冬凌草甲素下调EGFR/ERK/MMP-12和CIP2A/Akt信号通路抑制gefitinib耐受的非小细胞肺癌的转移

目的:研究天然化合物冬凌草甲素(oridonin,Ori)抑制吉非替尼(gefitinib)药物耐受的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞转移的作用及其机制。方法:用不同浓度的Ori作用于肺癌H1975细胞,划痕修复实验、Transwell法检测Ori对细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测Ori对细胞EGFR及下游信号通路,Akt及相关因子蛋白表达水平的影响;明胶酶谱检测金属基质蛋白蛋白酶12(matrix metalloproteinase-12,MMP-12)活性;荧光素酶报告系统检测Ori对AP-1转录活性的影响;Ch IP实验检测Ori对转录因子c-Fos和MMP-12结合的影响。结果:Ori能显著抑制细胞侵袭、迁移和粘附能力。Ori浓度依赖性抑制EGFR、ERK和Akt磷酸化,抑制MMP-12和癌蛋白(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)表达,而上调其底物蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)的表达及活性。Ori抑制转录因子AP-1的转录活性及c-Fos和MMP-12启动子结合。结论:Ori可以通过抑制EGFR/ERK/MMP-12和CIP2A/PP2A/Akt信号通路来抑制gefitinib耐药的NSCLC细胞的侵袭和迁移。

CIP2A在三阴性乳腺癌中的表达及作用机制研究

目的:探讨癌抑制蛋白磷酸酶2A(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的生物学功能。方法:用Western blot法、实时荧光定量PCR法检测CIP2A在三阴性乳腺癌细胞中的表达情况;siRNA干扰技术转染TNBC细胞系,检测转染后TNBC细胞的增殖、侵袭能力的变化及Akt/m TOR/P70S6K信号通路蛋白的表达情况。结果:CIP2A在TNBC细胞系中的表达较低浸润性乳腺癌细胞高;敲除TNBC细胞系中CIP2A,可抑制增殖,诱发细胞凋亡和自噬;还可抑制细胞侵袭和转移;并且能抑制Akt/m TOR/P70S6K信号通路活化。结论:CIP2A是一种参与肿瘤侵袭的癌蛋白,本课题研究为CIP2A作为三阴性乳腺癌的治疗靶点提供研究基础。

冬凌草甲素逆转人胃癌细胞SGC 7901/DDP顺铂耐药的作用及机制研究

目的:探讨天然化合物冬凌草甲素(oridonin,Ori)对顺铂(cisplatin,DDP)耐药的胃癌细胞SGC7901/DDP的耐药逆转作用及其相关机制。方法:MTT法检测Ori对SGC7901/DDP的毒性作用及与DDP的协同作用;台盼蓝计数实验及集落形成实验检测Ori对细胞生长的抑制作用;核染色免疫荧光及免疫印迹法检测Ori诱导细胞凋亡作用及逆转SGC7901/DDP细胞DDP耐药的作用机理。结果:Ori能显著抑制SGC7901/DDP细胞增殖、生长和集落形成,并诱导凋亡。机制研究发现,Ori显著抑制与肿瘤多药耐药相关的蛋白的表达,包括P-糖蛋白(P-glycoprotein)、多药耐药性相关蛋白(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)和细胞周期蛋白Cyclin D1;另外,Ori还可以诱导磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)表达下调,Akt磷酸化下调。结论:Ori能够逆转SGC7901/DDP对DDP耐药并诱导凋亡,其机制可能是通过下调多药耐药蛋白P-gp、MRP1及抑制CIP2A/Akt信号级联。