's 3色染色、Alcian Blue染色、胶原含量测定、GAG含量测定、扫描电镜和毒性检测等手段评价制备输尿管脱细胞基质的三维结构和生物活性成分。结果 HE染色和DAPI染色显示联合组制备的输尿管脱细胞基质中没有明显的核物质残留,DNA定量和凝胶电泳证实了这一结果。Masson's 3色染色、Alcian Blue染色、胶原含量测定和GAG含量测定显示联合组保留了输尿管脱细胞基质三维胶原结构和生物活性成分。扫描电镜观察联合组制备的输尿管脱细胞基质表面存在大量的孔隙结构。毒性测定证实联合组制备的输尿管脱细胞基质无毒性。结论本研究灌注系统可用于输尿管脱细胞基质的制备,筛选出一套比较理想的脱细胞方案,制备的输尿管脱细胞基质可用于输尿管组织工程再造。

生物可降解输尿管螺旋形药物洗脱支架的性能研究

目的构建一种新型生物可降解输尿管药物洗脱支架,并观察其体内外降解性能、药物释放性能及组织相容性。方法左旋聚乳酸、消旋聚乳酸、雷帕霉素共混后制备两种规格试件。将载药片状试件浸泡于体外尿液环境中,恒温振荡,于2周、4周、6周、8周、10周、12周时通过形态观察、质量变化、电镜扫描研究试件的体外降解性能;采用高效液相色谱法测定试件载药量变化以研究其药物释放性能。将螺旋型药物洗脱支架置入兔背部肌肉内,于1周、4周、12周时行组织学观察评价支架的组织相容性。结果载药片状试件体外尿液恒温振荡环境下,6周时可见少量白色漂浮物,质量丢失率约15%,扫描电镜观察试件表面可见细小孔洞;12周时完全降解为泥沙样沉积物。高效液相色谱结果 :初始组(1 425±47)μg,2周组(1 400±23)μg,4周组(1 368±55)μg,6周组(1 278±88)μg,8周组(780±32)μg,10周组(362±36)μg。初始组与2周组、2周组与4周组组间差异均无统计学意义(P>0.05);6周组明显低于4周组(P<0.05);8周组与10周组分别低于其前一时间组(P<0.01)。兔背部肌肉置入后,组织学观察术后炎症反应轻微,12周时纤维增生不明显。结论新型生物可降解输尿管药物洗脱支架具有良好的降解性能、药物释放性能和组织相容性。

可降解输尿管支架材料的特性研究

目的构建一种生物可降解输尿管载药支架材料,并研究其体内外降解特性、药物释放特性及组织相容性。方法乙交酯-L-丙交酯-ε-己内酯三元无规共聚物材料、雷帕霉素共溶于三氯甲烷溶液中,溶液蒸发法制备两种规格载药支架材料。将材料浸泡于体外尿液环境中,恒温振荡2、4、6、8、10周后,通过大体形态、电镜扫描观察材料的体外降解情况;通过高效液相色谱测定材料载药量变化研究材料药物释放特性。将材料包埋于兔两侧椎旁肌,于1、4、12周时手术取出材料行组织染色切片研究材料的组织相容性。结果体外振荡环境下,4周时管内可见絮状漂浮物,此时质量丢失率约为27%,扫描电镜下材料表面可见细小孔洞,10周时材料降解为泥沙样沉积物。支架载药量逐渐降低,0周组(1 412±28)μg与2周组(1 335±74)μg载药量差异无统计学意义(P>0.05),2周组与4周组(1 165±84)μg、4周组与6周组(622±25)μg、6周组与8周组(286±17)μg载药量差异均有统计学意义(P<0.01)。组织学切片观察急性期表现为手术损伤后炎症反应,植入后期纤维增生不明显。结论新型生物可降解输尿管载药支架材料肌肉包埋组织学反应轻微,具有良好的组织相容性,体外环境下其在降解同时,能持续释放雷帕霉素达8周。

生物来源水凝胶在膀胱组织工程中的研究进展

膀胱的修复重建一直是泌尿外科的重点研究方向,近年来随着组织工程技术的不断进步,这一问题有望从根本上得到解决。作为组织工程中最常用的支架材料之一,生物来源水凝胶可以模仿天然组织的结构,为细胞提供理想的生存环境和机械支持,其具备良好的生物相容性、可降解性和可塑性等,在膀胱组织工程中有广阔的应用前景。本文将对各种生物来源水凝胶材料进行介绍,并综述其在膀胱组织工程中的研究进展。

一棵水杉树

一棵树的存在与变化,有多少人关注？一旦它消失以后,又有多少人记得它曾经的风景？

新加坡:注重培养学生21世纪技能的全人教育

2014年10月25日至11月15日,我有幸被湖北省教育厅选派,作为优秀骨干教师赴新加坡学习考察团的一员,在新加坡国立教育学院的接待和安排下,对新加坡教育进行了为期21天的较为全面的学习和考察。此行开阔了视野和思维,印象深刻,收获颇大。近年来,新加坡倡导落实以价值观为导向,少教多学,注重培养学生21世纪技能的全人教育。建立了因材施教、联系生活。

学会合作

曾听过一则寓言故事:天使到地狱里去,看到地狱里的人们围着一口大锅,用长勺子争舀着锅里的食物。但勺子的把儿太长,他们怎么也不能把食物送到自己的嘴巴里去。他们之间互相吵闹,争抢,搞得乌烟瘴气而每个人都是饥肠辘辘。

善写矛盾文生辉

世界充满矛盾,生活充满矛盾,人自身充满矛盾,这一切必然在写作中会有所反映。高明的作者都是善于表现矛盾的,从而使其文章真实、细腻、深刻、生动。请看以下例析:

有志者,事未必成

"有志者,事竟成"这句名言的意思是:有志向的人,他想干的事情终究能够成功.这话最初出自<后汉书·耿合传>中刘秀赞扬耿合的话.而清代蒲松龄撰写的名联"有志者,事竟成,破釜沉舟,百二秦关终属楚;苦心人,天不负,卧薪尝胆,三千越甲可吞吴",更使得这句名言广泛流传,名声赫赫.……

灌注脱细胞系统制备全膀胱脱细胞基质并联合脂肪干细胞构建组织工程膀胱的研究

目的应用自行设计的灌注脱细胞系统制备全膀胱脱细胞基质(BAM),并探讨采用脂肪干细胞(ADSCs)构建组织工程膀胱的可行性。方法本研究于2020年10月至2021年4月进行。采用自行设计的膀胱灌注脱细胞系统,按照灌注液流动方向和不同脱细胞液作用时间的不同,制订4种不同的脱细胞方案(分别为A、B、C、D组)。其中A组和B组均以膀胱组织的尿道口作为灌注液的流出道,C组和D组剪去膀胱顶部部分组织以膀胱顶部开口作为灌注液的流出道。A组和C组采用1%Triton X-100作用6 h,1%十二烷基硫酸钠(SDS)作用2 h;B组和D组采用1%Triton X-100作用7 h,1%SDS作用1 h。另设正常膀胱组作为对照,其组织为直接取材的天然膀胱组织,不需要灌注和冷冻保存。通过HE、DAPI、Masson三色染色和阿尔新蓝染色,以及试剂盒定量分析以筛选出快速且高效的脱细胞方案,制备全膀胱支架。以制备的BAM为支架材料,ADSCs为种子细胞构建组织工程膀胱,HE和DAPI染色观察ADSCs在BAM上的分布情况。结果HE和DAPI染色结果显示C组未见明显的细胞核残留,Masson三色染色和阿尔新蓝染色结果表明C组的胶原结构和糖胺聚糖得到较好保留。C组膀胱壁厚度与正常膀胱组[(975.44±158.62)μm与(1064.49±168.52)μm]差异无统计学意义(P>0.05)。C组DNA含量[(43.59±4.59)ng/mg]明显低于正常膀胱组、A组、B组和D组[分别为(532.50±26.69)、(135.17±6.99)、(182.49±13.69)、(84.00±4.38)ng/mg],差异均有统计学意义(P<0.05)。C组胶原含量[(10.98±0.29)μg/mg]和糖胺聚糖含量[(2.30±0.18)μg/mg]与正常膀胱组[(11.69±0.49)μg/mg和(2.36±0.09)μg/mg]比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。扫描电镜检查结果显示A~D组制备的BAM表面可见大量的孔隙结构,利于细胞黏附。分离培养ADSCs,流式细胞术鉴定证实CD90和CD29阳性表达,CD45和CD106阴性表达。活/死细胞双染色法和CCK-8检测证实C组制备的BAM无细胞毒性。以C组BAM为支架材料构建组织工程膀胱,HE和DAPI染色可见大量ADSCs分布于组织工程膀胱的表面和内部。结论采用自行设计的灌注脱细胞系统制备的全膀胱形态BAM可作为膀胱组织工程的支架材料,构建的组织工程膀胱可用于膀胱修复重建,为进一步临床转化研究提供实验基础。

《对孩子说》读与练

对孩子说 你必须吃很多粮食、蔬菜、水果．饮很多水和奶，才渐渐增长自己的身高和体重，记住，是土地供给你营养让你渐渐高出土地，你不要忘了随时低下头来，甚至要全身心匍匐在地面上，看看土地的面容和伤痕。为了你站起来，土地一直谦卑地匍匐着，在伟大的土地面前．你一定要学会谦卑.

甲基丙烯酸酐化明胶-甲壳素纳米晶须生物墨水的特性和3D打印效果

目的探讨由甲基丙烯酸酐化明胶(GelMA)和甲壳素纳米晶须(ChiNC)组成的混合生物墨水的物理特征、生物相容性,以及3D打印效果。方法2021年5月至2022年12月,于100mg/mlGelMA生物墨水中添加ChiNC,制备成ChiNC浓度分别为5、10、20mg/ml的混合生物墨水,分别命名为GC5、GC1O、GC20组,与未添加ChiNC的GelMA生物墨水(CCO组)共同实验。采用扫描电镜观察4组生物墨水光固化后形成的水凝胶的横截面,计算孔隙率。称量各组水凝胶溶胀前后质量,计算平衡溶胀比。将4组生物墨水加入48孔板中,光固化成水凝胶,表面种植入脐静脉内皮细胞(HUVECs),于培养基中培养至第1、3、7天分别行CCK-8实验检测吸光度A值,比较4组水凝胶中细胞的增殖速度。4组生物墨水中添加HUVECs,打印网格状支架,于培养基中培养至第1、7天分别行Live-Dead染色,观察细胞存活率。采用打印挤出成丝实验,观察各组生物墨水挤出时的连续成丝性,比较各组的打印效果。采用最佳配比的混合生物墨水3D打印模拟膀胱壁黏膜层、黏膜下层和肌层解剖结构的组织工程膀胱补片,观察打印结构的稳定性和保真度,验证混合生物墨水打印多层复杂结构的可行性。结果扫描电镜观察结果显示,GCO、GC5、GC1O、GC20组水凝胶的孔隙率分别为(51.43±6.23)%、(51.85±6.47)%、(50.55±4.59)%和(42.49±2.20)%,GC0组与其他3组比较差异均无统计学意义(P=0.9994、P=0.9948、P=0.1200)。GC0组平衡溶胀比为9.37±0.49,低于GC5组(8.81±0.41,P=0.0457)、GC10组(7.95±0.19,P<0.01)、GC20组(7.71±0.14,P<0.01),差异均有统计学意义。CCK-8检测结果显示,GCO、GC5、GC10、GC20组培养第1天的吸光度A值分别为0.357±0.0070.350±0.012、0.360±0.009、0.345±0.018,GC10组与其他3组比较差异均无统计学意义(P=0.9332、P=0.5464、P=0.4937);培养第3天的吸光度A值分别为0.634±0.010、0.704±0.009、0.755±0.012、0.653±0.015,GC10组与其他3组比较差异均有统计学意义(P<0.01、P=0.0033、P=0.0002);培养第7天的吸光度A值分别为0.846±0.026、0.930±0.043、1.001±0.031.0.841±0.024,GC10组与其他3组比较差异均有统计学意义(P=0.0012、P=0.1390、P=0.0010)。GCO、CC5、GC10、CC20组培养第1天的HUVECs细胞存活率分别为(90.13±1.63)%、(90.6±2.45)%、(92.58±2.15)%、(91.40±3.17)%,GC0组与其他3组比较差异均无统计学意义(P=0.9869、P=0.3093、P=0.8008);培养第7天的细胞存活率分别为(89.97±3.10)%、(92.18±2.21)%、(92.05±2.25)%、(90.12±1.97)%GC0组与其他3组比较差异均无统计学意义(P=0.3965、P=0.4511、P=0.9995)。打印挤出成丝测试结果显示,GC0组在24℃~25℃时挤出连续且能成丝,GC10组在24℃~27℃时挤出连续且能成丝。使用CC10组打印组织工程膀胱补片,结果显示打印的补片稳定,无塌,保真度高。结论在GelMA中添加ChiNC能促进细胞黏附、增殖,扩大GelMA生物墨水的打印窗口。在GelMA中添加10mg/ml ChiNC制备的混合生物墨水的生物相容性良好,能打印模拟天然膀胱壁解剖结构的组织工程膀胱补片。

膀胱组织工程研究进展

泌尿系统的肿瘤、创伤、炎症和先天畸形等疾病均可使膀胱受损，目前利用肠道修复重建常伴随一系列的并发症。组织工程技术为解决这一问题提供了新的思路。本文就膀胱组织工程研究进展情况作一综述，详细阐述了在膀胱组织工程重建中所涉及的三大主要方面的研究现状，即支架材料的选取、种子细胞的培养与移植、生长因子的调节作用。并指出了目前所面临的一些挑战，例如膀胱组织工程支架材料的选取、组织工程膀胱移植到体内后营养供应问题等，都有待我们进一步深入研究解决。

脱细胞基质在泌尿系统修复重建中应用的研究进展

泌尿系统的损伤、炎症、肿瘤和先天性畸形等疾病都可导致器官组织结构改变或功能障碍.目前临床上常用的治疗方法有异体移植、自体移植和人工合成材料的替代,但这些治疗方法都有其各自的缺陷和不足.组织工程技术的发展为泌尿系统的修复和重建带来了全新的理念.组织工程的研究内容主要集中于以下3个方面：（1）种子细胞的培养;（2）支架材料的研究;（3）组织工程化的组织对各种病损组织替代研究.目前组织工程常用的支架材料主要包括可降解的人工合成高分子材料和天然的脱细胞基质两大类[1].其中人工合成高分子材料表面的微观结构与生物组织相差甚远,表面疏水性及细胞黏附性差,因而影响种子细胞与材料的附着和相互作用.天然的脱细胞基质材料去除了可引起免疫反应的细胞成分,保留了含有生物活性分子的细胞外基质,更是完整地保留了组织的三维结构.脱细胞基质的这些特点更复合理想中的支架材料,因而近年来利用脱细胞基质重建泌尿系统组织器官成为研究的热点.

双层蚕丝支架复合脂肪干细胞构建的组织工程膀胱补片用于膀胱修复重建的效果

目的探讨双层蚕丝支架复合脂肪干细胞(ADSCs)构建的组织工程膀胱补片在膀胱修复重建中的效果。方法2020年5月至2021年3月利用家蚕蚕茧获得丝素蛋白(SF)水溶液,制备由丝素蛋白膜和丝素蛋白海绵组成的双层蚕丝支架。分离培养大鼠ADSCs,并对ADSCs表面标志物(CD29、CD90、CD45、CD106)进行流式细胞鉴定。将ADSCs种植在双层蚕丝支架上构建组织工程膀胱补片。将36只雄性SD大鼠按随机数字表法分为组织工程膀胱补片组(SF-ADSCs组,15只)、双层蚕丝支架组(SF组,15只)、对照组(6只)。SF-ADSCs组和SF组分别将组织工程膀胱补片和双层蚕丝支架包埋于大鼠的大网膜,以促进移植物血管化。包埋7 d后,两组分别处死3只大鼠,行HE和免疫荧光染色检查评估血管化情况。SF-ADSCs组(12只)和SF组(12只)于膀胱顶部切除超过50%的膀胱组织,保留三角区和输尿管开口,分别采用大网膜包埋后的组织工程膀胱补片和双层蚕丝支架修补膀胱缺损;对照组在充分暴露膀胱组织后随即关闭切口。术后4周,SF-ADSCs组和SF组分别随机取6只大鼠,观察膀胱组织的大体形态,行膀胱造影检查观察膀胱壁形态,移植物取材后行HE和Masson's 3色染色、免疫荧光染色检查观察膀胱壁组织再生情况。术后12周,3组均行尿动力学检查,均行上述检查比较膀胱组织形态学、组织再生情况的差异。结果流式细胞实验结果显示,分离的细胞阳性表达CD29和CD90,未见CD45和CD106显著表达。大体观察和扫描电镜结果证实制备的双层蚕丝支架不仅具备利于细胞种植的孔隙结构,还具备良好的韧性利于手术缝合。大网膜包裹后,SF-ADSCs组血管样结构的数量[(43.50±2.66)个]和面积占比[(0.73±0.03)%]明显高于SF组[(24.50±3.51)个,(0.55±0.05)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。膀胱修补术后4周,SF-ADSCs组和SF组移植物组织学染色可见大量双层蚕丝支架降解碎片;术后12周形态学检测结果显示,SF-ADSCs组移植物膀胱形态均一,与正常膀胱组织形态相近,免疫荧光染色结果表明SF-ADSCs组中可见连续的尿路上皮层、大量的平滑肌组织、血管结构和再生的神经元。尿动力学检查结果显示,SF-ADSCs组膀胱最大容积[(0.74±0.03)ml]和顺应性[(16.68±0.44)μl/cmH2O]明显优于SF组[(0.47±0.05)ml、(14.89±0.37)μl/cmH2O],但低于对照组[(1.12±0.08 ml)、(19.34±0.45)μl/cm H2O],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论双层蚕丝支架和ADSCs构建的组织工程膀胱补片,可促进膀胱组织形态学修复、膀胱壁结构再生和膀胱生理功能的恢复。

输尿管脱细胞基质涂层诱导脂肪干细胞分化的研究

目的探讨输尿管脱细胞基质(UDM)涂层对脂肪干细胞分化的影响。方法2018年1月至2019年10月利用灌注法制备犬UDM,为UDM组,以正常犬输尿管为正常输尿管组。采用HE染色、DAPI染色和DNA定量检测评估UDM组和正常输尿管组中细胞成分的残留情况;Masson三色染色和胶原定量检测评估UDM组和正常输尿管组中胶原的保留情况;阿尔新蓝染色和糖胺聚糖定量检测评估UDM组和正常输尿管组中糖胺聚糖的分布及含量。分离培养犬脂肪间充质干细胞(CADMSCs)并用流式细胞仪鉴定。用胃蛋白酶消化法制备UDM涂层作为实验组,I型鼠尾胶原涂层作为对照组,将cADMSCs种植在不同涂层上,免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测cADMSCs的分化情况。结果HE和DAPI染色结果显示UDM组未见明显的细胞核残留;DNA定量检测结果显示UDM组中DNA含量[(38.87±3.40)ng/mg]明显低于正常输尿管组[(1694.63±169.83)ng/mg,P<0.05]。Masson三色染色和胶原定量检测结果显示UDM组中胶原含量[(265.89±16.40)μg/mg]与正常输尿管组[(288.73±16.32)μg/mg]的差异无统计学意义(P>0.05)。阿尔新蓝染色结果显示UDM组中有糖胺聚糖分布;糖胺聚糖定量检测结果显示UDM组中糖胺聚糖含量[(1.57±0.19)μg/mg]低于正常输尿管组[(3.43±0.12)μg/mg](P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,实验组培养3、7,10d的αSMA的表达量(2.51±±0.27.3.68±0.33.4.91±0.45)均高于相应对照组(0.97±0.09.1.02±0.10.1.00±0.11),差异均有统计学意义(P<0.05);随着培养时间增加,实验组αSMA的表达量逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.05),而对照组随着培养时间增加,α-SMA的表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光染色检测结果示实验组和对照组α-SMA的表达趋势与蛋白质印迹法检测结果--致。结论制备的UDM去除了细胞成分,且很好地保留了胶原结构和生物活性成分;UDM涂层可促进cADMSCs向平滑肌细胞分化。

和错误亲密接触

那一年，我在小学任班主任。临近期末，校长要求班主任认真写学生评语，写好后交他检查。如发现错别字，他将圈点出来，责成班主任重写，免得外人议论教师素质低。我谨慎地写完交给了他，他还给我后，我发现改动很少，偶尔漏掉的字，他补上了。但他将我写的“再接再厉”中的“厉”字都改成了“励”。

大合规时代来临,律师如何切下这块蛋糕?

随着大合规时代的到来,企业对合规工作越来越重视,进而引发了企业对合规服务需求的增加。律师作为法律服务的提供者,基于在诉讼和非诉讼法律服务的独特经验,在企业合规服务中具有天然的优势,在企业合规工作中扮演了重要的角色。

黄叔

黄叔是个别致的农民。他身材矮小墩实,衣着滑稽。也许是经常喝酒的原故,脸膛一向红红的。稀疏的短发遮不住一颗小脑袋,可以瞧见头皮。淡眉,小眼,短鼻,小嘴。