tTG硫代反义寡核苷酸抑制牛眼小梁细胞tTG的表达△

目的观察组织型谷氨酰胺转移酶(tissue transglutaminase,tTG)硫代磷酸化修饰反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对体外培养牛眼小梁细胞(bovine trabecular meshwork cell,BTMC)tTG在mRNA水平和蛋白水平表达的影响,初步探讨tTG-ASODN在治疗原发性开角型青光眼中的可能性。方法根据牛tTG mRNA的二级结构设计并合成ASODN1、ASODN2,用阳离子脂质体Lipofectamin包埋后转染BTMC,以半定量逆转录-聚合酶链反应法检测转染后tTG mRNA表达的变化,以免疫组织化学SP法检测转染后tTG蛋白表达的变化。结果ASODN1组和ASOND2组的tTG/GAPDH灰度比值分别为1.0695±0.0009、1.0662±0.0007,空白对照组和错义寡核苷酸组分别为1.0185±0.0024、1.0167±0.0012;tTG-ASODN1、tTG-ASODN2对BTMC的tTG mRNA和蛋白表达均有明显的抑制作用,与空白对照组和错义寡核苷酸组相比有显著性差异(P<0.05);tTG-ASODN1与tTG-ASODN22组间无显著性差异(P>0.05)。结论tTG-ASODN可明显下调BTMC的tTG在mRNA和蛋白水平的表达,提示tTG-ASODN有望在原发性开角型青光眼的治疗中发挥重要作用。

国产房水引流置入物治疗顽固性青光眼近期疗效观察

目的 观察国产引流置入物治疗顽固性青光眼的疗效。方法 对 10例顽固性青光眼施行颞上象限或颞下象限到赤道部区域的国产HAD房水引流物置入术。结果 术后半年以上由术前眼压 46 6± 4.5mmHg ,下降至 19 75± 5 .78mmHg ,总成功率为 70 %。并发症有短暂性前房出血 ,术后早期低眼压引流管过长或过短。结论 国产HAD房水引流物置入术较为经济 ,是治疗难治性青光眼的一种有效方法之一。

人重组肿瘤坏死因子-α体外诱导人小梁细胞凋亡

目的：研究人重组肿瘤坏死因子-α（rhTNF—α）对人小梁细胞（human trabecular meshwork cells，HTM）凋亡的影响，探讨其在原发性青光眼发病中的作用机制。方法：组织块法原代培养人小梁细胞，取第3～5代细胞用于实验。不同浓度的rhTNF—α与细胞共同孵育24h，采用Annexin—V联合PI双染流式细胞术，测定细胞凋亡率，结合荧光显微镜来观查凋亡细胞。结果：浓度低于0．01MU／L的肿瘤坏死因子-α作用24h对人小梁细胞凋亡无明显影响，浓度0．01MU／L及以上的肿瘤坏死因子-α作用24h可明显增加入小梁细胞凋亡率，凋亡率与肿瘤坏死因子-α浓度成正比。结论：肿瘤坏死因子-α可以诱导体外培养的人小梁细胞发生凋亡，可能参与了青光眼发病中小梁细胞的损害过程。

褪黑素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤后神经节细胞的保护作用

目的:探讨褪黑素(melatonin,MT)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retina ischemia reperfusion injury,RIR)中神经节细胞(retina ganglion cells,RGC)的防护和修复作用。方法:健康SD大鼠24只随机分为A组和B组。两组均利用前房高眼压灌注法制成左眼RIR模型,A组每日给予溶媒(100mL/L无水乙醇生理盐水)1mL/kg ip,B组每日给予5g/L MT1mL/kg ip,直至处死动物。两组按左眼RIR后的存活时间又分为3小组:A1和B1组(损伤后7d),A2和B2组(损伤后14d),A3和B3组(损伤后30d),每组各4只。于处死前7d由双上丘和双外侧膝状体注射30g/L fluorogold(FG)标记双眼RGC,处死日行双眼眼球摘除术,将全视网膜组织铺片置于荧光显微镜下,分鼻上、鼻下、颞上、颞下4个区域作荧光摄影,并输入计算机经图像分析系统计数RGC,计算RGC标识率(即损伤眼RGC数/未损伤眼RGC数)×100%,作统计学分析。结果:A1,A2,A33组RGC标识率分别为77.2%±6.4%,65.5%±7.0%,53.9%±4.4%;B1,B2,B33组RGC标识率分别为81.3%±9.3%,79.8%±8.4%,80.3%±11.1%。结论:大鼠RIR后MT治疗可提高RGC存活率。

苏拉明抑制体外培养的Tenon囊成纤维细胞增殖的实验研究

目的观察苏拉明对体外培养的Tenon囊成纤维细胞增殖的影响,探讨其作为青光眼滤过术辅助用药的可能性。方法通过体外培养青光眼患者Tenon囊成纤维细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同作用时间及不同浓度的苏拉明对细胞增殖的抑制作用,并用流式细胞术分析细胞周期。结果MTT法显示苏拉明作用24h、48h及72h后,浓度分别为500mg·L-1、400mg·L-1、300mg·L-1以上的各实验组与对照组吸光度值A均数间比较有显著性差异;流式细胞术显示苏拉明将细胞阻抑于G2/M期,实验组G2/M期的细胞比对照组增加了15.8%.结论苏拉明能抑制体外培养的Tenon囊成纤维细胞增殖,并呈现剂量、时间依赖性,提示其有望成为青光眼滤过术后抗瘢痕增生的辅助用药。

激光治疗时的高眼压及其预防

观察２０４例２５３眼Ｎｄ：ＹＡＧ激光时发生的高眼压，发现闭角青光眼间歇期作激光虹膜切开时眼压明显升高（≥１．０６ｋＰａ）者较多（２１．２％），升高幅度较大，有的可升高到７．９８ｋＰａ；临床前期及慢性闭角青光眼发生率较低（分别为９．４％及５．３％），最高不超过３．９９ｋＰａ。后内障切开时眼压明显升高者有６４．３％，高峰可达６．６５ｋＰａ。治疗前１小时半用噻吗心安滴眼可明显减低此种并发症的发生率或其严重程度。

小梁切除术中一种改良可拆缝线的疗效观察

目的 寻找一种既可避免术后早期房水过量流出,又能恰当地控制滤过量的安全、简便和有效的手术方法。方法 选择急慢性闭角型青光眼99例,126眼做标准的小梁切除术,巩膜瓣后缘全3针固定缝线,两侧近角膜缘处各作1针固定缝线,两侧中部各缝1活动缝线。结果 126眼中术后1周内46眼眼压≥15mmHg(1mmHg=0.133kPa)需拆除活动缝线,其中26眼眼压从拆线前22.4±6.5mmHg降至11.6±2.6mmHg,10眼术后1d Ⅰ°浅前房,其中5眼术后4d恢复,2眼术后7d恢复正常,3眼术后6d出现Ⅱ°浅前房,术后分别12、14、18d恢复,总发病率为10.3％。结论 改良活结缝线方法操作简单,不影响滤过泡,不留缝线残端在结膜囊或角膜面上,无刺激症状及不适感觉,是一种小梁切除术中预防早期浅前房的有效方法。

前房与后房悬吊式人工晶状体植入术的对比

目的 对比观察前房及后房悬吊式人工晶状体植入术的疗效。方法 回顾调查无后囊支撑的Ⅰ期及Ⅱ期前房人工晶状体植入和后房悬吊式人工晶状体植入共 3 4眼 ,随访期为 6～ 3 6月 ,随访视力、眼压、眼底。结果 前房人工晶状体植入术18眼中 :术后视力 0 1～ 0 .4者 8眼 ( 4 4 4%) ,≥ 0 .5者 9眼 ( 5 0 0 %)。后房悬吊式人工晶状体植入术 16眼中 :术后视力 0 1～0 .4者 8眼 ( 5 6 0 %) ,≥ 0 .5者 4眼 ( 2 5 0 %)。 6眼术后发生葡萄膜炎 ,1眼继发青光眼 ;1例 ( 1眼 )老年人因高血压发生脉络膜下爆发性出血。 2例 ( 2眼 )脉络膜少量出血 ,术后 5天吸收。眼压术后均在正常范围。结论 两组术后均获得较理想的视力。

滤过手术中加用高浓度5-氟尿嘧啶

各类青光眼33例45眼，其中包括曾经手术失败，葡萄膜炎继发青光眼，新生血管性青光眼及青少年青光眼等。具有失败高危因素12例18眼。以穹隆部为基底的结膜瓣，在术中利用25mg／ml的5一氟尿嘧啶（5－Fu）敷贴5分钟，术后只在结膜下注射该药4次，术后随访（平均6．5月）复查41眼（91．1％），眼压≤2．79kPa（1kPa＝7．5mmHg），有4眼发生角膜上皮缺损，1眼发生黄斑出血，1眼发生短暂前房积血。表明此种术中与术后使用5－Fu相结合的方法可适用于青光眼滤过手术。

羟丙基甲基纤维素对房角组织影响的实验研究

为了探讨羟丙基甲基纤维素 ( HPMC)进入前房后对房角组织的影响 ,将 2 4只纯白家兔随机分成 2组 :实验组 4 0眼 ,前房注射 2 % HPMC,对照组 8眼 ,其中一眼做正常对照 ,7眼前房注射 BSS,实验组又按眼压正常和增高分为 A,B两组。分别于注射后第 5 d、 3周、 10周采集标本行病理检查。发现注射初期 ,实验 A组可见到小梁网轻度扩张 ,房水丛管腔内壁内皮细胞胞质内空泡增多 ,实验 B组可见小梁间隙增宽 ,胶原纤维及细胞间质纤维增生 ,房水丛管壁内皮细胞空泡明显增多 ,但追踪观察远期皆恢复正常。实验表明 HPMC进入前房并存留可导致一过性眼压增高并可由此引起房角组织发生病理改变 ,但为可逆性变化。 HPMC本身对房角组织无毒性和破坏性。

地塞米松对体外培养的晶状体上皮细胞水通道蛋白-1表达的影响

目的观察体外培养的人眼晶状体上皮细胞(LECs)水通道蛋白-1(AQP-1)的表达;研究地塞米松对其表达水平的影响。方法运用免疫组织化学法测定人眼LECs AQP-1的表达;用含0、1×10-8、5×10-8、10×10-8、50×10-8mol/L地塞米松的DMEM培养液培养人眼LECs7d,采用RT-PCR检测地塞米松对LECs AQP-1表达的影响。结果免疫组织化学检测示体外培养的正常人眼LECs胞膜和胞浆中可见AQP-1的表达;RT-PCR示正常人眼LECs AQP-1/β-actin吸光度比值为1·43±0·12;4种浓度地塞米松处理7d后其比值分别为1·32±0·09、1·27±0·08、1·01±0·09、0·67±0·10,当地塞米松浓度≥5×10-8mol/L时有抑制作用(P<0·05),且抑制作用随地塞米松浓度的增加逐渐增强。结论体外培养的人眼LECs中可见AQP-1的表达,AQP-1可能参与维持晶状体的脱水状态及其透明性;地塞米松抑制体外培养的人眼LECs AQP-1的表达,AQP-1可能在皮质类固醇性白内障的发生发展中起重要作用。

TGF-β_2刺激人Tenon囊成纤维细胞增殖,表达CTGF和合成Fn

目的:研究转化生长因子(TGF-β2)和结缔组织生长因子(CTGF)在滤过泡瘢痕化中的作用。方法:用不同浓度的TGF-β2刺激HTF,然后用RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测CTGF和Fn的表达,用MTT法检测细胞的增殖。结果:TGF-β22μg/L到5μg/L范围有剂量依赖性地促进HTF的细胞增殖,CTGF的表达和Fn的合成的趋势(P<0.01),但0.5μg/L,1μg/L与正常对照组对细胞的增殖作用差别无显著性,5μg/L与10μg/L增强细胞的增殖作用也无显著性差异(P>0.05)。结论:TGF-β2能够明显地促进HTF细胞增殖,并增强其下游介质(CTGF)的表达和合成细胞外基质-纤维连接蛋白(fibronetin,Fn)。

儿童过敏性结膜炎诊治进展

在针对过敏性疾病的诊治中,儿童过敏性结膜炎越来越受到关注,但大量的漏诊和误诊存在。本文就儿童过敏性结膜炎的解剖特点、发病机制、临床症状和体征、诊断以及治疗进行综述。

泪道探通配合插管留置术的疗效分析

目的:观察泪道探通配合插管留置术治疗泪道阻塞的手术疗效,分析影响疗效的因素。方法:采用泪道探通配合插管留置术治疗60例(90眼)泪道阻塞患者,术后3mo拔管,随访6mo,将阻塞部位不同和既往不同治疗史的疗效分别进行对比分析。结果:阻塞部位在泪小管,泪总管和鼻泪管的成功率分别为85.7%,75.8%,53.5%。经χ2检验,阻塞部位在泪小管与在泪总管的手术疗效相同(P>0.05),阻塞部位在鼻泪管的手术疗效均低于阻塞部位在泪小管或在泪总管的(P<0.05)。既往做过泪道激光手术疗效均低于未做过手术或曾做过泪道探通配合插管术(P<0.05)。曾做过泪道探通配合插管术再次手术不影响疗效(P>0.05)。结论:泪道探通配合插管留置术治疗泪道阻塞经济,简单,方便,治疗泪小管与泪总管阻塞效果好,手术失败再次手术仍有价值,但不适合治疗泪道激光手术失败后的病例。

儿童过敏性结膜炎和过敏性鼻炎的关系

目的评价儿童过敏性结膜炎和过敏性鼻炎的关系。方法自2005年3月至2007年1月,来自武汉市儿童医院892患者,其中眼科门诊407例作为过敏性结膜炎组;五官科门诊485例为过敏性鼻炎组。记录其并发疾病、临床体征和症状、病史。479例检测患者血清总IgE及特异性IgE;88例同时患有两种疾病的进行眼结膜和鼻粘膜的刮片寻找嗜酸性粒细胞。结果在407例过敏性结膜炎组中302例(74%)、374例(92%)、116例(29%)同时患有湿疹、鼻炎和哮喘;485例过敏性鼻炎组中334例(69%)、430例(89%)、145例(30%)同时患有湿疹、鼻炎和哮喘。过敏性结膜炎合并过敏性鼻炎与过敏性鼻炎合并过敏性结膜炎无统计学差异(χ2=2.6,P>0.05);两者合并湿疹和哮喘也无统计学差异(χ2=3.08,χ2=0.21,P>0.05)。两种疾病的症状的严重程度不平行,在季节性过敏性结膜炎和常年性过敏性结膜炎患者中,其鼻部的症状比眼部的症状严重(χ2=258.2,P<0.05),而在春季角结膜炎中则相反(χ2=66.5,P<0.05)。88例刮片中50例(57%)结膜刮片和58例(66%)鼻粘膜刮片中可以找到嗜酸性粒细胞,两者之间有差异性(χ2=1.5,P>0.05)。主要的食入性过敏原是鱼、虾、蟹;吸入性过敏原是尘螨、屋尘和真菌。结论两种疾病的相似性明显多于差异性,这提示防治过敏性结膜炎在未来预防过敏性鼻炎和哮喘中应作为一项重要的纳入指标。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27kip1在翼状胬肉中的表达

目的 探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p2 7kip1在翼状胬肉中的表达及其在翼状胬肉发病机制中的作用。方法 采用免疫组化法对手术切除的翼状胬肉标本和正常结膜组织进行增殖性核抗原及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 p2 7kip1蛋白检测。结果 正常结膜组织中和翼状胬肉中增殖性核杭原表达分别为 0 .2 6 8± 0 .0 2 1和 0 .4 75± 0 0 4 6 (P<0 .0 5 ) ,p2 7kip1分别为 0 .4 2 3± 0 .0 31和 0 .2 4 2± 0 0 17(P <0 .0 5 )。结论 结膜中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p2 7kip1的低表达可能与翼状胬肉的发生、发展有关。

Ahmed青光眼阀盘周纤维包裹二次手术后的临床分析

目的分析Ahmed青光眼阀盘周纤维包裹二次手术切除后的效果和并发症。方法回顾分析在我院行全视网膜冷凝后Ahmed青光眼阀植入后因Ahmed阀的盘和引流管周围形成包裹、眼压超过30mmHg导致手术失败的患者共11例，进行二次纤维包裹切除后，分析其眼压、视力的变化和发生并发症的原因。结果11例患者术后进行1～12月的随访，远期成功率为72．7％。术前和术后眼压平均为（40．72±9．05）mmHg和（17．36±8．09）mmHg，术后较术前显著下降（t=6．38，P〈0．001）。主要并发症为Ahmed阀盘和引流管的暴露。结论二次选择性的瘢痕切除辅以抗增殖药物的应用，能够进一步提高Ahmed青光眼阀植入术的成功率。

组织型转谷氨酰胺酶抑制剂对TGF-β_2诱导人LECs表达纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原的影响

目的观察组织型转谷氨酰胺酶(tTG)特异性抑制剂(MDC)对TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞(LECs)表达纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的影响。方法将含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养的LECs株HLE-B3传代后分为5组:无血清培养基培养的HLE-B3为正常对照组;加入10μg/L TGF-β2处理的HLE-B3为TGF-β2组;10μg/L TGF-β2与100、200、400μmol/L MDC共同处理的HLE-B3为不同浓度MDC组。用半定量RT-PCR检测tTG、FN、Col-Ⅳ在HLE-B3中的表达,计算A(tTG/β-actin)、A(FN/β-actin)、A(Col-Ⅳ/β-actin)值。结果正常体外培养的HLE-B3中可表达一定量的tTG、FN及Col-Ⅳ。与正常对照组相比,10μg/L TGF-β2组中tTG、FN、Col-Ⅳ的表达明显增加(t=33.95,P<0.01;t=38.24,P<0.01;t=13.48,P<0.01);与TGF-β2组相比,100、200、400μmol/L MDC组中FN和Col-Ⅳ的表达明显减少(P<0.01)。100、200、400μmol/L MDC组各组间FN和Col-Ⅳ的表达差异均有统计学意义(P<0.01)。结论MDC可剂量依赖性地抑制TGF-β2诱导的LECs中FN、Col-Ⅳ表达的增加。tTG可促进人LECs表达FN、Col-Ⅳ,并参与后囊膜混浊(PCO)的形成。

叶黄素对牛晶状体上皮细胞增殖及迁移的影响

目的观察叶黄素(lutein)对体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine lens epithelial cells,BLECs)增殖和移行的影响,为药物防治后发性白内障(after-cataract)提供新的选择。方法首先进行BLECs原代培养和传代培养。取第2～3代BLECs,分别采用MTT法、划线法,研究不同浓度及作用时间的叶黄素对体外培养的BLECs增殖及移行的影响。结果①与对照组相比,当浓度>1μmol/L时,叶黄素能够明显抑制BLECs的增殖,差异有显著性(P<0.01)。相同作用时间不同浓度组之间抑制作用比较,随药物浓度的增加,抑制作用加强,各浓度组之间差异有显著性(P<0.01)。而相同药物浓度组随着作用时间的延长,抑制作用加强,各时间点差异亦有显著性(P<0.01)。②浓度为1μmol/L和2μmol/L的叶黄素能明显抑制BLECs的的移行,与对照组相比,差异有显著性(P<0.01)。两组间愈合率比较,差异亦有显著性(P<0.01)。结论①在浓度≥1μmol/L时,叶黄素能有效抑制BLECs的增殖。②浓度为1μmol/L和2μmol/L的叶黄素能抑制BLECs的移行,其强度呈一定时间依赖性。③叶黄素可能成为药物治疗后发性白内障的新选择。