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形成三螺旋DNA的寡核苷酸抑制内皮细胞组织因子基因的表达 被引量:2
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作者 李黔宁 应大君 +7 位作者 戴光明 郑健 肖道虹 邓志宽 刘勇 刘立杰 周永琴 任萍 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2002年第3期190-194,共5页
为探讨形成三螺旋DNA的寡核苷酸是否对切应力诱导内皮细胞组织因子基因表达有抑制作用 ,针对内皮细胞组织因子基因启动子内切应力反应元件 ,设计反向脱氧寡核苷酸序列T2 1GTa,采用固相亚磷酰胺三酯固相法合成脱氧寡核苷酸。在脱氧寡核... 为探讨形成三螺旋DNA的寡核苷酸是否对切应力诱导内皮细胞组织因子基因表达有抑制作用 ,针对内皮细胞组织因子基因启动子内切应力反应元件 ,设计反向脱氧寡核苷酸序列T2 1GTa,采用固相亚磷酰胺三酯固相法合成脱氧寡核苷酸。在脱氧寡核苷酸的 3’末端进行硫代磷酸酯修饰。应用电泳迁移分析观察寡核苷酸和硫代脱氧寡核苷酸的亲和性。在ECV30 4内皮细胞株观察γ 32P标记硫代磷酸酯三螺旋DNA寡核苷酸的细胞摄取及其对组织因子基因表达的影响。结果发现 ,硫代磷酸酯寡核苷酸T2 1GTa ps与靶序列能形成三链DNA ,其Kd值为 3 .6× 1 0 1 0 mol L。在内皮细胞株ECV30 4细胞 ,三螺旋DNA寡核苷酸 ps (T2 1GTa ps)的细胞吸收率为 1 1 .65 % ,主要分布在核沉淀 ,约占吸收总量的 77.2 5 % ,显著降低内皮细胞组织因子基因mRNA表达及组织因子蛋白合成的平均吸光度值 ,显著降低组织因子的促凝活性。此结果提示 ,硫代磷酸酯寡核苷酸T2 1GTa 展开更多
关键词 寡核苷酸 三螺旋型 组织因子基因 基因表达 血管内皮
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3条硫代寡核苷酸的亲和性与内皮细胞吸收的比较研究 被引量:1
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作者 李黔宁 戴光明 +7 位作者 郑健 肖道虹 邓志宽 刘勇 任萍 周永琴 刘立杰 应大君 《中国微循环》 2002年第6期325-328,共4页
目的研究硫代寡核苷酸的亲和性及其在内皮细胞株的吸收与亚细胞分布。方法 利用电泳迁移分析法检测硫代寡核苷酸的亲和性;将同位素标记的硫代寡核苷酸与ECV304细胞直接孵化,24 F后测定内皮细胞的吸收率及亚细胞分布。结果3条硫代寡核苷... 目的研究硫代寡核苷酸的亲和性及其在内皮细胞株的吸收与亚细胞分布。方法 利用电泳迁移分析法检测硫代寡核苷酸的亲和性;将同位素标记的硫代寡核苷酸与ECV304细胞直接孵化,24 F后测定内皮细胞的吸收率及亚细胞分布。结果3条硫代寡核苷酸(T21GTa、T14Gta及T15Gta)的亲和性(Kd值)分别为2.3×10-9、3.8×10-9及1.5×10-8(M).细胞吸收率分别为11.9%、10.8%、11.1%,核沉淀放射活性分别为77.25%、76.75%、69.32%。结论3条硫代寡核苷酸能够与内皮细胞TF基因SSRE的3个Egr-1/Spl位点结合,具有较好的透膜性、耐酶性及稳定性,能够透过内皮细胞膜和核膜,抵达核内靶基因部位。 展开更多
关键词 比较研究 硫代寡核苷酸 细胞吸收 亚细胞分布
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Cellular uptaking rate and subcellular distribution of thiooligonucleotide which can inhibit cerebral thrombosis
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作者 李黔宁 应大君 +7 位作者 戴光明 郑健 王东武 肖道虹 刘勇 邓志宽 刘立杰 周永琴 《中国临床康复》 CSCD 2003年第1期128-129,共2页
AIM:To explore the membrane permeability, enzyme tolerance, and stability of phosphorothioate oligodeoxynucleotide(P ODN) which can inhibit cerebral thrombosis.METHODS:(1)Oligodeoxynucleotide was synthesized with phos... AIM:To explore the membrane permeability, enzyme tolerance, and stability of phosphorothioate oligodeoxynucleotide(P ODN) which can inhibit cerebral thrombosis.METHODS:(1)Oligodeoxynucleotide was synthesized with phosphoramidite method in solid phase,3’ end was modified with thiophosphoter.(2)Uptake and subcellular distribution of P ODN.P ODN was given directly.We observed total uptake rate of P ODN by ECV304 cells and subcellular distribution of P ODN.RESULTS:(1)ECV cells uptake more P ODN with increase of concentration,the uptake rate was about 10.8%-11.9%.(2)Subcellular distribution of P ODN:P ODN was mainly distributed in nucleus especially nucleus sediments(69.3%-77.2%)(P< 0.05).CONCLUSION:P ODN suppressing cerebral thrombosis has favorable transmembrane ability,enzyme resistance and stability. 展开更多
关键词 脑血栓形成 硫代寡核苷酸 细胞摄取率 亚细胞分布
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