注浆加固技术在路基中的适用性研究

室内试验作为注浆加固技术应用分析的重要手段,能科学指导注浆施工与检测,对提高注浆加固效果具有重要意义。为有效提升公路路基注浆加固效果,保证公路运营安全性、稳定性,结合室内试验,对注浆加固技术在路基中的适用性进行综合探究,论述了砂土注浆理论基础,分析了砂土的特征参数,通过砂土中水泥浆液渗透试验可以得出:粒径为0.6~1.18的多孔介质能有效阻止水泥浆液中水泥颗粒的渗透作用,利用水泥浆进行路基加固时,当土颗粒粒径低于此范围时,浆液渗透性较差,达不到加固效果。

裸鼹鼠抵抗病毒感染相关机制的初步研究

目的 探讨多聚肌苷-多聚胞苷酸钠盐（PolyI∶C）诱导下裸鼹鼠肺脏、肠组织的病理变化以及低氧诱导因子（HIF-1 α）和坏死因子（NF-κB）信号通路关键基因的表达水平,分析裸鼹鼠抵抗病毒可能的分子机制.方法 裸鼹鼠分为PolyI∶C处理组、生理盐水对照组.注射12h后处死动物,肺脏和肠组织切片经HE染色后观察病理变化;提取裸鼹鼠肺脏、肠组织中mRNA,采用半定量RT-PCR方法检测基因HIF-1 α、VEGFb（血管内皮生长因子b）、VEGF c（血管内皮生长因子c）、FLT-1（血管内皮生长因子受体1）、Fiz1（血管内皮生长因子受体3结合锌指蛋白1）、NKRF（转录因子NRF蛋白）的表达水平.结果 与对照组相比,PolyI∶C处理组的肺脏和肠组织病理变化不明显,而所检测基因的表达水平几乎都显著下降,仅肠组织中的FIZ1的表达水平有所上升（P＞0.05）.结论 PolyI∶C对裸鼹鼠没有产生明显的致病作用,它不能诱导裸鼹鼠体内HIF-1α和NF-κB信号通路活化,提示裸鼹鼠可能通过抑制相关信号通路的活性促使体内受感染的靶细胞迅速凋亡,从而清除入侵的病原体.

氯化钴诱导低氧对裸鼹鼠肝星形细胞增殖及凋亡的影响

目的 比较研究氯化钴（CoCl2）对裸鼹鼠及C57BL/6J小鼠肝星形细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用活细胞计数试剂盒（CCK8）法和流式细胞术分别检测不同浓度CoCl2对裸鼹鼠和小鼠肝星形细胞增殖活力以及和凋亡水平的影响.采用蛋白印迹测定CoCl2处理后裸鼹鼠肝星形细胞低氧诱导因子1α（HIF-1α）和凋亡相关蛋白（BCL2、BAX）的表达水平.结果 低浓度（50 μtmol/L）CoCl2对C57BL/6j、鼠肝星形细胞增殖活性具有明显的抑制作用,并能显著提高其凋亡率,然而同样剂量的CoCl2能够显著提高裸鼹鼠肝星形细胞的增值活性,对细胞凋亡率亦无明显影响.高剂量CoCl2（＞200 μtmol/L）虽能导致裸鼹鼠肝星形细胞增殖活力的降低,及凋亡率的升高,但裸鼹鼠肝星形细胞的变化幅度明显小于小鼠.同时CoCl2处理后,裸鼹鼠肝星形细胞HIF-1α的表达或累积显著升高（P＜0.05）,BCL2/BAX比率显著上调（P＜0.05）.结论 与C57BL/6J小鼠相比,裸鼹鼠肝星形细胞具有更强的抵抗CoCl2引起的化学性低氧损伤的能力.同时HIF-1α可能参与调控裸鼹鼠抵抗化学性低氧环境造成的损伤.

裸鼹鼠不同组织中低氧相关基因的表达

目的 检测幼年与成年裸鼹鼠肺脏、肝脏和脑组织中低氧相关基因的表达水平,分析裸鼹鼠耐低氧的分子机制.方法 分别提取幼年与成年裸鼹鼠肺脏、肝脏和脑组织中mRNA,采用RT-PCR方法检测低氧相关HIF-Iα、VEGFb、FLT-1、FLT-3、Fiz1、NKRF基因的表达.结果 成年裸鼹鼠肺脏、肝脏和脑组织中HIF-1α、VEGFb、FLT-1、FLT-3、Fiz1、NKRF的表达水平显著高于幼年裸鼹鼠.结论 裸鼹鼠体内低氧相关基因在不同年龄阶段表达水平不同.

海洛因成瘾对大鼠海马CA3区NR1、NR2A亚基表达的影响

目的观察海洛因依赖大鼠海马CA3区NMDA受体NR1、NR2A亚基的表达。方法将40只SD大鼠随机分成海洛因依赖组、海洛因+MK801组、海洛因戒断组及对照组,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术半定量检测海马NMDA受体NR1、NR2A亚基mRNA的表达。结果与对照组比较,海洛因依赖组、海洛因戒断组和海洛因+MK801组的NR1表达明显升高(P<0.05),且海洛因依赖组NR1的表达明显高于海洛因戒断组和海洛因+MK801组,海洛因戒断组与海洛因+MK801组的NR1表达差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,海洛因+MK801组NR2A的表达降低(P<0.05),海洛因戒断组NR2A表达升高(P<0.05),依赖组NR2A的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论海洛因依赖可使大鼠海马CA3区NR1的表达明显上调。海洛因戒断的大鼠海马CA3区NR2A表达上调,使用MK801干预的大鼠海马CA3区NR2A表达下调。

体外培养细胞生物节律研究进展

所有的生物体都存在着调节自身生命活动的生物钟,而使得生命体的各种活动得以有规律的进行。例如,机体内的许多生理活动过程(睡眠-觉醒循环、温度、心率、血压、内分泌、肾脏的活动、肝脏的代谢活动)都受到昼夜节律的调节,即都在昼夜节律起搏器的控制之下。体外培养的机体组织和细胞的生理活动同样具有生物节律特征。本文对体外培养细胞生物钟进行了简要的概述,分析了神经元和外周组织细胞生物钟的分子机制以及存在的问题,为全面阐释生物钟的分子机制提供参考。

MK-801对海洛因成瘾大鼠学习记忆功能的影响

目的探讨MK-801对海洛因成瘾大鼠学习记忆功能的影响。方法将30只SD大鼠随机分成海洛因成瘾组、MK801组及对照组。采用Morris水迷宫实验中的定位航行实验以及空间探索实验评价各组大鼠学习记忆能力。结果定位航行实验中,各组大鼠逃避潜伏期和搜索距离均随训练进程延长而逐渐缩短;成瘾组大鼠搜索距离大于MK-801组和对照组(P<0.05)。空间搜索实验中,成瘾组大鼠安全岛所在象限搜索时间及安全岛所在象限游泳距离占总距离的百分比均小于对照组及MK-801组(P<0.05),但对照组与MK-801组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论海洛因成瘾可损伤大鼠学习记忆能力,MK-801可减轻海洛因造成的大鼠学习记忆功能损伤。

海洛因依赖大鼠海马CA3区PS幅值的变化

目的:应用细胞外电生理记录方法观察海洛因依赖大鼠海马CA3区的长时程增强(LTP)变化。方法:将40只SD大鼠随机分成海洛因依赖组、海洛因+MK801组、海洛因戒断组及空白对照组,在体记录由刺激海马外侧穿通纤维(lateral perforant path,LPP)所诱发的CA3区细胞群体峰电位幅值(PS幅值)。结果:高频刺激后第1、5、10、20、30、40、50、60 min时点的PS幅值变化率在戒断组明显低于对照组?海洛因依赖组和海洛因+MK801组,差异有显著性;海洛因依赖组、对照组与海洛因+MK801组的差异无显著性。结论:海洛因戒断大鼠海马CA3区LTP效应受损。

单细胞测序在干细胞生物学中的应用研究进展

细胞间的变异或异质性是干细胞群的基本和内在特征。传统的组学分析在混合细胞群体上进行,导致这些差异被掩盖。近年来,单细胞基因组、表观基因组、转录组测序等技术发展迅速,为全面解析细胞异质性和识别不同表型细胞类型提供了强有力的工具。这些方法应用于不同类型的干细胞,包括多能干细胞和组织特异性干细胞,取得了令人兴奋的新发现。本文综述了单细胞组学测序技术的最新进展,并对单细胞组学测序的方法和应用前景进行了展望。

RNA干扰抑制Beclin1基因对裸鼹鼠成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的应用RNA干扰技术抑制自噬调控基因Beclin 1的表达,检测Beclin 1表达对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞增殖与凋亡的影响以及p53、BAX、Bcl2等基因表达的影响。方法分别检测裸鼹鼠成纤维细胞经饥饿、H_2O_2刺激等处理后Beclin 1的表达,然后采用设计的Beclin l基因的干扰RNA及阴性对照分别瞬时转染裸鼹鼠成纤维细胞。采用real-time PCR及Western blot法检测沉默效果后,采用CCK-1实验检测沉默后细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,然后采用Western blot检测相关基因蛋白表达水平。结果饥饿与H_2O_2刺激均能导致Beclin 1表达水平的改变。采用gene expresso转染试剂对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞转染效率可达到90%以上,real-time PCR及Western blot结果显示所设计的Beclin 1 siRNA可有效降低Beclin 1的表达。Beclin 1基因沉默后,裸鼹鼠皮肤成纤维细胞增殖抑制率均显著高于对照组,细胞早期凋亡与晚期凋亡率均显著升高,同时p53、BAX、Bcl2、LC3B、p-AKT、m TOR等表达量下降。结论 Beclin 1在裸鼹鼠成纤维细胞抵抗饥饿、H_2O_2刺激等过程中表达量显著变化,同时抑制Beclin 1的表达,可抑制裸鼹鼠细胞增殖,促进其凋亡,这提示Beclin 1基因对裸鼹鼠自噬、增殖、凋亡起到调控作用。

RecA蛋白介导的转基因小鼠制备

受精卵原核内核酸酶对外源基因的降解是导致显微注射法制备转基因动物效率低的重要原因之一,RecA蛋白可与单链DNA结合而阻止细胞核内核酸酶对单链DNA的降解。本试验建立了显微注射和RecA蛋白结合制备转基因动物的技术模型,并初步探讨了RecA蛋白对显微注射法制备转基因动物效率的影响。以单链DNA、RecA蛋白与单链DNA的复合体以及双链DNA为外源基因进行受精卵原核显微注射转基因试验,分别获得F0代小鼠28、41和32只,并通过PCR和Southern blot进行了转基因鉴定。结果显示,在小鼠受精卵原核显微注射Re-cA+ssDNA复合体获得的F0代中14.6%(6/41)为转基因个体,显微注射dsDNA获得的F0代中转基因个体占6.2%(2/32),而显微注射ssDNA获得的F0代中无一为转基因个体。

裸鼹鼠血液生理生化及尿常规值的测定

目的对裸鼹鼠进行血液生理指标、生化指标和尿常规值测定。方法采用全自动血细胞分析仪、生化测定仪及尿液分析仪对不同月龄、不同性别裸鼹鼠的血液学指标、生化指标值及尿常规值进行测定。结果得到了3月龄、6月龄和9周龄以及不同性别裸鼹鼠血液生理生化值与尿常规值；部分血液生理指标受性别及月龄影响较大。结论明确了裸鼹鼠部分血液生理生化及尿常规正常范围值，为今后裸鼹鼠研究奠定了基础。

HBV血清学标记物与HBV-DNA定量检测的相关性及临床意义

目的探讨HBV血清学标记物（HBV-M）定量与HBV-DNA定量检测的相关性及其对肝病患者诊断、预后的意义。方法分别使用化学发光微粒子免疫分析技术（CMIA）和荧光定量PCR（FQ-PCR）对186例患者的乙肝病毒DNA（HBV-DNA）和乙肝两对半进行定量检测。结果186例患者的血清学模型包括下列4种：组合IHBsAg（＋）HBeAg（＋）HBcAb（＋）83例，血清HBV—DNA阳性率为95．18％，DNA平均含量为1．01×10^8拷贝／mL。组合ⅡHBsAg（＋）HBeAb（＋）HBcAb（＋）93例，血清HBV-DNA阳性率为49．46％，DNA平均含量为8．11×10^5拷贝／mL。组合ⅢHBsAg（＋）HBcAb（＋）3例，血清HBV—DNA阳性率为33．3％，DNA平均含量为5．37×10^2拷贝／mL。组合ⅣHBsAb（＋）HBcAb（＋）7例，血清HBV-DNA阳性率为0％，DNA平均含量小于5．0×10^2拷贝／mL。在组合Ⅰ中HBeAg定量〉1000的e抗原均值为1287．77，血清HBV—DNA含量对数均值为7．480，HBeAg定量〈1000的e抗原均值为329．22，血清HBV—DNA含量对数均值为4．913。两小组的HBeAg含量与荧光定量PCR结果进行独立性检验、差异性检验P值〈0．05，4种组合DNA阳性率为组合Ⅰ〉组合Ⅱ〉组合Ⅲ〉组合Ⅳ。4种组合HBV的ELISA的阳性模式与荧光定量PCR结果进行独立性检验、差异性检验P值均小于0．05。结论HBV—DNA含量与e抗原具有显著相关性，选择乙肝两对半血清学标志和HBV—DNA定量检测，对于临床乙肝感染、复制及其传染性和抗病毒治疗效果的监测具有重要意义。

裸鼹鼠成纤维细胞原代培养方法的建立

目的建立裸鼹鼠成纤维细胞的原代培养方法，研究裸鼹鼠成纤维细胞的生长特性。方法结合传统的消化培养法和组织培养法进行裸鼹鼠和小鼠成纤维细胞原代培养，CCK-8（cell countingkit）细胞计数比较研究两种物种成纤维细胞的生长速率和细胞周期。以不同浓度接种裸鼹鼠肝脏成纤维细胞，CCK-8计数细胞24h、72h、96h、144h细胞密度。结果结合消化培养法和组织培养法两种细胞原代培养方法，裸鼹鼠及小鼠成纤维细胞的生长状态良好。裸鼹鼠成纤维细胞的增殖速率显著高于小鼠成纤维细胞，处于对数生长期的细胞比例与小鼠比较，显著较高。以1．5×10^4／ml以上的浓度接种裸鼹鼠成纤维细胞能使细胞在两天内进入细胞生长对数期。结论结合消化培养法和组织培养法的原代培养方法能提高细胞原代培养的效率，裸鼹鼠成纤维细胞的增殖能力显著高于小鼠。

517例血培养病原菌的分布及耐药情况分析

目的了解血液感染的主要病原菌及耐药情况。方法采用BACTEC9050全自动血培养仪及梅里埃公司的API系统和Vitek-32系统对阳性标本进行菌种鉴定和药敏试验。结果 517例血液标本中,检出细菌85株,阳性率为16.44%,其中革兰阳性球菌占55.29%,革兰阴性菌占36.47%,真菌占5.88%,厌氧菌占2.36%。97.14%的葡萄球菌耐甲氧西林,63.64%的大肠埃希菌和50.00%的肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum βlactamases,ESBLs),未见耐万古霉素的革兰阳性球菌。结论本院引起血液感染的主要病原菌仍以革兰阳性细菌为主,耐药菌株广泛出现,因而应及时了解血培养结果,选用敏感药物针对性用药,有效提高血液感染的治愈率。

裸鼹鼠生化位点的初步研究

目的研究裸鼹鼠（NMR）的生化位点特征，初步建立裸鼹鼠生化位点的检测方法。方法以小鼠近交系的生化位点为参照，应用小鼠的检测方法，检测裸鼹鼠的11种同工酶的活性。结果裸鼹鼠的酯酶-1、转铁蛋白为慢带；葡萄糖磷酸异构酶-1、苹果酸酶-1、异柠檬酸脱氢酶-1为中间带；血红蛋白B链、肽酶-3、碱性磷酸酶-1、磷酸葡萄糖变位酶-1、酯酶-3、过氧化氢酶．2为快带。结论7只裸鼹鼠的11个生化位点为一致的条带，无多态性，表现为纯合型。

Poly I∶C刺激对裸鼹鼠体内自噬水平的影响

目的 研究多聚肌苷-多聚胞苷酸钠盐（Poly I∶C）对裸鼹鼠自噬水平的影响.方法 成年裸鼹鼠以及C57BL/6小鼠分别随机分成Poly I∶C给药组和对照组,分别腹腔注射Poly I∶C和生理盐水.Poly I∶C给药12h后,组织切片HE染色观察小肠组织的病理变化,电镜观察细胞结构的变化,实时定量PCR检测小肠组织中炎症相关因子IL-1、ATG5的mRNA表达情况,蛋白印迹检测小肠组织中自噬相关蛋白LC3B、Beclin 1表达情况.结果 Poly I∶C给药后,裸鼹鼠小肠组织未出现显著的病理变化,但C57BL/6小鼠小肠组织腺体部出现广泛性出血;电镜观察发现,裸鼹鼠小肠组织细胞中线粒体增多、变长,自噬体数量显著增加,而小鼠组织细胞线粒体有大量的空泡化,滑面内质网扩张;实时定量PCR检测未发现组织中IL-1、ATG5 mRNA表达有显著变化;蛋白印迹检测发现,给药后裸鼹鼠组织中LC3B蛋白表达显著上调（P＜0.05）,而C57BL/6小鼠则下调（P＜0.05）.结论 Poly I∶C给药引起裸鼹鼠自噬水平上调,同时,裸鼹鼠自噬水平的上调亦可以提高机体的适应能力,进而起到抵抗Poly I∶C损伤的作用.

猪IκBα基因定点突变中两种方法的应用

作者将猪IκBα基因32、36位丝氨酸位点突变为丙氨酸,为进一步研究突变型IκBα蛋白对异种移植延缓性排斥反应的抑制机理奠定基础。首先采用Stratagene公司单点突变试剂盒将猪IκBα基因32位丝氨酸位点突变为丙氨酸,接着试图在36位引入突变但未成功,最后改用重叠延伸PCR对36位进行突变。结果表明,两种突变方法结合使用,成功地将猪IκBα基因32、36位丝氨酸位点突变为丙氨酸。说明两种突变方法各有所长,又有各自的缺点,应根据试验的实际需要灵活选择合适的突变方法,以收到事半功倍的效果。

猪TIMP-2基因克隆、序列特征和表达分析

本研究分析了五指山试验用小型猪TIMP-2基因的分子特性和可能的生物学功能。将人TIM-P2 mR-NA全长序列在猪ESTs数据库中检索获得同源性较高的ESTs,用电子克隆结合RT-PCR方法克隆获得包含完整CDS区的猪TIMP-2基因cDNA序列,应用生物信息学方法分析了其核苷酸序列及其编码蛋白质分子结构特性,应用RT-PCR研究该基因在猪不同组织和发育时期的特异表达情况。结果,猪TIM-P2 cDNA序列全长790 bp,包括663 bp的完整开放阅读框,编码221个氨基酸。多序列比对和系统进化分析表明,该基因编码蛋白质与人(97%)、大鼠(97%)、小鼠(97%)等物种TIMP-2蛋白质具有较高的同源性。蛋白质序列预测分析发现,猪TIMP-2氨基酸序列理论等电点(pI)为7.65,相对分子质量(MW)为24.5 ku,它包括27AA的前导序列和194AA的成熟肽段,其前导序列比其它物种多1个亮氨酸(Leu)。结构功能预测发现其具有1个在种间高度保守的NTR_TIMP结构域和N端VIRAK保守序列,序列中存在的12个半胱氨酸(Cys)可以形成6对二硫键结构。表达谱分析表明TIMP-2基因在猪的多个组织和不同发育时期的表达量存在较大差异,在睾丸、垂体、胃、大肠、卵巢、子宫和90 d胚胎骨骼肌中高表达;而在心脏、小肠、脑、肝脏、成年猪骨骼肌中表达量极低;在肾脏、胸腺、脾、甲状腺3、3 d胚胎中中度表达。结果表明该基因在发生组织发育和重构活动相对活跃的组织器官和时期表达水平较高,亦符合其固有生物学功能。

低氧对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞自噬水平及凋亡的影响

目的 比较裸鼹鼠成纤维细胞常氧与低氧条件下自噬与凋亡水平.方法 分别采用低氧（3％O2）与常氧（20％ O2）培养裸鼹鼠皮肤成纤维细胞,采用Western blotting、RT-PCR等方法检测自噬相关基因Beclin1、LC3的表达,并用流式细胞术检测低氧与常氧条件下裸鼹鼠成纤维细胞凋亡水平.结果 裸鼹鼠皮肤成纤维细胞在低氧与常氧处理24 h时,LC3 Ⅱ蛋白的表达量并无明显差异,而低氧处理48 h后LC3 Ⅱ蛋白的表达量显著高于常氧组,并且裸鼹鼠成纤维细胞随着低氧培养时间的延长,LC3 Ⅱ蛋白表达升高.流式细胞术结果显现低氧处理组裸鼹鼠皮肤成纤维细胞凋亡率显著低于常氧组.结论 裸鼹鼠皮肤成纤维细胞可以通过提高自噬水平适应低氧环境,这为今后深入研究裸鼹鼠耐低氧机制提供了参考.