猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——带毒细胞传代及其适应能力的观察

前报试验结果表明:猪瘟病毒在牛肾细胞上培养,能大量释放病毒,收液含毒滴度的高低与种毒的质量和用量有密切关系,接入大量良好的种毒,毒价可稳定地达到20000～50000倍合格的要求,降低种毒质量和用量,毒价随之下降,毒价的起伏,似乎又说明猪瘟病毒在牛肾细胞上培养,并未完全适应。为了了解病毒在牛肾细胞上的适应情况,提高病毒的适应能力,我们试图通过带毒细胞传代进行观察,同时探索带毒细胞培养及产毒能力。鉴于8305批等几批细胞经过长期离体培养和多次接毒、收毒,仍能正常繁殖,所以选用8305批细胞(以下简8305)进行了上述试验观察,其结果报告如下。

猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——以免疫荧光法对猪瘟兔化弱毒在牛肾细胞上繁殖释放过程观察

文献记载,猪瘟病毒的自然感染谱只限于猪属动物。在实验条件下能使不同家畜和实验动物感染,并能在多种动物细胞中繁殖,但在牛肾细胞上的繁殖、释放情况未见报告。设想如能用牛肾细胞培养猪瘟兔化弱毒(以下简称兔毒),并掌握其繁殖释放过程。

猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——疫苗试制、检验、保存及区域试验

自1981年初开展猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究以来,先后完成了一系列基础实验。在1983年试制第1批牛肾细胞苗的基础上,又重复试生产6批苗,经效检,均合乎标准。现将疫苗试制、检验、保存及区域试验结果报告如后。材料与方法（一）种毒 系农业部成都药械厂提供的480代冻干毒和F505代兔脾毒（湿毒）,经本室复壮,选择定型热兔脾脏作为种毒,要求毒价不低于2×10-5ID/ml。也可选用5万倍合格的细胞毒做种毒,脾毒和细胞毒以新鲜者为佳。

猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——牛肾细胞培养及其生物学性状的观察

用牛肾上皮细胞培养猪瘟兔化弱毒,生长繁殖良好,并不断从细胞中释放出来,猪瘟兔化弱毒在牛肾细胞上培养,不引起肉眼可见病变,用免疫荧光法可在接毒后6小时从胞浆中发现特异性荧光,接毒后18小时,可用家兔在细胞培养物中检出病毒。用带毒细胞传代,能促进兔毒在牛肾细胞上的适应能力,细胞传代后经3个多月培养,其间多次换液,不接毒,细胞收液的病毒滴度可稳定的达到1:20000,用盖玻片作带毒传代细胞单层培养,用姬姆萨染色镜检,可在许多细胞浆中发现原生小体样紫色颗粒,用H·E染色,可在胞浆中发现嗜伊红包涵体样颗粒,初步认为猪瘟兔化弱毒在牛肾细胞上培养,可产生包涵体。用牛肾细胞大瓶旋转培养猪瘟兔化弱毒,能生产疫苗,并可多次接毒、收毒,收毒次数达20余次,疫苗毒价可达1:50000,少数批次可达1:100000,对猪有良好免疫力,本试验1987年10月在云南生药厂已完成中试生产,先后冻干疫苗5批,一次效检50000倍合格的占80％,20000倍合格的占20％,各项检验指标符合规程要求,区域试验注射各种猪只40000余头,证明安全有效,疫苗在-18～-20℃保存1年,未见毒价下降。

猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——猪瘟病毒在牛肾细胞上的培养及影响毒价因素的观察

用免疫荧光法对猪瘟兔化弱毒(以下简称兔毒)在牛肾细胞上繁殖释放过程的研究证明,兔毒虽然能够在牛肾细胞上繁殖释放,但接毒后96小时,感染细胞量仅50％,培养物中毒价甚低。为此,我们对猪瘟兔毒在牛肾细胞上的培养及提高其毒价和影响毒价的因素进行了探讨。