HPV L1保守序列多肽抗血清降解HPV6感染能力的测试

目的:明确对不同类型人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白(HPV L1)具有交叉反应性的HPV L1 C-末端保守序列抗体是否具有降解HPV6感染能力的作用。方法:收集尖锐湿疣标本,从收集的标本中找出HPV6型感染病例,并提取病毒。将多肽抗血清按不同比例稀释,与得到的病毒共同培养并中和,接触单层培养的人永生化角质形成细胞,PCR检验经HPV6病毒接触后人永生化角质形成细胞中HPV6 DNA含量,ELISA检验此细胞中HPV6 L1蛋白存在与否。结果:经不同稀释浓度抗血清中和的HPV6病毒感染的人永生化角质形成细胞,其DNA提取物的PCR产物经电泳,在凝胶280 bp处,HPV6特异性区间呈现不同强度的阳性条带,阳性条带的强度随抗血清浓度的升高逐渐降低。ELISA对经抗血清中和病毒接触的人永生化角质形成细胞提取蛋白进行测试,HPV L1蛋白表达量显示出与上述PCR检测结果同样的梯度变化趋势,变化差异具有统计学意义。结论:初步证明,HPV6 L1保守序列多肽抗血清可部分降解该病毒的感染,该抗血清具有针对更多型HPV进行中和研究的价值。

茶多酚对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病预防作用的研究进展

随着饮食习惯的改变和生活水平的提高,特别是高脂饮食的大量摄入,非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)发病率正在逐渐升高,西方发达国家平均发病率为20%~30%,我国平均发病率为15%~30%。NAFLD已经成为全球主要的公共卫生问题之一,严重威胁着人类的健康,其临床治疗仍然是一个挑战。茶多酚是从茶叶中提取出来的一种活性物质,其对人体健康有一定益处,特别是在一些常见疾病的预防作用方面具有较大潜力。为进一步系统了解茶多酚对NAFLD的作用,本文对茶多酚预防高脂饮食诱导的NAFLD的研究进展进行总结。

HPVL1在不同宫颈病变组织中的表达规律探讨

目的探讨影响HPV L1蛋白在肿瘤组织内表达的因素,寻找HPV L1蛋白在不同宫颈病变中的表达规律。方法收集不同宫颈病变组织,检测标本内HPV16和HPV18基因分型及基因组物理状态;用ELISA、蛋白质印迹和免疫组织化学方法检测标本内HPV L1的表达情况。结果共收集到48例标本,其中42例HPV16阳性,3例HPV18阳性。HPV16阳性标本中,25例病毒基因组为游离型,7例为混合型,10例为整合型;HPV18阳性标本全部为整合型。ELISA及蛋白质印迹检测显示,随着病变程度的加重,HPV L1的表达量有逐渐降低的趋势。免疫组织化学显示,组织内的HPV L1阳性反应有多种形式,依病变组织内病毒基因组物理状态、病变组织分化程度以及病变进程的不同而不同。结论 HPV L1在宫颈病变组织内的表达有一定的结构基础,其表达量与病毒基因组在病变组织和细胞内的物理状态、肿瘤组织的分化程度、病毒基因组插入宿主基因组基因序列的状态有着非常密切的关系。

大鼠睾丸生精小管内残余体类物质形成及排出

目的：研究大鼠睾丸内残余体物质的形成与转归.方法：大鼠睾丸石蜡切片,做残余体特异性染色观察;超薄切片,透射电镜观察.结果：在残余体特异性染色下,部分生精小管内可见有被染成深蓝色、大小不等的圆形或不规则形的颗粒.这些颗粒最早于生精周期Ⅰ期,至精子排放时,颗粒全部聚集于生精上皮的表面.当精子释放后,颗粒即迅速向小管周边移动,并贴近管周的基膜部.电镜观察,位于生精上皮表面的残余体内含有不同电子密度的结构成分,在残余体向管周移动的过程中,逐渐转化为高电子密度的脂质包涵体.在生精小管周边的细胞和基质内,以及淋巴管内皮细胞内,均可以见到类似的脂质包涵体.结论：大鼠睾丸生精过程中产生的残余体,可以通过自身的转化过程,形成脂质包涵体,以胞吐及扩散转移的方式,最终被排出于生精小管之外.

综合性大学医学教育实施学分制的困难与对策

结合三峡大学医学教育实施学分制的教学管理实践,分析了医学教育学分制实施过程中存在的两类问题及困难,提出了我们解决这些问题及困难的应对办法:积极组织指导学生选课,以班为单位排选课结合,医学专业学生优先选课,以及实行两长学期制。最后提出了两点结论性的意见。

小鼠睾丸生精小管内残余体颗粒形成及转归的观察

目的通过对小鼠睾丸生精小管内残余体物质的形成与转归的观察,了解机体器官是如何处置结构废弃物的。方法取体重18-20g成年BALB/c小鼠的睾丸,石蜡切片后进行残余体特异性染色和观察,超薄切片后进行透射电镜染色和观察。结果残余体特异性染色显示,部分生精小管内有染成深蓝色、大小不等的圆形或不规则形的颗粒。这些颗粒最早可见于生精周期Ⅳ-Ⅴ期,在精子细胞朝向管腔一侧的胞质之内出现细粒状的细小蓝色颗粒。伴随着生精时相的向后推移,精子细胞的胞质逐渐减少,颗粒逐渐变大,颗粒数量相应减少,至精子排放时,即生精周期的Ⅶ-Ⅷ期,颗粒的总量达到高峰,颗粒全部聚集于生精上皮的表面。当精子释放完成后,颗粒即迅速向小管周边移动。在颗粒向基部迁移时,伴随着数量的逐渐减少。这些颗粒就是残余体。电镜观察,可见这些颗粒的动态分布特征与光镜观察的一致。这些颗粒大小差异大,内部结构形态多样,电子密度差异明显。在精子释放完成后,颗粒迅速向管周移动,内部结构与电子密度也不断发生变化,最终转化成为脂质样颗粒。这些脂质样颗粒在接近基膜处,可能最终被排入到睾丸间质之中。结论小鼠生精小管在生精过程中产生的残余体颗粒,在向上皮基底部转移的过程中,逐渐转化成为脂质样颗粒,这些脂质样颗粒可能最终被排泄于生精小管之外。观察提示睾丸可以通过将睾丸自身生产的结构废弃物排出而保持自洁。

豚鼠小肠绒毛内脂褐质类物质的性质及可能的生理意义

为确定小肠在机体衰老生理方面的意义，我们曾对豚鼠小肠绒毛内所见到的一种颗粒性物质进行过初步观察，并获得了一些有益的启示。为进一步确定存在于豚鼠小肠绒毛顶端的这些颗粒物的性质，我们借助荧光显微镜和电镜，对其做了进一步的观察。

湖北宜昌产两种花椒果皮醇提物对小鼠天然免疫功能的影响

目的为确定产自湖北省宜昌地区两品种花椒果皮是否会对机体的天然免疫功能产生影响而进行此实验。方法将花椒果皮醇提取物注射入小鼠腹腔内,确定药物的毒性并观察其对小鼠天然免疫功能的影响。结果宜都花椒的毒性明显强于五峰花椒;花椒提取物可明显降低腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吸附及吞噬能力,长期给药可使动物血液白细胞总数及淋巴细胞百分比显著下降。结论产自宜昌地区两品种花椒的毒性强度有明显差异,它们的提取物均可对小鼠的天然免疫功能产生抑制性影响。

免疫抑制对大鼠淋巴管通透性的影响

为了解腹壁淋巴管对物质转运的功能及其与机体免疫功能状态之间的关系,进行了此实验.取成年Wistar大鼠10只,随机分为两组,A组动物以4mg环磷酰胺/100g体重的剂量隔日腹腔注射一次.B组注射生理盐水.动物于第三次注射后,开始以1ml/100g体重的剂量腹腔注射40%印度墨水.每日一次.连续注射两天.动物经环磷酰胺处理后.腹壁引流淋巴管对腹腔内的碳粒清除速度下降.碳粒滞留于腹腔内,但其一旦进入淋巴管内则即限制于内.而不能由管内向管外扩散.对照组动物腹腔内碳粒清除快,腹壁内很少滞留.但其在淋巴管的引流途中,可以大量向管周扩散.实验证明,抑制机体的免疫功能,可以降低淋巴管的通透性.

肺对体内颗粒性物质排除功能的初步观察

目的探讨肺进入体内粉尘的排除能力。方法采用鼠尾静脉或腹腔注射的方法,将碳粒及台盼蓝注入到大鼠体内。结果携带有染料颗粒的吞噬细胞及游离染料颗粒可经各级小的肺血管进入肺间质,吞噬细胞可再由肺间质进入肺泡。动物肺泡灌洗液内,亦可见到有携带颗粒的吞噬细胞以及游离染料颗粒。结论肺在进入体内的颗粒性物质具有一定的排除能力。

人精子尾部轴丝Mg^(2+)ATP酶细胞化学的研究

为探讨Ｍｇ^（２＋）ＡＴＰ酶在精子轴丝内的分布而进行此实验。人精子先以ＴｒｉｔｏｎＸ－１００脱膜，再进行Ｍｇ^（２＋）ＡＴＰ酶的硝酸铅法细胞化学染色。轴丝ＡＴＰ酶阳性产物以中央微管为中心，呈现为呈同心圆排列的３个环带状分布。从外向内分别与轴丝的外 Ｄｙｎｅｉｎ臂、内 Ｄｙｎｅｉｎ臂和放射辐头的结构区带相对应。反应以外带最强，中带与内带相似。研究证明了以往不受人们重视的放射辐头部也有与内Ｄｎｎｅｉｎ臂相似的ＡＴＰ酶的活性。

壮酒对高脂饮食小鼠睾丸保护作用的研究

壮酒是由我院研制的一种高级保健酒,系纯粮白酒浸提狗骨、红花、枸杞子、薏苡仁、木瓜等中药制成。以往的研究表明:壮酒不仅具有强壮、抗炎、镇痛等功效,而且对高脂饮食小鼠具有一定的降血脂、防止肝脏脂肪样变以及升高血睾酮水平的作用(研究待发表)。在此基础上,我们进一步作了壮酒对高脂饮食小鼠睾丸形态结构和功能影响的研究。现将研究结果报道如下。1 材料与方法1.1 实验材料 昆明系小鼠,雄性,35～45g,30只。由本院实验动物室供给。壮酒:38％(V/V),湖北秭归楚峡酒厂生产,批号:96030。量取500ml。

湖北青砖茶对IBS-D模型大鼠肠道敏感性的影响

研究了湖北青砖茶对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠肠道的影响。结果表明,与正常组相比,模型组的痛阈值明显降低,血清中炎症因子前列腺素2(PGE2)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、类胰蛋白酶的含量明显增加;与模型组比较,湖北青砖茶低剂量组、高剂量组能够显著升高痛阈值,而血清中炎症因子PGE2、TNF-α、类胰蛋白酶的含量显著降低,且具有剂量依赖性。由此表明湖北青砖茶可降低IBS-D模型大鼠的肠道敏感性,其作用机制可能与血清中PGE2、TNF-α和类胰蛋白酶含量的降低有关。

宫颈癌HeLa细胞内HPV L1蛋白表达的观察

目的:通过观察电镜下所见的人宫颈癌细胞株——HeLa细胞胞质内包涵体类物质的性质,了解人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌细胞内HPV主要外壳蛋白(L1)的表达规律。方法:培养HeLa细胞,采用ELISA、光镜和电镜的免疫组织化学、Western blot方法,以HPV18 L1小鼠单克隆抗体对细胞内L1的表达情况进行检测,同时用反转录PCR方法检测细胞内L1 mRNA的存在。结果:ELISA检测显示,HeLa细胞裂解液内有HPV L1的存在。HRP标记的光镜免疫组织化学显示,培养的HeLa细胞呈现强的HPV L1阳性反应。电镜下观察,可见部分培养的HeLa细胞胞质内有团块状包涵体样物质,这些团块由大小均匀的颗粒样物质密集而成。这些颗粒性物质可为HPV L1抗体携带的胶体金颗粒标记。Western blot检测结果显示,HeLa细胞裂解液在56 kD区域,出现了一条L1特异阳性条带,说明HeLa细胞内有HPV18 L1的存在。反向PCR方法检测显示细胞内有L1 mRNA的存在。结论:电镜下所见到的培养的宫颈癌细胞株HeLa细胞胞质内的包涵体类物质,系由HPV18 L1构成,说明HeLa细胞能够表达L1。

栀子对兔膝骨关节炎模型关节软骨病理改变及IL-1β表达的影响

目的:观察栀子浸膏对兔膝骨关节炎模型中关节软骨病理改变及关节液、血清中IL-1β表达的影响。方法:24只大白兔随机分为给药组、模型组和对照组(n=8)。给药组、模型组行Hulth法复制骨关节炎模型,术后第5周,给药组以栀子浸膏600mg/kg灌胃,模型组与对照组给予等量生理盐水灌胃,给药3周后处死动物,分别对软骨肉眼下行Pelletier评分及光镜下行Mankin评分,取股骨内侧髁关节软骨组织块行电镜、H-E染色观察软骨细胞形态及检测关节液与血清中IL-1β的含量。结果:栀子浸膏能延缓骨关节炎关节软骨病理损伤,给药组关节液与血清中IL-1β的含量明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论:栀子浸膏可能通过降低骨关节炎模型关节液与血清炎症因子IL-1β的表达发挥保护关节软骨的作用,从而延缓骨关节炎病程的进展。

耳针血清对大鼠脑微血管内皮细胞拟糖尿病损伤的保护作用

目的从胆碱能抗炎通路探讨耳针血清对大鼠脑微血管内皮细胞拟糖尿病损伤的保护作用。方法耳针穴位刺激2型糖尿病大鼠模型,并取血清,体外培养大鼠脑微血管内皮细胞株,细胞分别培养于不同血清条件的培养液中。采用MTS/PMS比色分析法测定各组细胞的活性,流式细胞仪观察内皮细胞的凋亡情况,透射电镜观察各组细胞的超微结构变化。结果耳针血清能明显增加细胞活性、显著降低糖尿病引起的细胞凋亡(P均<0.01);改善内皮细胞的超微结构受损情况。但迷走神经阻断后针刺大鼠,其血清培养的细胞活性明显低于针刺组(P<0.01);细胞凋亡率显著高于针刺组(P<0.05)。结论耳针血清对血管内皮细胞具有显著的形态学保护作用,其作用机制可能与兴奋迷走神经有关。

HPV L1共同保守序列多肽对多价性HPV阳性临床标本的检测

目的:证实HPV16 L1 C-末端448-477氨基酸序列多肽所诱导的免疫抗血清能够与多种型别HPV L1发生反应。方法:人工合成HPV L1共同保守序列短肽,用该合成短肽免疫动物获得抗短肽多克隆抗血清。用PCR方法对宫颈癌、尖锐湿疣等临床标本进行HPV型别鉴定,然后用ELISA、Western印迹、免疫组织化学3种方法检验已获得的抗HPV短肽血清抗体能否与多型别HPV阳性临床标本进行反应。结果:在ELISA实验中,HPV6,11,16,18型及其他型阳性的临床标本的抗原抗体反应均为阳性;Western印迹实验中,HPV各型别阳性的临床标本均在56×103处出现显色条带,而阴性标本没有;免疫组织化学结果发现,不同病变性质的组织反应各有特征,阳性反应仅出现于上皮之内,呈区域性,有明显界限。结论:证实了本研究寻找到的HPV L1共同保守序列确实含有HPV L1 B-细胞共同表位,其免疫形成的抗血清能与多型别HPV L1发生反应。这一发现对今后研制广谱HPV L1疫苗或广谱检测试剂盒具有重要的启示作用。