大明竹属遗传多样性ISSR分析及DNA指纹图谱研究

利用对竹类有较好多态性的18条引物及已优化的ISSR反应体系和扩增程序,分析大明竹属25种竹的遗传多样性。研究结果:共扩增出重复性好的多态位点高达88.3%,平均每个引物扩增8.61个,DNA分子量在160—3000 bp,此25种竹类的平均遗传距离为0.5006,变异幅度为0.1486—0.7191,说明大明竹属具有高的遗传多样性,种间遗传相对复杂。ISSR结果聚类分析,在遗传距离0.5396处将25种竹划分为3类,与形态分类结果大致一致,说明ISSR技术能精确检测大明竹属部分植物的遗传多样性及亲缘关系,有助于该属的分类。试验用U807、U815、U835、U836、U840、U841、U844 7条引物构建大明竹属25种竹的数字指纹识别码,为大明竹属部分植物的分类及种质鉴定提供参考。

大明竹属部分植物ISSR-PCR反应体系优化及有效引物筛选

采用单因素试验方法,建立了适合大明竹属25个竹种的ISSR-PCR反应体系,优化了各影响因子的用量,筛选出18条有效引物,并确定它们的退火温度,最后对体系进行了检验.优化后大明竹属植物ISSR-PCR的20μL反应体系含2.0μL10×PCR Buffer、2.5 mmol·L-1Mg2+、0.15 mmol·L-1dNTPs、0.5μmol·L-1引物、1.0 U Tap DNA聚合酶、50 ng模板DNA、10.6μL灭菌ddH2O.扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性60 s,55℃复性45 s,72℃延伸90 s,循环40次;72℃延伸7 min,4℃保存.该ISSR-PCR反应体系可用于大明竹属部分植物的遗传多样性及遗传结构研究.

适用于厚朴的SRAP反应体系的建立与优化

利用正交试验L16(45),结合单因素试验对厚朴相关序列扩增多态性(Sequence-related amplified polymorphism,SRAP)标记反应体系的5个因素(Mg2+,dNTPs,引物,Taq酶和模板DNA)进行优化试验,结果表明:各因素水平变化对PCR反应的影响从大到小依次为:dNTPs>Taq酶>模板DNA>Mg2+>引物;筛选出各反应因素的最佳水平,建立厚朴SRAP-PCR反应的最佳体系(25μL)为:Taq酶1.5 U,Mg2+1.8 mmol.L-1,模板DNA100 ng,dNTP 0.24 mmol.L-1,引物0.40μL。试验表明,该体系重复性好、稳定性强。

菜豆食物中毒的实验室诊断方法探讨

[目的]探讨菜豆食物中毒的实验室诊断方法。[方法]通过1起22例病人典型的菜豆食物中毒案例调查和实验室检测,在实验室诊断处理方面将3种方法结合起来,并进行分析比较,皂甙快速定性检测使用豆浆生熟度快速检测试剂盒,先作快速定性检测;同时对皂甙定性检测还使用了化学试验法:泡沫试验、三氯醋酸反应法;检测红细胞凝集素使用的鸡血球红细胞凝集素试验法,进一步检测样品中含红细胞凝集素的情况。[结果]采集的11份样品的皂甙定性全部是阳性;鸡红细胞凝集素试验凝集效价:呕吐物的为1∶32,剩余菜豆为1∶64,病人血清为1∶16。[结论]对于菜豆食物中毒的实验室诊断,首先选生熟豆浆快速检测试剂盒作皂甙快速检测,作为菜豆食物中毒快速筛查;再选用鸡血球凝集试验,最后使用皂甙化学试验法进一步证实,为确诊菜豆食物中毒提供可靠依据。