基于80α噬菌体内溶素与SpyCatcher/SpyTag系统的高效金黄色葡萄球菌检测工具设计

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)广泛分布于自然界,是导致食源性疾病的主要病原体之一。为构建一种简便且灵敏的检测金黄色葡萄球菌的方法,该文将80α噬菌体内溶素模块中有着特异性宿主识别和结合作用的催化结构域与细胞结合域模块(Amidase 3⁃CBD)利用SpyCatcher/SpyTag蛋白交联系统有方向性的固定在Ni磁珠表面从而构建免疫磁珠Ni⁃SpyCatcher⁃SpyTag⁃Amidase 3⁃CBD用于捕获金葡金黄色葡萄球菌,再利用等温扩增(re⁃combinase polymerase amplification,RPA)和CRISPR/Cas12a显色切割即可在37℃下2 h内完成检测,并且人工污染牛奶样品中金黄色葡萄球菌的最低检测限为1×102 CFU/mL。该技术不需要专业技术人员或辅助设备,便可实现对金黄色葡萄球菌的高效检测。

卷叶贝母FcLEA-D29基因的克隆及原核表达分析

卷叶贝母作为传统名贵中药材川贝母的最珍贵来源,产量和品质易受逆境影响。为开展对卷叶贝母抗逆基因的发掘研究,该研究基于卷叶贝母转录组数据,获得1个胚胎晚期丰富蛋白(LEA)基因,命名为FcLEA-D29。通过生物信息学分析该基因序列特征及蛋白结构特点,qRT-PCR检测不同组织及温度胁迫响应表达,并通过原核表达系统验证了FcLEA-D29耐受低温的生物学功能。结果显示,FcLEA-D29基因开放阅读框为777 bp,编码258个氨基酸,多重序列比对预测分析该蛋白属于LEA3家族的LEA-D29亚族;qRT-PCR结果表明FcLEA-D29在鳞茎中特异性表达,响应低温诱导,重组表达菌低温胁迫后的生长情况明显好于对照菌,表明FcLEA-D29可能在卷叶贝母鳞茎发育和低温响应中发挥作用。该研究结果将为进一步探讨FcLEA-D29基因在卷叶贝母低温胁迫下次生代谢产物尤其是生物碱积累机制中的作用奠定了基础,为揭示卷叶贝母低温适应提供直接的分子依据。