高灵敏度呕吐毒素时间分辨荧光快速定量检测卡的研发和应用

利用时间分辨荧光快速定量检测技术采用稀有元素“铕”作为示踪物,开发出一种用于检测粮食谷物中的呕吐毒素含量的高灵敏度呕吐毒素时间分辨荧光快速定量检测卡。交联剂碳二亚胺(EDC)用量25 μL/mL、抗体量10 μg/mL标记脱氧雪腐镰刀菌烯醇DON单抗并用硼酸-硼砂缓冲液(12 mmol/L,pH 7.27)体系作为喷膜稀释液喷于结合垫上。Tris-HCl (10 mmol/L,pH 7.0)作为T线划膜液体系,羊抗鸡二抗以及呕吐毒素抗原均匀地划于硝酸纤维素膜(NC)上质控线和检测线的位置,C线划膜浓度0.2 mg/mL, T2线划膜浓度0.05 mg/mL, T1线划膜浓度0.15 mg/mL。依次将样品垫、结合垫、NC膜和吸水纸组装切割装入检测卡中。测试结果表明定量值250 μg/kg的抑制率为39.54%。并进一步使用检测卡检测来自国家粮食和物资储备局科学研究院、江苏质检中心以及南京微测生物科技有限公司的18个质控样本,样本类型覆盖玉米、小麦以及小麦制品。与液相色谱法检测出的结果相符,准确度的平均值高达102.41%。该检测方法适合用于现场的快速筛查,具有广阔的市场应用前景。

四环素人工抗原的合成与鉴定

目的:对牛血清白蛋白进行羧基化和四环素的衍生化,制备更高偶联比的四环素(TC)-牛血清白蛋白(BSA)偶联物并进行鉴定。方法:四环素通过两步衍生化后,形成一种活泼的重氮化中间产物,与羧基化的BSA上的表位羧基反应,合成TC-BSA偶联物。结果:HPLC-MASS图谱鉴定表明成功的制备了四环素衍生物,红外及紫外扫描图谱表明,偶联成功,计算得偶联比分别为7∶1和11∶1。结论:BSA经过羧基化后的偶联效果明显好于未经羧基化的BSA,并成功制备了TC-BSA人工抗原。

基于时间分辨荧光快速定量检测谷物中的T-2毒素

研制开发了一种基于时间分辨荧光纳米微球的T-2毒素快速定量检测卡,并对其在谷物中的检测性能进行了研究。本研究对标记工艺、划线工艺进行了探索,通过对微球偶联时间、封闭时间等优化,确认了最佳偶联时间为30 min,最佳封闭时间为60 min;通过对NC膜的筛选、划线湿度的摸索,确认了最佳NC膜为140膜,最佳划线湿度为45%~55%。同时,对该T-2毒素快速定量检测卡进行了性能验证:该检测卡的检测限为0.480μg/kg,定量限为1.020μg/kg,添加回收定量范围为1~100μg/kg,准确度86.09%~119.57%,重复性在11.95%以内,交叉反应率<5%。具有快速定量、简单便捷、高灵敏度、高特异性、可靠性强、重复性好等优点,适合对谷物中T-2毒素进行快速定量测定。

粮食中重金属铅镉电化学快速检测方法研究

建立一种基于稀酸提取技术实现粮食中铅镉同时测定的电化学快速检测方法。通过优化提取液的种类和底物液的成分,提高方法准确性和灵敏度,实现粮食中铅和镉同时检测,并且通过科学系统的评价方案对所建立的检测方法进行性能考察,提高检测方法的稳定性。该方法镉的检出限为0.005 mg/kg,定量限为0.012 mg/kg,铅的检出限0.002 mg/kg,定量限为0.004 mg/kg,回收率范围98%~120%,相对标准偏差均小于15%,可在15 min内完成2种元素的同时检测,检测效率高。

粮食中二甲戊灵的时间分辨荧光免疫层析快速检测技术研究

粮食中二甲戊灵残留分析方法多为大型仪器检测,检测结果准确,但存在操作复杂、设备价格昂贵等问题,旨在建立一种基于免疫层析技术来检测粮食中二甲戊灵检测方法。通过研究,成功研制出一种选用时间分辨荧光微球为载体,利用二甲戊灵抗原抗体特异性反应来进行检测的快速定量检测卡,并摸索出二甲戊灵快速定量检测卡的最佳标记工艺为羊抗鼠抗体-145~198 nm微球-二甲戊灵抗体组合标记方案,最佳划膜液为PBS与CBS体系划膜液,最佳样品垫为GL0194与JL80,最佳样品稀释液体系为BBS体系。并对检测卡进行性能检测,得出其最低检出限为7.516μg/kg,最低定量限为19.873μg/kg,检测灵敏度高,可用于粮食中二甲戊灵的快速定量检测。

黄曲霉毒素B1/呕吐毒素/玉米赤霉烯酮真菌毒素三合一时间分辨荧光定量快速检测卡的优化

改进了一种基于时间分辨荧光纳米微球的黄曲霉毒素B1/呕吐毒素/玉米赤霉烯酮真菌毒素三合一荧光定量快速检测卡,一次提取,一次检测,8 min内即可得到三个项目的检测结果,快速、简易、省时省力。本项目成功优化了黄曲霉毒素B1/呕吐毒素/玉米赤霉烯酮真菌毒素三合一荧光定量快速检测卡的时间分辨纳米微球的整个制备工艺,解决了玉米赤霉烯酮(简称ZEN)的灵敏度低、黄曲霉毒素B1(简称AFB1)的均一性差、样本检测C线线条扩散等等问题。通过对微球制备工艺、微球表面修饰不同数量碳原子手臂,确认了ADZ检测卡中ZEN胶乳所用的荧光微球,即南京微测生物的200原子手臂的时间分辨荧光微球,解决了ZEN灵敏度低的问题;通过对样品垫的选择、样品垫缓冲液配方的优化,确认了样品垫工艺,即用上海捷宁生物的G-6玻纤垫,并处理样品垫缓冲液配方3,解决了AFB1的均一性差问题;通过对抗原稀释液的优化,确认了用50 mM PBS+5%蔗糖划膜液,解决了样本C线线条扩散问题。

荧光免疫层析法检测粮食谷物中重金属铅的前处理研究

基于时间分辨荧光纳米微球的重金属铅快速定量检测卡,通过对样品前处理的研究,确定了最佳提取液为0.5~1 mol/L HCl,最佳螯合剂为1~2 mmoL/L ITCBE,提高了粮食谷物中重金属铅的检测灵敏度,使得检测卡能满足粮食谷物中重金属铅快速检测的需求。并对重金属铅荧光定量检测卡的性能进行检测,其最低检出限LOD为7.428μg/kg,最低定量限LOQ为20.830μg/kg,线性范围为25~1000μg/kg,线性范围内的添加回收率为96.43%~108.34%,5次重复的变异系数在10%以内,其准确性和可靠性均可以满足欧盟和我国对重金属铅的分析标准的技术要求,且该方法具有简便快速、准确可靠、重复性好等特点,可用于不同粮食谷物中重金属铅的快速定量检测分析。

基于HRP标记抗体的黄曲霉毒素M1的直接竞争-ELISA快速检测方法

为构建快速检测乳制品中黄曲霉毒素M1(AFM1)的直接竞争-酶联免疫吸附(dc-ELISA)体系,将辣根过氧化物酶(HRP)与高纯度抗AFM1单克隆抗体进行偶联后对其与AFM1竞争性反应条件进行优化,并利用AFM1污染标准物质ERMI-BD282(0)、ERMI-BD 283(0.11μg/kg)、ERMI-BD 284(0.44μg/kg)等对检测体系的灵敏度和精确性进行验证。结果当AFM1-BSA包被质量浓度0.25μg/L、抗AFM1 mAb-HRP稀释2000倍时dc-ELISA检测AFM1的IC50为0.75μg/L,检测范围为0.015～4.05μg/L,添加AFM1至0.45μg/L的鲜奶样品中检测回收率平均为80%,dc-ELISA可满足鲜乳中AFM1国家残留限量标准0.5μg/kg的检测要求。该体系可应用于鲜奶制品中AFM 1大于0.5μg/kg污染样品的快速初筛。

基于时间分辨荧光纳米微球的玉米赤霉烯酮快速定量检测试纸条的研制及性能研究

成功研制开发了一种基于时间分辨荧光纳米微球的玉米赤霉烯酮快速定量检测试纸条,并在粮食谷物饲料等样品中对其检测性能进行了研究。该产品的最低检出限LOD为3.65μg/kg,最低定量限LOQ为8.51μg/kg,线性范围为10.00~1 000.00μg/kg,线性范围内的添加回收率为94.00%~118.33%,3次重复的变异系数在13.11%以内。与其他真菌毒素的交叉反应率均小于5%。其准确性和可靠性均可以满足欧盟和我国对玉米赤霉烯酮的分析标准的技术要求,且该方法具有简便快速、准确可靠、重复性好等特点,可用于不同粮食谷物饲料中玉米赤霉烯酮的快速定量检测分析。

基于时间分辨荧光纳米微球的呕吐毒素快速定量检测试纸条的研制及性能研究

成功研制开发了一种基于时间分辨荧光纳米微球的呕吐毒素快速定量检测试纸条,并在粮食谷物饲料等样品中对其检测性能进行了研究。该试纸条的检出限为25μg/kg,最低定量限为82μg/kg,线性范围为100~5 000μg/kg,线性范围内的添加回收率为83.51%~113.84%,同一个样本检测3次的CV<14.75%,与其他真菌毒素的交叉反应率均小于5%,与其代谢物的交叉反应率在20%以内。具有操作简便、灵敏准确、快速定量、重现性好等优点,适合对粮食谷物饲料中呕吐毒素进行快速定量测定。

黄曲霉毒素B1荧光定量检测试纸条性能评估测试

对上海飞测生物科技有限公司研发生产的黄曲霉毒素B1荧光定量检测试纸条在粮食谷物饲料中的检测性能进行了评估。该产品的最低检出限(LOD)为0.29μg/kg,最低定量限(LOQ)为0.91μg/kg,线性范围为1.00~50.00μg/kg,线性范围内的添加回收率为92.89%~121.07%,3次重复的变异系数在14.56%以内。与其它真菌毒素的交叉反应率均小于5%。该产品具有操作简便、灵敏准确、快速定量、重现性好等优点,适合用于对粮食谷物饲料中黄曲霉毒素B1进行快速定量测定。

基于时间分辨荧光纳米微球的黄曲霉毒素B1快速定量检测试纸条的研制及性能研究

成功研制开发了一种基于时间分辨荧光纳米微球的黄曲霉毒素B1快速定量检测试纸条,并在粮食谷物饲料等样品中对其检测性能进行了研究。该产品的最低检出限(LOD)为0.29μg/kg,最低定量限(LOQ)为0.91μg/kg,线性范围为1.00~50.00μg/kg,线性范围内的添加回收率为92.87%~121.33%,3次重复的变异系数在14.80%以内,与其它真菌毒素的交叉反应率均小于5%。其准确性和可靠性均可以满足欧盟和我国对黄曲霉毒素B1的分析标准的技术要求,且该方法具有简便快速、准确可靠、重复性好等特点,适合用于对粮食谷物饲料中黄曲霉毒素B1的进行快速定量测定。

Windows平台下利用IPMI接口的开发探究

文中介绍了服务器IPMI接口可以脱离操作系统工作的原理,以及现有的两种常见的IPMI工具Ipmitool和Ipmiuitl的使用。探讨了在Window平台下利用IPMI接口进行服务器监控程序开发的两种实现。

赭曲霉毒素A时间分辨荧光侧流层析试纸条的研究

目的构建一种基于时间分辨荧光纳米微球的赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)侧流层析试纸条。方法基于免疫层析原理,以时间分辨荧光纳米微球为信号探针,降低非特异性荧光的干扰,提高检测灵敏度,并通过优化样品提取液和样品稀释液,进一步提高现场检测OTA的灵敏度和准确性。结果OTA在1.0~50.0μg/kg范围内,T线和C线荧光强度比值与OTA浓度的对数线性关系良好,相关系数r 2为0.9981~0.9998。不同基质中OTA的检出限和定量限分别为0.401~0.614μg/kg和0.973~1.617μg/kg,加标回收率为89.53%~118.37%,相对标准偏差(relative standard deviations,RSDs)小于12%(n=3),且与将呕吐毒素、伏马菌素B1、黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的交叉反应率均小于5%,特异性良好。OTA侧流层析试纸条基于荧光定量快速检测技术平台可在8 min内快速准确地定量测定出待测样本中OTA含量。结论本研究所制备的时间分辨荧光侧流层析试纸条可实现玉米、小麦和饲料中OTA的快速定量检测,并具有成本低、灵敏度高、操作简便、准确高、重复性好、特异性好的优点,可满足国内外OTA检测的技术要求,为真菌毒素的快检技术的发展提供了技术支撑。

基于时间分辨荧光纳米微球的伏马毒素B1快速定量检测卡的制备及应用

为了满足粮食谷物中伏马毒素B1快速定量检测的需求,以伏马毒素B1为研究对象,建立了基于时间分辨荧光纳米微球的FB1荧光快速定量检测卡,检测前无需调整样品提取液pH,并借助酶联免疫试剂盒及高效液相色谱法分析比对了该荧光定量快速检测卡在粮食谷物(大米、玉米、小麦)中的检测性能。结果表明其检测不同样品的LOD在35.37~37.17μg/kg之间,LOQ在117.9~123.9μg/kg之间,灵敏度良好;线性范围均为250~6000μg/kg,相关系数R2在0.9972~0.9995之间;不同样品中6个添加水平的加标回收率为83.38%~114.66%,变异系数(CV)小于15%,准确性和重复性良好;国标液相色谱法和伏马毒素B1荧光定量快速检测卡同时检测FB1污染的不同样品,检测结果的符合度为92.53%~106.26%,CV小于10.37%;与其他常见的5种真菌毒素的交叉反应率均小于5%,且添加浓度和检出浓度的差异极显著,表明特异性良好。因此,所制备的FB1荧光定量快速检测卡能够满足粮食谷物中伏马毒素B1现场化快速定量检测的需求。

小麦中呕吐毒素的分布规律及加工影响

采用自然污染不同程度呕吐毒素的小麦为材料,通过检测制粉工艺过程中不同产物如麸皮、细麸、皮粉、心粉中呕吐毒素含量,探索小麦不同部位呕吐毒素的含量分布及制粉工艺中去除DON的效果。结果表明:呕吐毒素在小麦中的污染程度从外到内逐步递减;经过小麦制粉加工工艺后,存留在面粉中的DON浓度仅为原来小麦中DON浓度的49.17%~77.68%,而粗麸及细麸中DON浓度为原来小麦中DON浓度的132.00%~185.96%。另外,小麦中呕吐毒素的含量跟赤霉病粒的含量不存在完全的一一对应的线性关系,赤霉病粒含量的多少不能完全反应小麦中呕吐毒素的含量。

基于时间分辨荧光微球的黄曲霉毒素B1定量检测卡灵敏度的优化

优化了基于时间分辨荧光纳米微球的黄曲霉毒素B_(1)定量检测卡的灵敏度。对标记工艺、划线工艺进行了研究,通过对微球粒径、黄曲霉毒素B_(1)抗体细胞株的筛选,确认了最优微球粒径为300 nm~400 nm,最优黄曲霉毒素B_(1)抗体细胞株为细胞株2;通过不同T线划线数量、不同爬速NC膜的对比,确定了最佳T线划线数量为双T线,最优NC膜为120~140膜。优化的黄曲霉毒素B_(1)检测卡的性能如下:1 ppb抑制率达36.42%,定量范围达1 ppb~50 ppb,抑制率范围为36.42%~97.62%,具有灵敏度高、重复性好等优点。

黄曲霉毒素B_(1)荧光定量快速检测试纸卡和仪器技术性能优化研究

基于时间分辨荧光微球制备的黄曲霉毒素B_(1)荧光定量快速检测试纸卡,通过两线及三线试纸卡灵敏度与重复性的对比,筛选出效果更优的三线试纸卡,并对三线试纸卡不同性能要求进行检测验证。结果表明,黄曲霉毒素B_(1)三线试纸卡检出限与定量限符合要求,准确度、重复性、稳定性等均达到更优的效果,更能满足检测需求。

呕吐毒素荧光定量快速检测试纸卡及仪器技术性能优化的研究报告

基于时间分辨荧光微球制备的呕吐毒素荧光定量快速检测试纸卡,通过两线及三线试纸卡灵敏度与重复性的对比,筛选出效果更优的三线试纸卡,并对三线试纸卡不同性能要求进行检测验证。结果表明,呕吐毒素三线试纸卡检出限与定量限符合要求,准确度、重复性、稳定性等均达到更优的效果,更能满足快速定量检测要求。

玉米赤霉烯酮荧光定量快速检测试纸卡及仪器技术性能优化的研究报告

基于时间分辨荧光微球制备的玉米赤霉烯酮荧光定量快速检测试纸卡,通过两线及三线试纸卡灵敏度与重复性的对比,筛选出效果更优的三线试纸卡;通过50 mM与100 mM离子浓度缓冲稀释液对不同pH值样本检测准确度的对比,筛选出对pH值兼容范围更广的100 mM离子浓度缓冲稀释液;并对选用100 mM离子浓度缓冲稀释液的三线试纸卡的不同性能要求进行检测验证。结果表明,选用100 mM离子浓度缓冲稀释液的玉米赤霉烯酮三线试纸卡检出限与定量限符合要求,准确度、重复性、稳定性等均达到更优的效果,更能满足快速定量检测需求。