二苯基庚烷A干预RAW264.7细胞炎症模型甘油磷脂的UPLC-Q/TOF MS分析

对RAW264.7细胞在不同状态(正常、炎症、给药)下的甘油磷脂成分进行分析,寻找相关的潜在病理药理标志物,阐明二苯基庚烷A在抗炎过程中对甘油磷脂代谢的影响。实验分为空白组(C)、炎症模型组(L)、二苯基庚烷A给药组(D)和布洛芬给药组(B,阳性对照药组)4组。空白组和炎症组给予新鲜培养基,给药组分别给予新配含20μg/m L二苯基庚烷A和100μg/m L布洛芬的培养基,1 h后,炎症模型组和给药组按终浓度为0.5μg/m L加入脂多糖(LPS)培养,24 h后,运用修饰后的Bligh-Dyer方法提取不同状态下RAW264.7细胞的甘油磷脂成分,并通过超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q/TOF MS)在正负离子模式下对甘油磷脂进行一级(MS)和二级(MS/MS)质谱分析。结合二级质谱裂解数据、元素组成、数据库比对等方法鉴定磷脂成分,再通过主成分分析法(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)以及t检验筛选潜在的甘油磷脂生物标志物。结果显示,炎症组与空白组比较得到27个潜在病理标志物,二苯基庚烷A给药组与炎症组比较得到23个潜在药理标志物,布洛芬给药组与炎症组比较得到17个潜在药理标志物,主要包括磷脂酰胆碱(PC)、溶血磷脂酰胆碱(lyso PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、溶血磷脂酰乙醇胺(lyso PE)。研究表明二苯基庚烷A在抗炎过程中引起了甘油磷脂代谢的明显变化,而这些代谢变化与炎症的发生发展密切相关。

2型糖尿病患者血清与粪便的代谢组学研究

目的研究2型糖尿患者与健康者血清和粪便的代谢组学差异,分析差异代谢物与2型糖尿病之间的相关性。方法选择2018年1月至2019年3月在昆明医科大学第二附属医院内分泌科住院的2型糖尿病患者53例,以及同期常规体检健康对照人群30例,采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱技术对两组研究对象的血清代谢物及30例糖尿病患者与对照组的粪便代谢物进行非靶向和靶向的代谢组学研究。应用Spearman相关性分析方法对血清和粪便中的差异代谢物与2型糖尿病相关指标的相关性进行分析。结果在2型糖尿病组与健康对照组血清样本中鉴定出15个差异代谢物,在粪便样本中鉴定出的差异代谢物则有6个。其中,糖尿患者血清中的谷氨酰胺、壬二酸、癸二酸及3-羟基癸二酸等二羧酸类羟基化衍生物明显低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01),而琥珀酰乙酰乙酸、缬氨酸、亮氨酸、葡萄糖、乳酸的含量则高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),并且琥珀酰乙酰乙酸、乳酸与糖化血红蛋白、餐后2 h血糖及空腹血糖浓度具有较强的正相关性,而壬二酸、癸二酸及二羧酸类羟基化衍生物与血糖浓度则具有较强的负相关;在粪便代谢物中,去氧胆酸和鹅去氧胆酸等胆汁酸与受检者的血糖浓度也有着一定的正相关性,并且单变量分析结果显示,与健康对照组相比糖尿病患者血清中的去氧胆酸和鹅去氧胆酸均显著性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论2型糖尿患者的血清代谢组学与健康者具有明显的差异,这些差异代谢物与糖尿病的发生和发展具有较强的关联性。在粪便代谢组学中,糖尿患者的胆汁酸水平与血糖的浓度变化也密切相关。

基于1H-NMR的2个产地普洱生茶差异代谢物的研究

目的采用质子核磁共振谱（1H-NMR）技术,结合化学计量学方法研究勐海县与勐腊县生产的普洱生茶之间的差异代谢物。方法以重水（D2O）为溶剂,对收集的普洱生茶进行超声提取,采用zgcppr脉冲序列制谱,运用正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）方法筛选差异代谢物。结果咖啡碱、奎宁酸以及糖类等是使得2大茶区普洱茶得到区分的潜在差异代谢物。结论基于1H-NMR和OPLS-DA的研究方法可以有效区分勐海县与勐腊县的普洱生茶,并找出导致区分的差异代谢物。

知母醇提物对INS-1胰岛β细胞功能的影响

目的研究知母醇提物对正常和抵抗INS-1胰岛β细胞的增殖及分泌功能的影响,探讨知母醇提物对正常细胞的毒性影响以及对胰岛素抵抗细胞的改善作用。方法采用MTT法测定知母醇提物对正常INS-1胰岛β细胞的增殖作用;知母醇提物干预正常细胞及胰岛素抵抗INS-1胰岛β细胞,分为溶媒组（ME）、胰岛素分泌模型组（MC）、胰岛素抵抗组（IR）、阳性药格列本脲组（Gli）和罗格列酮组（ROZ）及知母醇提物组,测定各组基础胰岛素分泌（BIS）和葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）值。结果知母醇提物质量浓度在0.3~30μg/m L时对正常细胞有明显的增殖作用,与MC组的GSIS比较,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;与IR组的BIS和GSIS比较,知母醇提物浓度在3~30μg/m L能显著促进细胞的BIS能力,同时其质量浓度在0.3~30μg/m L能显著性促进GSIS功能。结论知母醇提物在一定浓度范围内对正常INS-1胰岛β细胞的毒性较低,同时能通过促进正常细胞的增殖,增强其胰岛素分泌能力,改善细胞自身的胰岛素抵抗。

论财务报告的改进

本文根据现行经济环境及其未来发展趋势,阐述目前财务报告内容存在的问题及其改进措施。

基于UPLC/Q-TOF-MS技术分析女贞子与墨旱莲配伍协同增效的物质基础

目的:探究女贞子与墨旱莲配伍前后化学成分变化,以期从化学层面阐释二者协同增效机制。方法:采用超高效液相色谱联用四级杆串联飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF-MS)技术分析两药配伍前后化学成分差异,通过主成分分析和正交偏最小二乘判别法分析,根据高分辨质谱数据和元素组成等,对筛选到的潜在差异性成分进行结构鉴定。结果:两药合提液和合并液化学成分存在明显差异,其中女贞苷、蟛蜞菊内酯等含量显著下降,而特女贞苷、橄榄苦苷等含量显著升高。结论:女贞子与墨旱莲配伍可显著提高三萜类、环烯醚萜类等多种化学成分在合提液中的溶出量,为探明二者配伍协同增效机制的物质基础提供了重要的实验依据。

基于UHPLC-QTOF/MS技术RAW264.7巨噬细胞甘油磷脂成分的快速表征

采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间高分辨质谱联用技术(UHPLC-QTOF/MS)对RA264.7巨噬细胞甘油磷脂成分进行结构推断,运用修饰后的Bligh-Dyer法提取甘油磷脂,以流动相A:水(含10 mmol·L^(-1)乙酸铵和0.25%乙酸),流动相B:乙腈-异丙醇(1∶1)(含10 mmol·L^(-1)乙酸铵和0.25%乙酸)进行梯度洗脱,在ESI正负离子模式下进行数据采集。本实验推断出82个甘油磷脂成分,其中包括57个磷脂酰胆碱(PCs)、21个磷脂酰乙醇胺(PEs)、3个磷脂酰甘油(PGs)和1个磷脂酰肌醇(PI)。本文建立的基于UHPLC-QTOF/MS液质联用技术的RAW264.7巨噬细胞甘油磷脂类成分分析方法快速、简便、可靠。

基于UPLC-Q-TOF-MS的雷公藤红素的代谢组学研究

采用质谱技术的代谢学方法系统地对雷公藤红素的代谢开展了研究,筛选了雷公藤红素的代谢产物,并考察雷公藤红素对内源性代谢物水平的影响。通过灌胃给予小鼠雷公藤红素后,收集给药后血、粪和尿样品。采用超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)对雷公藤红素的代谢产物及其影响的内源性代谢物进行分析。运用质量亏损过滤策略筛选雷公藤红素的代谢产物,运用多元变量统计分析确定它显著影响的内源性代谢物。结果显示,在小鼠的粪便和尿液中检测到雷公藤红素的原型和8个代谢产物,其中5个代谢产物为首次报道;在鼠肝微粒体和人肝微粒代谢中发现雷公藤红素可以转化生成2个羟化产物,进一步的重组酶孵育揭示CYP3A4是催化其形成羟化产物的主要代谢酶。尿液代谢组学揭示雷公藤红素可以影响hippuric acid,phenylacetylglycine,5-hydroxyindoleacetic acid,urocanic acid,cinnamoylglycine,phenylprop-lonylglycine,xanthurenic acid的排泄,这些代谢物与肠道菌代谢密切相关。上述研究结果有助于阐明雷公藤红素在体内的代谢处置过程及其潜在的药理作用机制。