RhoA/ROCK通路调控小胶质细胞极化的研究进展

小胶质细胞广泛参与中枢神经系统的多种病理生理过程,其极化特性则与神经元的炎症反应和损伤修复密切相关。Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路对小胶质细胞极化具有重要的调控功能。目前,通过促进小胶质细胞M2型极化治疗神经元受损的相关研究已成为神经科学领域的热点之一,但RhoA/ROCK通路对极化的调控作用仍未明确。本文综述RhoA/ROCK信号通路对小胶质细胞极化的影响,以期为脑保护分子机制研究及临床治疗提供新思路。

维甲酸受体反应蛋白2活化NLRP3炎症小体在慢性阻塞性肺疾病炎性损伤中的作用机制研究

目的:探究维甲酸受体反应蛋白2(RARRES2)是否通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体及下游炎症因子的表达来调控慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠的的炎性损伤。方法:通过烟熏法构建COPD小鼠模型,选取C57BL/6J野生型雌性成年小鼠32只,体重18~22 g,随机分为4组(n=8):空白对照小鼠组(control组)、COPD小鼠组(COPD组)、注射阴性对照siRNA的COPD小鼠组(COPD+NC组)及注射RARRES2-siRNA加COPD小鼠组(COPD+siRNA组),COPD+NC组和COPD+siRNA组每4 d注射一次对应siRNA。HE染色和免疫组织化学染色观察肺组织病理学变化,湿干重比评估各组肺水肿程度,血气分析计算氧合指数评估各组肺功能情况。Western blot和免疫组织化学染色检测RARRES2、NLRP3、caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18表达水平。ELISA检测支气管肺泡灌洗液和血浆中IL-1β和IL-18水平,比较肺部炎性损伤程度。结果:与control组相比,COPD组小鼠肺湿干重比、肺功能损伤程度、RARRES2、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18表达水平均显著上升(P<0.05)。与COPD组相比,COPD+NC组小鼠肺干湿重比、肺功能损伤程度、RARRES2、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18表达水平的差异无统计学意义(P>0.05);COPD+siRNA组小鼠肺干湿重比、肺功能损伤程度、RARRES2、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18表达水平显著下降(P<0.05)。结论:RARRES2可通过活化NLRP3炎症小体从而上调IL-1β和IL-18表达,提示其可能参与了小鼠COPD炎性损伤的发生和发展。

单核细胞趋化蛋白1诱导蛋白在脓毒症大鼠急性肺损伤中的作用

目的评价单核细胞趋化蛋白1诱导蛋白(MCPIP-1)在脓毒症大鼠急性肺损伤中的作用。方法清洁级健康雄性SD大鼠48只,8~12周龄,体重230~270 g,采用随机数字表法分为6组(n=8):假手术组(S组)、不同剂量泛素-蛋白酶体抑制剂组(M_(1)组和M_(2)组)、盲肠结扎穿孔(CLP)组和不同剂量泛素-蛋白酶体抑制剂+CLP组(M_(1)-CLP组和M_(2)-CLP组)。采用CLP法制备大鼠脓毒症急性肺损伤模型。M_(1)组和M_(2)组假手术前30 min分别腹腔注射泛素-蛋白酶体抑制MG-1325、10 mg/kg;M_(1)-CLP和M_(2)-CLP组于CLP前30 min分别腹腔注射MG-1325、10 mg/kg。于CLP后6 h时处死大鼠,制备支气管肺泡灌洗液(BALF),采用ELISA法检测TNF-α、IL-1β及IL-6浓度;取肺组织,行肺损伤评分,计算肺组织湿重/干重(W/D)比值,分别采用Western blot法和RT-PCR法检测MCPIP-1及其mRNA表达。结果与S组比较,CLP组肺损伤评分、W/D比值、BALF TNF-α、IL-1β及IL-6浓度升高(P<0.05),M_(1)组、M_(2)组上述指标差异无统计学意义,CLP组肺组织MCPIP-1及其mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),M_(1)组和M_(2)组肺组织MCPIP-1及其mRNA表达上调(P<0.05);与CLP组比较,M_(1)-CLP组和M_(2)-CLP组肺损伤评分、W/D比值、BALF TNF-α、IL-1β及IL-6浓度降低,肺组织MCPIP-1及其mRNA表达上调(P<0.05)。结论MCPIP-1在脓毒症大鼠急性肺损伤时发挥内源性保护作用。

小檗碱对吗啡诱导BV2小胶质细胞活化的影响

目的评价小檗碱对吗啡诱导BV2小胶质细胞活化的影响。方法 BV2小胶质细胞采用随机数字表法分为3组(n=12):对照组(C组)、吗啡组(Mor组)和吗啡+小檗碱组(Mor+BBR组)。Mor组使用终浓度为200 μmol/L吗啡处理24 h, C组加入等量PBS处理24 h。Mor+BBR组使用终浓度为20 μmol/L小檗碱处理2 h后再使用终浓度为200 μmol/L吗啡处理24 h。采用CCK-8法测定BV2小胶质细胞活力, ELISA法测定上清液IL-1β、TNF-α和IL-10浓度, Western blot法检测小胶质细胞CD86和NF-κB的表达。结果与C组比较, Mor组细胞活力、上清液IL-1β和TNF-α浓度升高, IL-10浓度降低, 小胶质细胞CD86和NF-κB表达上调(P<0.05);与Mor组比较, Mor+BBR组细胞活力、上清液IL-1β和TNF-α浓度降低, IL-10浓度升高, 小胶质细胞CD86和NF-κB表达下调(P<0.05)。结论小檗碱可抑制吗啡诱导BV2小胶质细胞的活化。

机械通气相关性肺损伤对大鼠血脑屏障通透性的影响

目的观察机械通气相关性肺损伤(VILI)对大鼠血脑屏障通透性的影响。方法将48只健康清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、小潮气量(LVT)机械通气组(LVT组)、常规潮气量(NVT)机械通气组(NVT组)和大潮气量(HVT)机械通气组(HVT组),每组12只。Sham组大鼠麻醉后行气管插管,保留自主呼吸;不同潮气量(VT)各组大鼠行气管插管机械通气,VT分别为6 mL/kg(LVT组)、10 mL/kg(NVT组)、20 mL/kg(HVT组),吸呼比均为1∶1,通气频率均为40次/min,通气时间均为3 h。机械通气结束后收集大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中促炎因子〔肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL-1β、IL-6)〕水平。取大鼠肺组织,计算肺湿/干质量(W/D)比值;苏木素-伊红(HE)染色后,光镜下观察肺组织病理学改变,并进行肺损伤评分。取大鼠脑组织,测定含水量,并通过检测脑组织中伊文思蓝(EB)含量以反映血脑屏障通透性;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测脑组织中紧密连接蛋白的表达水平。结果机械通气3 h后,随着VT增加,VILI大鼠肺损伤程度逐渐加重;当VT达到20 mL/kg时,肺组织结构明显破坏,肺泡壁水肿,肺泡内充血,肺间质增厚,大量炎症细胞浸润,且肺损伤评分、肺W/D比值及BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6水平均较Sham组显著升高〔肺损伤评分(分):10.6±1.1比1.4±1.0,肺W/D比值:6.6±0.8比3.7±0.6,TNF-α(ng/L):832.9±97.9比103.8±23.3,IL-1β(ng/L):68.9±14.1比15.7±2.6,IL-6(ng/L):70.8±16.4比20.3±5.4,均P<0.05〕。此外,大鼠在发生肺损伤的同时,还伴随着持续加重的脑损伤;当VT达到20 mL/kg时,脑组织含水量和EB含量均较Sham组明显升高〔脑组织含水量:(85.4±3.6)%比(68.7±2.7)%,脑组织EB含量(μg/g):887±78比97±14,均P<0.05〕,脑组织中封闭蛋白-5(claudin-5)、闭合蛋白(occludin)及闭锁小带蛋白-1(ZO-1)表达均较Sham组明显下调〔claudin-5蛋白(claudin-5/β-actin):0.67±0.12比1.45±0.19,occludin蛋白(occludin/β-actin):0.48±0.11比0.99±0.21,ZO-1蛋白(ZO-1/β-actin):0.13±0.03比0.63±0.12,均P<0.05〕。结论VILI可诱导大鼠脑水肿及血脑屏障通透性增加,其机制可能与下调脑组织紧密连接蛋白的表达有关。

肺开放策略对腹腔镜手术老年衰弱患者心肺功能的影响

目的:评价肺开放策略(OLS)对腹腔镜手术老年衰弱患者心肺功能的影响。方法:择期全麻下拟行腹腔镜直肠肿瘤根治术或前列腺癌根治术患者84例,年龄65~80岁,BMI 18.5~30.0 kg/m 2,ASA分级Ⅱ或Ⅲ级,术前Fried衰弱量表评分≥3分,采用随机数字表法分为2组(n=42):OLS组和非OLS组(NOLS)组。OLS组患者术中给予进阶式肺复张和个体化呼气末正压(PEEP)。NOLS组患者给予5 cmH_(2)O的固定PEEP。于气管插管后10 min(T_(0))、肺复张达到峰值后即刻(T_(1))、个体化PEEP设定后30 min(T_(2))、1 h(T_(3))和手术结束前10 min(T_(4)),采用经食管超声心动图测量心功能指标,测量视神经鞘直径(ONSD),并记录动脉血气分析指标和肺功能指标。于术前、术后1和2 d采用化学发光法测定血清肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)浓度。记录术后7 d内术后肺部并发症的发生情况和术后预后指标。结果:最终纳入81例患者:NOLS组41例,OLS组40例。与NOLS组比较,OLS组T_(1),2时左心室舒张末期面积、左心室射血分数、每搏量、二尖瓣口血流舒张早期峰值速度/二尖瓣环舒张早期峰值速度比值、二尖瓣环收缩期位移、左心室整体纵向应变值、右心室舒张末期面积、右心室面积改变分数、三尖瓣环收缩期位移、右心室整体纵向应变值降低(P<0.05),其余时点上述指标差异无统计学意义(P>0.05),T_(1-4)时PaO_(2)、氧合指数、肺顺应性升高,PaCO_(2)、肺泡-动脉血氧分压差降低,术后7 d内肺部并发症总发生率降低,PACU滞留时间、首次下床活动时间和术后住院时间缩短(P<0.05),各时点ONSD、血清cTnT、CK-MB、NT-proBNP浓度差异无统计学意义(P>0.05)。结论:OLS可改善老年衰弱患者肺功能,有利于患者预后,又不会对心脏产生明显的负面影响,可安全用于无明显心功能障碍的老年衰弱患者术中气道管理。