小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及饲养层制备

背景:建立一种既可以大量制备,又易于保存并保持较高活性的饲养层细胞是人胚胎干细胞培养研究的重要环节。目的:建立昆明小鼠胚胎成纤维细胞的最佳分离培养方法,评价其用于人胚胎干细胞饲养层研究的可行性。方法:用不同浓度胰蛋白酶分步消化法体外分离和培养昆明小鼠胚胎成纤维细胞,观察其生物学特性,制备胚胎成纤维细胞饲养层,检测人胚胎干细胞在饲养层上培养的生长状态。结果与结论:制备昆明小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的最佳胎龄为13.5 d。不同浓度胰蛋白酶分步消化法制备的胚胎成纤维细胞生长状态好,获得的成纤维细胞纯度高,增殖活跃。冻存2周,1,3,6个月内复苏的细胞存活率差异无显著性意义。小鼠胚胎成纤维细胞在第2-4代增殖旺盛,第5代以后细胞增殖活力明显下降。人胚胎干细胞在小鼠胚胎成纤维细胞长期传代后呈典型的未分化形态,碱性磷酸酶和过碘酸-雪夫染色均为阳性。结果表明建立的昆明小鼠胚胎成纤维细胞饲养层分离培养法可为人胚胎干细胞扩增提供稳定、优质的饲养层细胞。

微柱凝胶技术在ABO血型不合新生儿溶血病诊断及输血前检验中的应用分析

目的探究微柱凝胶技术对ABO血型不合新生儿溶血病诊断及在输血前检验的应用价值。方法47例新生儿溶血病患儿,均应用微柱凝胶技术、凝聚胺介质技术将患儿和5份ABO同型红细胞制剂进行主侧交叉配血试验。分析诊断结果、直抗类型和血浆交叉配血结果、直抗类型和放散液交叉配血结果;对比微柱凝胶技术和凝聚胺介质技术配血结果。结果47例患儿检验后确诊为ABO新生儿溶血病,直抗检测阳性22例、游离检测阳性38例、放散检测阳性47例,占比分别为46.81%、80.85%、100.0%。47例患儿血浆交叉配血次数235次。微柱凝胶技术血浆交叉配血不合次数124次(52.77%),凝聚胺介质技术血浆交叉配血不合次数26次(11.06%);微柱凝胶技术血浆交叉配血不合率明显高于凝聚胺介质技术,差异具有统计学意义(P<0.05)。直抗阳性与直抗阴性患儿血浆交叉配血不合率分别为39.55%、25.20%;直抗阳性血浆交叉配血不合率高于直抗阴性,差异具有统计学意义(P<0.05)。47例患儿放散液交叉配血次数235次。微柱凝胶技术放散液交叉配血不合次数98次(41.70%),凝聚胺介质技术放散液交叉配血不合次数23次(9.79%);微柱凝胶技术放散液交叉配血不合率明显高于凝聚胺介质技术,差异具有统计学意义(P<0.05)。直抗阳性与直抗阴性患儿放散液交叉配血不合率分别为33.18%、19.20%;直抗阳性放散液交叉配血不合率高于直抗阴性,直抗阴性(P<0.05)。血浆凝聚胺介质技术配血不合的微柱凝胶技术检测均为不合,基于Kappa一致性检验,两种检验结果一致性对比差异有统计学意义(P<0.05),两种技术交叉配血结果一致性较差。结论微柱凝胶技术对ABO新生儿溶血病方面的应用价值相对较高,在输血前检验方面的敏感度明显高于凝聚胺介质技术,但也有一定的缺陷,应按照患儿的个体状况充分考虑血清免疫学特征和生理特征灵活应用多种方式筛查抗原抗体,最大程度降低输血事故的发生风险,值得推广应用。

血清Hcy、Cys C联合尿足细胞检测对2型糖尿病肾病的早期诊断价值

目的探讨血清同型半胱氨酸(Hcy)、胱抑素C(Cys C)联合尿足细胞检测对2型糖尿病肾病(DN)的早期诊断价值。方法收集130例临床诊断为2型糖尿病患者,依据尿白蛋白/肌酐比值(UACR)将其分为正常白蛋白尿(NA)组42例、微量白蛋白尿(MA)组45例和大量白蛋白尿(LA)组43例;选取同期健康体检者40例作为对照组。应用全自动生化分析仪检测血清Hcy和Cys C水平,采用流式细胞术检测尿中足细胞数量;分析血清Hcy、Cys C、尿足细胞与UACR的关系,并应用ROC曲线确定单一和联合检测诊断早期DN的价值。结果 NA、MA、LA组血清Hcy、Cys C水平及尿足细胞数量均高于对照组,并随着DN进展而升高(P均<0.05)。相关分析结果表明,血清Hcy、Cys C水平及尿足细胞数量分别与UACR呈正相关(r=0.83、0.83、0.84,P均<0.05)。在NA组中,Hcy、Cys C和足细胞诊断早期DN的敏感性分别为59.5%、80.9%和64.3%,三者联合检测的敏感性为90.8%。结论 2型糖尿病患者肾损伤时血清Hcy、Cys C水平和尿足细胞数量显著升高,三者联合检测对于DN早期诊断具有重要价值。

人胚胎干细胞饲养层的制备及生物学活性

背景:建立一种既可以大量制备,又能保存并保持较高活性的饲养层是胚胎干细胞培养研究不可缺少的环节。目的:体外分离培养、冻存复苏ICR小鼠胚胎成纤维细胞,观察其生物学特性。方法:取ICR小鼠13.5d胚胎,用胰蛋白酶分步消化法分离培养小鼠成纤维细胞,对冻存复苏后的小鼠胚胎成纤维细胞形态、生长曲线、贴壁率、细胞化学染色及支持人胚胎干细胞生长特性等进行观察。结果与结论:复苏后的小鼠胚胎成纤维细胞在体外传代30min时80%以上细胞贴壁,生长曲线显示细胞增殖活跃,细胞化学染色AKP、PAS、POX阴性,能长期支持人胚胎干细胞传代生长。提示此方法所获得的小鼠胚胎成纤维细胞复苏后有较高的生物学活性,可为人胚胎干细胞扩增提供稳定、优质的饲养层细胞。

儿童感染性肺炎患者血液中炎症因子,ECP,EOS,IgE,VEGF及其受体检测与临床意义分析

目的分析肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、嗜酸性细胞阳离子蛋白(ECP)、嗜酸性粒细胞(EOS)、免疫球蛋白E(IgE)、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体在感染性肺炎患儿血清中检测的临床意义。方法选择2016年3月~2017年3月来连云港市妇幼保健院就诊的80例感染性肺炎患儿,将其纳入观察组,按照病原体差异,分为病毒感染组、支原体感染组及细菌感染组。同时选择30例健康儿童作为对照组。采用全自动血细胞分析仪测定各组受试者血液中EOS数量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中TNF-α,IL-5,IL-6,IL-8,ECP,VEGF,VEGF-R1和VEGF-R2的水平,免疫散射比浊法测定血清中IgE的水平。结果观察组患儿血液中TNF-α,IL-5,IL-6,IL-8,ECP,VEGF,VEGF-R1,VEGF-R2,EOS及IgE的水平显著高于对照组儿童,差异均有统计学意义(t=2.325~3.593,P<0.05)。细菌感染组患儿血清中的TNF-α,IL-5,IL-6和IL-8水平显著高于病毒感染组及支原体感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。支原体感染组患儿血清中的VEGF,VEGF-R1和VEGF-R2水平则显著高于细菌感染组与病毒感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清IgE水平及外周血中EOS数量在细菌感染组、病毒感染组及支原体感染组中的差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清TNF-α,IL-5,IL-6和IL-8可作为细菌感染性肺炎与病毒感染性肺炎及支原体感染性肺炎的鉴别指标。

人胚胎干细胞传代培养及细胞化学染色特性

目的体外建立人胚胎干细胞传代培养方法,研究人胚胎干细胞细胞化学染色特性。方法以小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层传代培养人胚胎干细胞,检测人胚胎干细胞、自发分化克隆及拟胚体的细胞化学染色特性。结果人胚胎干细胞在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上传30代以上其形态保持不变;人胚胎干细胞碱性磷酸酶、过碘酸-雪夫反应、α-醋酸萘酚酯酶染色阳性,自发分化克隆细胞阳性程度明显减弱;人胚胎干细胞形成的拟胚体碱性磷酸酶染色弱阳性,过碘酸-雪夫反应、α-醋酸萘酚酯酶染色阳性。结论小鼠胚胎成纤维细胞能支持人胚胎干细胞传代培养,细胞化学染色结果能初步鉴别人胚胎干细胞未分化特性。

液体培养法和PCR-荧光探针法对解脲支原体检测的优劣分析

UU-Ureaplasmaurelyticum,中文称解脲支原体。这是一种原核生物,属于细菌、病毒间的。这种微小生物是可以通过人工培养而生长的,可在人体的泌尿生殖道中寄居。因此这种原核生物会引发人体出现泌尿生殖系统的感染,同时是一种极为重要的病原体,仅排在占比50%的非淋球菌性尿道炎后面。主要是通过性生活进行传播,多见于年轻者,也多见于由于不洁性交后所导致的感染。患者的黏膜表面受损后,由损口侵入支原体,由于该支原体感染发生了炎症后则会引发感染。导致患者的免疫力下降,且还会引起阴道炎和宫颈等生殖器同样发生感染情况,且和流产、胎儿宫内发育迟缓、不育等有十分密切的有关系。无论男女均有可能发生感染。受到感染之后,多数患者是没有太明显症状的,所以并不容易被发现,也容易漏诊。受解脲支原体对于患者的尿道、宫颈等都会造成侵犯的作用,引发症症。上行感染时可能引发患者出现盆腔炎、子宫内膜炎等等,特别是输卵管炎,更加常见。解脲支原体所造成的女性的生殖器病理性改变是造成无法生育的重要原因。患者如若得不到及时救治,可垂直传播给胎儿,导致胎儿流产、早产、新生儿肺炎、新生儿结膜炎等后果,严重危及孕妇和新生儿的健康[2]。

连云港市儿童末梢血铜、锌、钙、镁、铁和铅水平调查

目的了解连云港市儿童末梢血中铜、锌、钙、镁、铁和铅水平及相关性。方法选取2016—2017年7月在连云港市妇幼保健院就诊的0~8岁儿童2 570人,采集末梢血标本,采用原子吸光光度法检测铜、锌、钙、镁、铁和铅6种元素,同时分析元素间的相关性。结果钙含量随着年龄的增长呈下降趋势,其他元素呈上升趋势(均P<0.05)。铁、锌和钙缺乏在各年龄段均较常见,缺乏率分别为15.60%、13.19%、11.95%,铅超标率为1.05%,铜和镁的检测结果均在正常范围。铜、锌、钙、镁和铁5种元素中任2种之间均存在相关关系,铅与钙、镁、铁含量均分别呈负相关(均P<0.05)。结论连云港市儿童血液中铜、镁含量分布合理,钙、铁、锌存在一定程度的缺乏,铅存在少量超标情况。

2016—2019年妇幼医院食源性疾病监测结果分析

目的了解连云港市食源性疾病的流行特征,为减少和控制食源性疾病提供参考依据。方法采集2016—2019年连云港市妇幼保健院符合食源性疾病定义的就诊者信息,收集粪便样本,进行病原学检测分析。结果从601份食源性疾病患者粪便样本中共检出阳性菌株153例,检出率25.46%,主要为诺如病毒(77例,12.81%)、致泻性大肠埃希菌(51例,8.49%)、沙门菌(14例,2.33%)。2016—2019年阳性病例有升高的趋势(P<0.05),阳性病例在6~8月有明显的高峰;阳性病例主要集中于7岁以下儿童,检出率25.46%(153/601)。主要是由于进食乳及乳制品引起,其次是在家中进食多种食物导致。结论连云港市食源性疾病主要以诺如病毒和致泻性大肠埃希菌为主,季节高峰较明显,相关部门应加大对食源性疾病的监测,及时做好食品安全教育和宣传指导工作,应根据各病原菌检出率的差异在不同季节开展不同的防控措施。