微囊藻毒素-RR的纯化及鉴定

将固相萃取和凝胶色谱技术相结合,建立了以野外采集的水华蓝藻为原料提取和纯化微囊藻毒素-RR(MC-RR)的有效方法。用70%的甲醇溶液溶解35 g藻浆,经离心等系列处理,得粗提液,旋转蒸发去除甲醇;粗提液经HLB柱固相萃取后,得到7.5 mL洗脱液,然后将其浓缩至2 mL,再用Sephadex LH-20凝胶色谱柱分离纯化,洗脱液分管收集,用紫外分光光度计测定每管洗脱液在238 nm的吸收值,并绘制洗脱曲线。使用高效液相色谱对峰值组分进行鉴定,同时利用紫外分光光度计对毒素的光谱特征进行鉴定。最终获得3.65 mg纯度超过90%的MC-RR样品,产品得率为74.1%。其紫外吸收光谱在238 nm处有特征吸收,证明所纯化的样品为MC-RR。

饮用水中病毒浓缩与检测方法的建立及应用

目的建立饮用水中病毒浓缩与检测方法并对实际水样进行人腺病毒污染状况监测。方法以f2噬菌体为水中肠道病毒代表，投加于受试水样中，评价NanoCeram滤芯对原水和饮用水初次浓缩及不同浓度PEG8000对初次浓缩液进行二次浓缩的效果。采用T以克隆制备人腺病毒荧光定量PCR标准品，对所得质粒测序，应用Blast序列类似性检索工具将其与目的基因片段进行一致性检测，建立荧光定量PCR检测人腺病毒的方法。应用上述方法，于2011年对武汉两家自来水厂原水和饮用水采用NanoCeram滤芯进行现场初次浓缩，聚乙二醇（PEG）／NaCl法进行二次浓缩，提取浓缩液中病毒DNA后进行荧光定量PCR检测，监测原水和饮水中人腺病毒污染状况。结果所建立的NanoCeram滤芯初次浓缩法对原水中的f2噬菌体回收率为（51．63±26．60）％，对饮用水中的￡噬菌体回收率为（50．27±14．35）％。当PEG8000浓度达到0．13kg／L时，二次浓缩回收率可达（90．09±10．50）％。所构建的人腺病毒荧光定量PCR标准品与目的基因片段序列一致度为99％，可用于人腺病毒的绝对定量。2011年，武汉市两家自来水厂原水中的人腺病毒浓度范围为（4．13×103～2．20×103）拷贝／L，出厂水中的人腺病毒浓度范围为（5．57×10。～7．52×105）拷贝／L，饮用水处理过程对人腺病毒的清除率为（75．49±11．71）％。结论NanoCeram滤芯联合PEG／NaCl法可对水环境中病毒进行有效浓缩，应用所建立的荧光定量PCR法检测发现自来水厂原水中存在人腺病毒，目前的水处理措施不能将其完全去除。

微囊藻毒素-RR产毒藻株的分离培养及经口急性毒性研究

目的 自天然水体中筛选分离微囊藻毒素-RR（microcystin-RR,MC-RR）产毒藻株并对其培养特征、产毒性质与急性毒性进行初步探讨.方法 采用毛细吸管法从水华样本中分离微囊藻株,经BG11培养基扩大培养,反复分离纯化藻种.用PCR方法筛查微囊藻毒素合成酶基因,再将藻毒素合成酶基因呈阳性的藻株扩大培养,用高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）鉴定其毒素种类及产毒能力;藻细胞起始浓度为1.5×10^5个/ml,光照强度2 000 lx,光暗比12 h∶12 h,（25±1）℃的条件下,监测藻液在680 nm处的吸光度值而测定藻株生长曲线.采用序贯法测定MC-RR对小鼠的经口染毒半数致死量（LD50）,并检测染毒后小鼠的血清酶学、脏器系数及脏器病理改变.结果 接种的198份样品中,分离到5株微囊藻毒素合成酶基因检测呈阳性的微囊藻株,其中一株经高效液相色谱检测鉴定以产MC-RR为主;经形态学与系统发育分类初步确定为铜绿微囊藻,该藻株对数生长期为55 ～60 d,整个生长周期为81 d,藻细胞最大浓度为5.52×10^ 7个/ml.小鼠MC-RR的经口染毒LD50为（12.10±1.35）mg/kg;观测不同作用时间的血清酶学等变化,发现丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、乳酸脱氢酶（LDH）与对照组比较差异具有统计学意义[染毒45 min时小鼠ALT值为（157.08±20.38） U/L,AST值为（333.00±68.53）U/L,ALP值为（392.70±89.59） U/L,LDH值为（1 071.13±160.22） U/L;4 h时ALT值为（514.68±156.87） U/L,AST值为（593.15±40.41） U/L,ALP值为（618.55±208.76） U/L,LDH值为（2 281.72±866.67） U/L;对照组ALT值为（40.30±4.89） U/L,AST值为（142.70±26.59）U/L,ALP值为（56.90±11.89）U/L,LDH值为（509.50 ±94.75） U/L;染毒45 min时各血清酶学变化的t值分别为-11.20、-5.77、-7.38、-6.60,染毒4h时各血清酶学变化的t值分别为-6.04、-20.21、-5.35、-4.07,P值均＜0.01];脏器系数中仅肝脏系数差异具有统计学意义（染毒组45 min为6.855±0.225,4h为8.409±0.276,对照组为5.784±0.286,t值分别为-3.96、-12.22,P值均＜0.01）,组织切片显示肝脏组织明显充血.结论 从天然水华中成功分离到一株具有微囊藻毒素合成酶基因的铜绿微囊藻产MC-RR藻株;所产MC-RR毒素经口染毒小鼠的LD50值为（12.10±1.35）mg/kg,急性毒作用靶器官为肝脏.

微囊藻毒素-LR对小鼠单核细胞和淋巴细胞的影响

目的探讨微囊藻毒素-LR（MC—LR）对小鼠血液中单核细胞和淋巴细胞的影响及毒性效应，筛查血液中早期灵敏效应指标。方法1月龄SPF级雄性昆明小鼠按体重采用随机数字表法分为5组，每组7只，分别分为对照组、低剂量组、中低剂量组、中高剂量组、高剂量组，每天给予1次腹腔注射染毒，分别给予生理盐水及3．125、6．250、12．500、25．000μ一、kg剂量的MC—LR。染毒7d后采用放射免疫方法检测重要相关细胞因子，KCl-SDS沉淀法检测淋巴细胞DNA-蛋白质交联（DNAprotein crosslinks，DPC）情况，流式细胞仪检测单核细胞吞噬功能及单核细胞和淋巴细胞的活性氧变化（reactive oxygen species，ROS），并分析其变化情况。结果中低、中高和高剂量MC—LR染毒组小鼠白细胞介素-6[分别为（346．837±25．536）、（360．847±37．886）、（434．245±35．858）pg／ml]均高于对照组[（232．775±32．816）pg／ml]（t值分别为-7．258、-6．760、-10．966，P值均〈0．05）；高剂量组肿瘤坏死因子-d含量[（10．782±0．966）fmol／ml]低于对照组[（16．878±3．378）fmol／m1]（t=4．591，P〈0．05）。中低和高剂量组淋巴细胞DPCI分别为（242．576±7．545）、（241．472±2．793）ng／ml]高于对照组[（228．657±4．130）ng／ml]（t值分别为-4．282、-6．801，P值均〈0．05）；低、中低、中高和高剂量组淋巴细胞DCF荧光强度（依次为3299．37±120．54、3281．38±58．34、3308．06±136．12、3346．92±108．69）均低于对照组（3770．81±131．39）（t值分别为6．995、9．007、6．472、6．577，P值均〈0．05）。低、中低、中高和高剂量单核细胞DCF荧光强度（依次为3271．51±140．79、3270．05±117．92、3326．90±114．39、3292．49±145．97）均低于对照组（3841．72±130．92）（t值分别为7．847、8．584、7．835、7．411，P值均〈0．05）。其他检测指标未见明显改变。结论在体内实验中，可观察到MC—LR对血液中单核细胞和淋巴细胞有一定的影响。经比较，白细胞ROS为本实验中最灵敏效应指标。

影响洗脑广告态度效果的因素研究

洗脑广告以简单、重复性的广告语和画面为标志,作为一种特殊的营销广告,洗脑广告有其自身的作用机理。利用好洗脑广告,能够使商品在短时间内获得大量曝光,给观众留下深刻印象,进而增加产品销量。但是,由于缺乏内容与营养,洗脑广告也易引起部分观众的反感,导致品牌形象受损。本文旨在通过对两则较为典型的洗脑广告进行对比,分析不同洗脑广告间的效果差异,探讨差异形成的原因,进而探明影响洗脑广告成功与否的因素,为广告制作者提供运用洗脑广告的思路与建议,使其能够在增加产品曝光度与知名度的同时尽可能降低观众的反感度。