泛素-蛋白酶体通路

泛素 蛋白酶体通路介导的细胞蛋白降解是一个复杂、缜密的调控过程 ,同时在细胞周期、基因转录及表达、抗原提呈和炎症演进等方面发挥调控作用 ,尤其是通过降解细胞各通路的抑制因子或 /和激活因子发挥上调或下调作用 ;而且泛素 蛋白酶体通路的异常与诸多疾病如恶性肿瘤、神经变性疾病、遗传性疾病、炎症、心肌病的致病机制有关。对于细胞应用该通路降解靶蛋白机制的阐明 。

一个新硝基还原酶基因NOR1编码区单核苷酸多态及与鼻咽癌的关联分析

NOR1基因是中南大学湘雅医学院肿瘤研究所克隆的一个鼻咽癌表达下调新基因 ,生物信息学预测NOR1基因含有硝基还原酶结构域 ,该基因可能参与亚硝胺类化学致癌物在体内的代谢过程 ,从而与鼻咽癌的发生密切相关 .通过采用病例 对照的研究方法 ,利用测序技术对 144名鼻咽癌患者和匹配的 144名正常人NOR1基因编码区单核苷酸多态 (codingregionsinglenucleotidepolymorphisms ,cSNPs)进行基因分型 ,关联分析结果显示所检测到的两个cSNPs之间存在连锁不平衡 ,且均与鼻咽癌发病相关 ,两个cSNPs及它们所组成的单倍型相对危险度分别为 1 3 6、 1 64和 1 3 7.两个cSNPs的多态性改变均使NOR1基因编码蛋白一级结构发生了变化 ,这种改变可能影响NOR1基因编码蛋白的结构和功能 .

利用动态等位基因特异性杂交技术进行单核苷酸多态高通量分型

动态等位基因特异性杂交 (dynamicallele specifichybridization ,DASH)是新发展起来的一种单核苷酸多态(singlenucleotidepolymorphisms,SNP)等位基因分型技术 ,具有快速、经济、准确、高通量、重复性好等优点 .利用DASH技术 ,对 96份正常人外周血DNA样品成功地进行了两个SNP位点的基因分型 ,并摸索实验条件 。

一种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作的新器具和新方法

发明一种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作的新器具和新方法.利用这种新器具和新方法成功地制作了分别含448和390个供体组织点阵的组织微阵列受体蜡块和切片.这种新方法制作的组织微阵列切片经H&E染色,显微镜下观察证实,所有切片均无供体点阵组织脱落,切片厚度适中,组织结构无挤压变形,细胞形态均匀一致.免疫组化检测P53和P16蛋白在组织微阵列切片与其相应的常规组织切片中的表达结果完全一致.这种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作新器具和新方法成本低廉,操作简便,具有在实验室推广应用的价值.

鼻咽癌差异表达基因PROL4特性分析

在正常成人鼻咽与鼻咽癌活检组织之间进行抑制性消减杂交和微阵列 (microarray)杂交 ,获得了鼻咽癌差异表达基因PROL4的全长cDNA序列 ,其GenBank登录号为 :AF5 30 4 72 .该基因包含 5 6 7个核苷酸 ,其编码产物是由 134个氨基酸组成的富含脯氨酸蛋白 .采用RT PCR证实了PROL4基因在鼻咽癌细胞株HNE1和鼻咽癌活检组织中表达下调或缺失 (42 /48) .12种组织RNA印迹显示 :PROL4基因在人骨骼肌、胸腺和肺组织中表达 ,其转录本大小约为 0 6kb ,与所克隆的PROL4基因的cDNA大小一致 .进而通过肿瘤表达谱阵列(cancerprofilingarray)杂交检测了其在乳腺癌、子宫癌、结肠癌、胃癌、卵巢癌、肺癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌、子宫颈癌、前列腺癌、胰腺癌、小肠癌组织及其配对的正常组织的表达状况 .

超高效液相色谱-质谱联用技术在中药指纹图谱中的应用

作为一种新的现代技术分析手段,超高效液相色谱-质谱（ultra performance liquid chromatography-mass spectrome-try,UPLC-MS）联用技术在分离效能、灵敏度和专属性等方面都有着巨大的优势,展现出强大的定性、定量分析能力,从而在药物分析特别是中药分析得到广泛的运用。中药是世界医药宝库中的瑰宝之一,尽管中药的现代化取得了一定的进展,但与中药走出国门的迫切要求尚有差距。中药指纹图谱技术是目前公认的中药质量控制的有效方式之一,而中药质量控制现代化又是中药现代化、迈出国门的关键之一[1]。本文综述了近几年使用超高效液相色谱-质谱联用技术在中药指纹图谱领域所取得的进展,以期为中药指纹图谱的深入研究提供线索和参考。

9号染色体短臂上7个STR基因座在基因扫描中的信息表现

为了初步探讨7个位于染色体9p区域的短串联重复序列(shorttandemrepeat,STR)基因座:D9S288、D9S157、D9S1748、D9S171、D9S161、D9S1817和D9S1805在遗传学研究及法医学应用中的意义,随机抽取225名湖南汉族无关个体,复合PCR技术扩增上述基因座,ABI377全自动测序仪进行基因分型,共检出75种等位基因,通过对基因型及等位片断频率分布的研究和数据统计分析,7个基因座基因频率分布在0.002～0.800之间,构成243种基因型。7个STR基因座基因型分布均符合Hardy Weinberg平衡定律(P>0.05),杂合度(heterozygosity,H)介于0 347～0.844之间,个体识别力(discriminationpower,DP)为0.346～0.841,非父排除率(probabilitiesofpaternityexclusion,PPE)为0.308～0.738,多态信息含量(polymorphicinformationcontent,PIC)在0.328～0.822之间。种族比较结果显示,湖南汉族与非洲黑人及欧洲白人在大多数基因座均存在显著差异(P<0.001)。研究结果丰富了中华民族基因数据库,在人类群体遗传学及法医学研究领域有重要应用价值。

一种新型细胞微阵列的制作和应用

为了高通量地检测大量培养细胞中基因原位表达 ,发明了一种制作细胞微阵列的新方法 ,成功地制作含2 0种细胞系共 10 0个供体细胞石蜡混合物点阵的细胞微阵列 .免疫组化检测P5 3,P2 1,PTEN、P16基因在细胞微阵列中的蛋白质表达 .原位杂交检测BRD7、NGX6基因在细胞微阵列中mRNA原位表达 .建立了P5 3、P2 1、PTEN、P16蛋白和BRD7、NGX6mRNA在不同培养细胞中的原位表达谱 .细胞微阵列为基因功能研究提供一种新的高通量工具 .细胞微阵列可广泛用于DNA、RNA和蛋白质水平上的基因原位表达研究 .

人鼻咽组织特异性表达基因NASG编码产物在细胞中的融合表达

采用PCR技术从人鼻咽上皮组织cDNA文库扩增出人鼻咽组织特异性表达基因NASG基因的编码序列,用XhoI和SalI酶切NASG基因编码序列的PCR产物及pEGFP C2载体,产生匹配的粘末端.将回收的pEGFP C2载体分别与NASG基因编码区酶切片段连接,构建了其编码产物的融合蛋白表达载体pEGFP C2 NASG,通过脂质体介导分别转染非洲绿猴肾永生化细胞系COS7和鼻咽癌细胞系HNE1,瞬时表达后荧光显微镜观察NASG编码蛋白的活细胞定位,结果表明,NASG编码蛋白在COS7细胞和HNE1细胞的胞浆和胞核中均有表达.

HPLC法测定妇科止带片中盐酸小檗碱含量的研究

目的:应用高效液相色谱法对妇科止带片中盐酸小檗碱进行含量测定。方法:选用Hypersil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),选用0.05mol/L的NaH2PO4溶液:甲醇(53:47)为流动相,检测波长为345nm,流速为1.0m l/m in,柱温:25℃。结果:盐酸小檗碱线性范围为0.07575μg^0.75750μg,r=0.9999,平均回收率为99.44%,RSD=0.92%。结论:该测定方法简便、灵敏、可行,可有效控制妇科止带片的质量。

基于DNA条形码序列分析的5种菖蒲属药用植物鉴定

目的构建菖蒲属药用植物的鉴别方法。方法采用DNA条形码序列技术,对5种菖蒲属药用植物的4条候选DNA条形码序列(ITS2、rbc L、mat K、psb A-trn H)进行PCR扩增和测序,比较各序列的扩增和测序效率,对比分析种内、种间的遗传变异、分析barcoding Gap并构建聚类分析树。结果 4条候选DNA条形码序列PCR扩增和测序效率均为100%,ITS2序列对菖蒲属药用植物的鉴定成功率最高。结论基于ITS2序列的DNA条形码技术可以鉴定菖蒲属药用植物。

省级食品药品检验研究机构建立分子生物学实验室的思考

目的将分子生物学理论和技术应用于食品药品检验研究工作,提升中国食品药品检验系统的检验检测能力和行业服务水平。方法对分子生物学实验室建立的意义、职能及发展进行了阐述。结果随着分子生物学理论和技术在食品药品检验研究中的深入运用,分子生物学将成为食品药品质量控制的有效技术手段之一。结论设置分子生物学实验室可产生技术支撑更有力、监管队伍更专业、食品药品更安全的社会效应。

乙醇相对密度测定不确定度的评定

目的建立乙醇相对密度测定的不确定度评定方法。方法依据JJFl059-1999《测量不确定度评定与表示》,按照中国药典2010年版二部相对密度检查法,通过建立数学模型、分析不确定度来源、计算不确定度分量、合成标准不确定度和扩展不确定度等步骤,对测定过程中不确定度的引入进行了系统分析。结果当取置信概率P为95%时,乙醇相对密度值可表示为0.807 9±0.000 3。结论该方法简单、易行,适用于同类型实验的不确定度的评定。

元胡止痛片UPLC特征图谱的研究

目的建立元胡止痛片UPLC特征图谱测定方法,为元胡止痛片的质量控制提供依据。方法采用Acquity UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm,1.7μm）色谱柱;柱温40℃;检测波长270 nm;流动相为乙腈-0.3mol·L^-1的醋酸铵水溶液梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,进样量3μL。结果 UPLC特征图谱中主要成分得到有效分离,分析时间较常规液相色谱缩短了1/2～1/3。得到21个共有峰,各批次柴黄片特征图谱与对照图谱相似度均〉0.86,可用于元胡止痛片的定性鉴别。结论首次建立了元胡止痛片UPLC特征图谱的分析方法,此法简单、准确、重复性良好,可用于元胡止痛片的质量控制。

基于ITS2序列鉴定荠菜及其混伪品

目的选用ITS2序列对湖南苗药荠菜及其混伪品进行分子鉴定,为其用药安全、有效提供保障。方法采用DNA条形码技术,对荠菜的ITS2核基因片段进行扩增并双向测序,经Codon Code Aligner拼接后,用MEGA软件分析相关数据,构建邻接(NJ)系统聚类树进行鉴定分析,并用Koetschan等建立的ITS2数据库及其网站预测ITS2二级结构。结果荠菜ITS2序列长度为194 bp,其种内平均K2P遗传距离远远小于其与混淆品的种间K2P遗传距离;由所构建的系统聚类树图可以看出,各物种均表现出了单系性,而同时又与其他物种明显区分开;比较ITS2二级结构发现,各物种在4个螺旋区的茎环数目、大小、位置以及螺旋发出时的角度均有明显差异。结论 ITS2作为条形码可以方便快捷地鉴别荠菜及其混淆品,进一步验证了DNA条形码技术鉴定中药材的有效性。

喉咽清口服液pH值测定的不确定度分析

目的建立喉咽清口服液p H值测定的不确定度的分析方法。方法依据化学分析中不确定度的评估指南和JJFl059-2012《测量不确定度评定与表示》,通过建立数学模型,分析不确定度来源、计算不确定度分量、合成标准不确定度和扩展不确定度等步骤,对测定过程中不确定度的引入进行了系统分析。结果当取置信概率P为95%时,喉咽清口服液p H值的扩展不确定度为0.015(k=2)。结论本试验建立的不确定度评定方法适用于喉咽清口服液p H值测定的不确定度分析。

白扁豆的DNA条形码技术鉴别研究

目的鉴定白扁豆及其混伪品ITS2条形码,为白扁豆药材鉴定提供新方法。方法采用PCR法扩增ITS2序列,并双向测序,经Codon Code Aligner拼接后,利用MEGA软件进行数据处理,构建系统聚类树(NJ树)。结果白扁豆ITS2序列长度为218 bp,由所构建的系统聚类树图可见,各物种均表现单系性,同时又可与其它物种明显区分。结论 ITS2条形码适用于白扁豆及其混淆品的快速鉴别,进一步验证了DNA条形码技术应用于中药材鉴别的有效性。

僵蚕DNA分子鉴定的初步研究

目的用分子生物学方法,对僵蚕进行初步鉴定研究,研究其来源昆虫COI(cytochrome oxidase subunit I,细胞色素氧化酶亚基I)和来源真菌ITS(internal transcribed sequence,内转录间隔区)区的基因序列。方法对来源昆虫COI和来源真菌ITS2区基因进行了PCR扩增和序列测定,比对分析序列,并与GenBank核酸序列数据库中的序列进行检索比对。结果发现多批次僵蚕来源昆虫的COI基因序列高度一致,但来源真菌ITS基因呈现多样性。结论可通过真菌ITS序列结合来源昆虫COI序列鉴定僵蚕的真伪。

苍耳子药材的HPLC特征图谱研究

目的:建立苍耳子药材的HPLC特征图谱,为评价不同产地苍耳子的质量提供参考。方法:采用Alltima C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱,流速:0.8 ml·min^(-1),检测波长:278 nm,柱温:25℃,对来自河南、吉林、安徽等地共47批苍耳子样品运用"中药指纹图谱相似度评价系统"进行分析。结果:以绿原酸为参照峰,初步构建了由5个特征峰组成的苍耳子HPLC特征图谱。结论:该方法简便、可靠,为苍耳子药材的质量控制提供了有效的评价方法。

苗药一枝黄花及其混伪品的DNA条形码鉴别

目的选用DNA条形码对湖南苗药一枝黄花及其混伪品进行分子鉴定,为其药材鉴别与安全提供技术支撑。方法利用DNA条形码方法,分别对一枝黄花及其混伪品的ITS2核基因片段和psb A-trn H叶绿体基因片段进行扩增并双向测序,使用Codon Code Aligner软件对其序列进行拼接,用MEGA软件对数据比对分析,构建邻接(NJ)系统聚类树鉴定分析,并用Koetschan等分析预测ITS2二级结构。结果一枝黄花的ITS2序列长度为223 bp,其种内平均K2P遗传距离小于混淆品的种间K2P遗传距离;由所构建的系统NJ聚类树图表明,各物种呈现一定的区域性,又可与其它物种明显区分,而基于psb A-trn H序列构建的统聚类树图不能将一枝黄花区分;通过ITS2二级结构比对分析,一枝黄花和其混伪品的4个螺旋发出时的角度及螺旋区的茎环位置、大小、数目均有明显区别。结论 ITS2作为条形码可方便快捷地鉴别一枝黄花及其混淆品,进一步验证了DNA条形码技术鉴定中药材的有效性。