红景天甙对体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞组织化学及其超微结构的影响

采用定量细胞化学方法及透射电子显微镜观测了红景天甙对不同代龄二倍体细胞内酸性磷酸酶（ＡｃＰａｓｅ）、脂褐素及其超微结构的影响。结果提示，红景天甙能降低第４５代以后细胞ＡｃＰａｓｅ的活性，第５５代以后细胞内脂褐素的含量，并能阻抑细胞超微结构的衰退性变化。由此推断，红景天甙对二倍体成纤维细胞具有一定的延缓衰老作用。

体外培养的不同亚型肝癌细胞差异蛋白的初步筛查

目的 分析体外培养的不同亚型肝癌细胞株蛋白质表达差异 ,筛选肝癌的标志蛋白。 方法 采用表面增强激光解吸离子化 (SELDI)蛋白质芯片技术检测了两种肝癌细胞株 (肝细胞癌 ,SMMC 772 1和肝内胆管细胞癌 ,IHCCC 981 0 )以及正常肝细胞 (L1 0 2 )的蛋白质谱。选用阴离子交换柱处理上述细胞总蛋白 ,用 6种不同pH的洗脱液洗脱柱床 ,通过改变洗脱液的pH值将总蛋白分成不同pI范围的 6组。每个组分用WCX2和IMAC3两种芯片检测。采用PBSII C型蛋白质芯片阅读机读取数据 ,获得的数据采用Ciphergen公司的ProteinchipSoftware3.0 .2软件分析。 结果 与L0 2细胞相比 ,有 1 2个蛋白质在两种肝癌细胞株中均出现明显的变化 ,其中 4个差异蛋白在肝癌细胞中高表达 ,8个差异蛋白在肝癌细胞中低表达。在对两种肝癌细胞株的蛋白质谱比较时发现 ,不同亚型的肝癌细胞有其各自的标志蛋白 ,其中 1 1个蛋白分子在SMMC 772 1细胞中高表达 ;在IHCCC 981 0细胞中 7个蛋白分子高表达 ,1 0个蛋白分子低表达。 结论 不同亚型肝癌细胞与正常肝细胞蛋白质谱比较时有共同的差异蛋白 ,同时不同亚型肝癌细胞之间的蛋白质谱表达也有差别。

MBP诱导小鼠免疫细胞凋亡的体内研究

为初步探讨ＭＢＰ与免疫细胞凋亡的关系，实验设置了超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）作为阳性对照，普通蛋白抗原ＢＳＡ为阴性对照。实验方法以检测ＤＮＡ断裂为主，配以形态学观察。结果表明，ＭＢＰ处理组免疫细胞ＤＮＡ经电泳可见“典型”的梯状带；通过比色法和流式细胞术定量检测了ＤＮＡ断裂的数值。结果显示，ＭＢＰ处理组ＤＮＡ断裂百分数与ＳＥＢ组无明显区别（Ｐ＜０．０５）。同时形态学观察表明ＭＢＰ处理组凋亡细胞数目与ＳＥＢ组基本相同。上述结果表明ＭＢＰ具有类似超抗原ＳＥＢ的效应。

红景天甙对体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞的影响

本实验采用体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞,从30代开始在培养液中加入红景天甙为实验组、不加红景天甙为对照组。分别观察了两组细胞的形态、增殖速度及对单胺氧化酶(MAO)活性的测定。结果表明,实验组细胞形态、增殖速度均比同代对照组好,MAO活性比对照组低。认为红景天甙对体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞具有一定的抗衰老作用。

G蛋白βγ亚基介导的磷脂酶A_2激活与β-AR失敏的关系

研究异丙基肾上腺素 (ISO)所致的体外培养大鼠肺 β 肾上腺素受体 ( β AR)失敏的机理 ,首先观察了不同浓度和不同作用时间的ISO对大鼠肺 β AR失敏的影响 ,可见ISO所致 β AR失敏呈良好的量 效和时 效关系 ;ISO对磷脂酶A2 (PLA2 )激活也呈时间和剂量依赖性 ,且PLA2 激活比 β AR失敏所需的ISO剂量低 .上述现象可分别被PLA2 特异性抑制剂对溴乙酰酚 (PBA)、地塞米松 (Dex)、Gi蛋白灭活剂百日咳毒素 (PTX)、抗Giα血清和抗Gβγ血清所抑制 ;而 5′ O 3 硫代三磷酸鸟甘 (GTP γ S)则能加重ISO所致β AR失敏和PLA2 激活 .以上结果提示 :体外培养的大鼠肺 β AR在激动剂长时期作用下 ,受体发生的失敏与G蛋白介导的PLA2 激活有关 ,此时β AR的信号转导途径由原来腺苷酸环化酶正偶联转变为G蛋白 βγ亚基介导的PLA2

粘附分子在急性同种移植排斥反应中的作用

参与同种移植排斥反应的粘附分子包括３大类：即选择素、整合素和免疫球蛋白超家族，它们在急性移植排斥反应中的作用是极其复杂的。首先，粘附分子促进白细胞穿过内皮并浸润到移植物部位，然后协同抗原递呈细胞上的ＭＨＣ抗原复合体激活Ｔ细胞，并使之成为效应Ｔ细胞，最后粘附分子协同效应细胞对靶细胞的溶解反应。应用抗粘附分子的单克隆抗体处理受体，不仅可延长移植物的存活时间，而且能诱导受体对同种移植物产生耐受性。

APO-1/Fas及其配体介导超抗原SEB诱导的淋巴细胞凋亡

为了探讨超抗原诱导的淋巴细胞凋亡机制．本实验采用超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）处理人外周血单个核细胞，采用流式细胞术检测细胞DNA断裂的百分率；同时动态观察了细胞表面APO-1、FasL的表达及细胞内Bcl－2蛋白的表达。结果表明，SEB不但可引起人外周血淋巴细胞凋亡，而且可诱导淋巴细胞表达APO-1和FasL。细胞凋亡的百分率与细胞表面APO-1和FasL的表达呈正相关（r＝0．71，r＝0．98），与细胞内Bcl－2表达呈负相关（r＝－0．72）。由此可见，APO－1／Fas及其配体参与了超抗原SEB诱导的淋巴细胞凋亡。

Apo－1／Fas受体及其配体在诱导淋巴细胞凋亡中的作用

本文介绍了Ａｐｏ－１／Ｆａｓ受体及其配体的结构及其分布，阐述了Ａｐｏ－１／Ｆａｓ受体及其配体在免疫生物学方面的效应：诱导ＴＣＲ￣（ｉｍ）／Ａｐｏ－１￣（ｈｉ）胸腺细胞的阴性选择；清除外周自身反应Ｔ细胞克隆；诱导某些活化Ｔ，Ｂ细胞凋亡；介导某些白血病细胞凋亡，并阐述了Ａｐｏ－１／Ｆａｓ受体及其配体在诱导细胞凋亡中的作用机理。

淋巴细胞表面APO—1受体的表达与其凋亡敏感性的相关？…

采用ＦＡＣＳ及ＤＮＡ电泳等方法，检测了抗ＡＰＯ－１单抗对超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）活化不同天数的人外周血淋巴细胞凋亡的影响，结果发现，ＳＥＢ可诱导淋巴细胞表达ＡＰＯ－１受体，并用随着ＡＰＯ－１受体表达量的影响，抗ＡＰＯ－１抗体诱导其凋亡的数目也随之增多，由此可见，ＡＰＯ－１受体是介导ＳＥＢ活化的淋巴细胞凋亡的主要途径。

抗APO-1单抗促进SEB活化的淋巴细胞凋亡及其与胞内游离Ca^(2+)浓度相关性研究

为探讨抗ＡＰＯ－１单抗处理的金黄色葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）活化的淋巴细胞胞浆中游离Ｃａ２＋浓度的变化，用形态学观察、流式细胞光度术观测了鼠抗人ＡＰＯ－１单克隆抗体对ＳＥＢ活化不同天数的人外周血淋巴细胞凋亡的诱导作用，同时采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光探针检测了ＡＰＯ－１单抗处理的淋巴细胞胞浆内游离Ｃａ２＋浓度。结果表明，抗ＡＰＯ－１单抗对ＳＥＢ活化１ｄ和对照组淋巴细胞无明显的促凋亡作用，但对ＳＥＢ活化５ｄ的淋巴细胞不仅可明显促进其凋亡，而且可使其胞浆游离Ｃａ２＋浓度升高，而Ｚｎ２＋则抑制了抗ＡＰＯ－１单抗的凋亡诱导作用。由此可见，抗ＡＰＯ－１单抗与其特异性抗体结合后可能是通过使胞浆中游离Ｃａ２＋浓度升高，激活了Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋依赖的内源性核酸内切酶而导致ＳＥＢ活化的淋巴细胞凋亡。

超抗原SEB和MBP对人外周血T淋巴细胞增殖及粘附分子表达的影响

超抗原ＳＥＢ和ＭＢＰ对人外周血Ｔ淋巴细胞增殖及粘附分子表达的影响１３００２１白求恩医科大学基础医学院肖雪媛刘早霞１杨崇敬２杨贵贞１白求恩医科大学第二临床医院；２长春市第五医院自１９８９年命名以来，超抗原已成为免疫学领域研究的前沿课题之一。国外对它生物...

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B诱导小鼠免疫细胞凋亡

为探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素Ｂ（ｓｔａｐｈｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎＢ，ＳＥＢ）对小鼠免疫细胞凋亡的影响，采用形态学观察及ＤＮＡ断裂指标检测了ＳＥＢ诱导小鼠免疫细胞凋亡的剂量和效应关系。结果表明，１２．５μｇ、２５μｇ和５０μｇＳＥＢ均可引起部分胸腺细胞、脾细胞和肠系膜淋巴结细胞出现核固缩、核断裂及凋亡小体形成等形态学变化。上述免疫细胞ＤＮＡ琼脂糖电泳可见典型的“梯状”带。而对照组免疫细胞未见上述明显变化。本实验结果表明超抗原ＳＥＢ可诱导小鼠免疫细胞凋亡。

差异蛋白质组学及其应用

蛋白质组学是后基因组研究中最主要的部分 ,其研究策略有 2种 :一种是“完全”蛋白质组学 ,目的是检测一种细胞类型或一种组织内基因组表达的所有蛋白质 ;另一种是“差异”蛋白质组学 ,主要是筛选和鉴定不同种类或状态下各样本之间蛋白质组的区别与变化 .着重介绍了差异蛋白质组学的特点、研究内容和应用前景 ,简要介绍了适用于差异蛋白质组学研究的相关技术和近期发展概况 .

基因调节与细胞衰老

衰老细胞产生一种抑制DNA合成的物质,这种物质与衰老细胞表面的膜蛋白质密切相关,它通过抑制细胞DNA的合成而引起细胞分裂停止,进而衰老死亡,并且这种膜蛋白的产生是由基因所控制的。

新的肺癌血清标志物——甲状腺运载蛋白

背景与目的肺癌是当今世界上最常见的恶性肿瘤之一,迄今缺乏临床诊断可用的分子标志物。本实验应用SELDI技术寻找肺癌新的血清标志物。方法对227例血清样品(包括146例肺癌、13例肺炎、28例结核性胸膜炎和40例正常人血清样品)进行蛋白质谱检测。对候选蛋白进行质谱鉴定,并结合免疫共沉淀和ELISA技术筛选出肺癌新的候选标志物。结果通过Biomarker WizardTM软件分析显示13.78kDa、13.90kDa和14.07kDa的蛋白峰在肺癌病人血清样品中明显低于对照组。通过1-D胶分离,质谱鉴定和免疫沉淀分析显示这3个差异蛋白峰为野生型甲状腺运载蛋白(nativeTTR)和它的两个变体(cysTTR and glutTTR)。ELISA和SELDI技术分析上述血清样品均发现TTRs在肺癌血清中的表达下调。结论采用SELDI技术首次筛选并鉴定出TTRs,表明其可能作为肺癌诊断的候选血清标志物。

肝内胆管癌细胞系ICC-9810与肝细胞系L02蛋白质组学的差异分析

目的:分析肝内胆管癌细胞系ICC-9810与正常肝细胞系L02的蛋白质表达差异,筛选肝内胆管癌的潜在分子标志物.方法:应用表面增强激光解吸离子化(surface enhanced laser desorption/ionization,SELDI)蛋白质芯片技术检测肝内胆管癌及正常肝细胞系的蛋白质谱.用PBSII-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,采用Proteinchip Software3.0.2软件分析数据.结果:IMAC3、WCX2两种蛋白芯片共捕获376个蛋白峰,发现27个差异蛋白.与正常肝细胞系L02蛋白谱相比,9个蛋白在肝内胆管癌细胞系ICC-9810中高表达,18个蛋白在肝内胆管癌细胞系ICC-9810中低表达.其中3767、7999、10555、12163、22066和26794Da6个差异蛋白可被WCX2和IMAC3芯片共同捕获.结论:肝内胆管癌与正常肝细胞存在差异蛋白表达,这些差异蛋白为寻找肝肿瘤标志物,了解肝内胆管癌的发病机制提供了重要线索。

鹿血清对体外培养二倍体细胞的抗老化实验研究

实验用体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞,从35代开始在培养液中加入鹿血清为实验组,不加鹿血清为对照组。我们观察了鹿血清对细胞的生长和增殖的影响,以及一般光镜、荧光显微镜下的细胞形态与组化变化。结果表明实验组的细胞形态、生长和增殖均比同代对照组良好。实验证明5％鹿血清对体外培养的人胚肺二倍体细胞有抗老化作用。

应用SELDI-TOF-MS技术分析胆管恶性肿瘤患者外周血清蛋白的差异表达

目的应用蛋白质组学技术分析胆管恶性肿瘤患者外周血清中差异表达的蛋白质,初步探讨其对胆管恶性肿瘤早期诊断的意义。方法应用表面加强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,对58例胆管恶性肿瘤患者及58例对照者(38例健康体检者及20例胆囊结石患者)外周血清蛋白质进行检测,应用Ci-phergen蛋白质芯片软件对蛋白质谱进行分析。结果与对照组外周血清蛋白质谱相比,胆管恶性肿瘤患者外周血清中相对分子质量为5.900×103、9.080×103及11.863×103的3个蛋白质点呈明显高表达(P<10-5);相对分子质量为6.959×103、14.000×103、14.129×103、14.302×103、17.557×103、17.690×103及28.552×103的7个蛋白质点呈明显低表达(P<10-5),其中相对分子质量为11.863×103的蛋白质点在胆管恶性肿瘤组外周血的平均峰值约为对照组的8倍。有黄疸与无黄疸的胆管癌患者的外周血清中上述10个蛋白质点未见差异表达,但检测出另外3个差异表达的蛋白质点,其相对分子质量分别为7.255×103、12.364×103和15.873×103,并均在伴黄疸患者外周血清中呈高表达(P<10-5)。相对分子质量为5.900×103的蛋白质点在Ⅱ期胆管癌患者的表达明显高于Ⅲ、Ⅳ期患者(P<10-5),另9个蛋白质点在胆管癌不同临床分期中的表达差异均无统计学意义。结论胆管恶性肿瘤患者外周血清蛋白质表达与对照组相比有明显变化,相对分子质量为11.863×103的蛋白质点具有作为胆管恶性肿瘤早期诊断的生物学标志物潜力。

蛋白质芯片技术在视网膜母细胞瘤患者早期诊断中的运用(英文)

目的:探讨用表面增强基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)筛选视网膜母细胞瘤(retinoblatoma,Rb)血清标志蛋白,为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断寻找新的方法。方法:采用IMAC30和CM10两种蛋白芯片对18例Rb患者和17名年龄匹配的正常小儿血清进行了蛋白质谱检测。统计分析采用Ciphergenproteinchip3.0.2软件,两组间蛋白峰强度的比较采用t检验,率的比较采用Fisher精确概率法。结果:IMAC30蛋白芯片结果显示:与正常幼儿相比,视网膜母细胞瘤患者血清中有26个差异表达的蛋白峰,其中高表达有21个,质/荷比(m/z)分别为:7746,7014,117133049,7084,7299,5888,2544,12575,5489,9658,95759929,10161,8955,1886,10617,6209,2411,7374和6614低表达有5个,分别为:8382,7923,7972,8590和66576,统计学检验P<0.01。其中以m/z7014峰进行两组统计学分析时,敏感性和特异性分别为94.4%和82.4%。与正常小儿相比,经CM10蛋白芯片分析显示:视网膜母细胞瘤患者血清中有4个差异表达的蛋白峰,其中高表达有个,质/荷比(m/z)分别为5888,6097和7798;低表达蛋白峰为m/z8590。统计学检验P<0.01。当选择m/z779峰进行统计学分析时,敏感性和特异性分别是83.3%和70.6%。结论:视网膜母细胞瘤患者血清中存在较多标志蛋白SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术有望成为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断的新的有效工具。

人参皂甙对手术应激大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴及免疫靶器官中肾上腺皮质激素释放素、ACTH阳性细胞数的影响

目的和方法为探讨手术应激大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPAA）和脾脏中肾上腺皮质激素释放素（CRF）和促肾上腺皮质激素（ACTH）阳性细胞数及人参皂甙的调节作用，采用了免疫酶组化和免疫荧光检测方法。结果应激后15～30min，下丘脑、垂体中CRF和ACTH阳性细胞数较正常对照组减少。CRF阳性细胞在60min后逐渐增多，6h时达正常水平；ACTH阳性细胞于3h开始增多，12h时至正常水平。而肾上腺和脾脏内的CRF和ACTH阳性细胞数在应激后60min开始增多，6h达高峰，24h接近正常水平。人参皂甙（GS）组于应激后15～30min时下丘脑、垂体中CRF和ACTH阳性细胞数多于应激组，但肾上腺和脾脏变化不明显。结论GS可能通过作用于中枢神经内分泌细胞而抑制CAA和ACTH的释放。