天麻素对体外模拟脑缺血损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用

目的:观察中药天麻素对培养的正常及缺血大鼠脑微血管内皮细胞(BMEC)的影响,以探讨天麻素对BMEC的作用。方法:采用体外培养的BMEC,模拟脑缺血损伤,观察天麻素对其活性、生存率和一氧化氮(NO)的影响。结果:缺血损伤模型BMEC活性及生存率较正常对照组明显降低;不同剂量天麻素对正常对照组BMEC活性、生存率及NO含量有升高趋势;正常对照组不同剂量天麻素BMEC活性较缺血损伤模型组活性有明显升高(P<0.05);天麻素高剂量可明显提高缺血损伤BMEC NO含量(P<0.05)。结论:天麻素各实验剂量可增强缺血损伤BMEC活力,提高受损内皮细胞(EC)的生存率;促使EC NO分泌增加。提示天麻素对体外培养的大鼠BMEC缺血损伤具有一定的保护作用。

ICP-AES法检测清开灵注射液中多种无机元素含量

目的建立同时测定清开灵注射液中多种无机元素含量的方法。方法用微波消解法对样品进行预处理,采用电感耦合等离子体原子发射光谱仪（ICP-AES）对10个不同批次清开灵注射液中的无机元素进行含量测定。结果通过各元素含量测定方法学考察,确立了仪器的检出限及各元素的最佳检测波长,10批次清开灵注射液各元素相对标准偏差为0.16%~4.90%,加标回收率在92.0%~117.0%之间。结论该方法灵敏度高、可靠易行,满足清开灵注射液无机元素含量检测条件,初步确立其各元素含量范围。

鹌鹑高尿酸血症模型建立及菊苣提取物对其影响的实验研究

目的 :塑造与人类代谢类似的高尿酸血症动物模型 ,观察中药菊苣提取物对其影响。方法 :选择鹌鹑作为模型动物 ,以酵母食饵为造模剂 ,塑造高尿酸血症模型 ,动态检测鹌鹑血清尿酸等生化指标 ,观察菊苣提取物对该模型动物血清尿酸水平等的影响。结果 :饲酵母食饵 (15 g/kg) 7天 ,鹌鹑血清尿酸水平明显升高 ,持续 5周。菊苣提取物小剂量给药 7天可明显降低酵母诱发的鹌鹑血尿酸升高和对抗其一过性血糖的增高 ,给药 14天其作用优于阳性对照药苯溴马龙。结论 :(1)该模型是筛选防治高尿酸血症中药及研究其机制较理想的动物模型。 (2 )菊苣提取物有明显的降尿酸作用。 (3)造模机制和药物作用机理有待进一步深入研究。

大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液对皮层神经元活性的影响以及通络救脑注射液的干预作用

目的:探讨脑微血管内皮细胞条件培养液对神经元活性的影响,以及通络救脑注射液对此过程的干预作用。方法:制备正常、正常用药、拟缺血损伤、拟缺血损伤用药4种脑微血管内皮细胞条件培养液(N-CM、NT-CM、I-CM、IT-CM),分别作用于培养的皮层正常神经元和拟缺血损伤神经元,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率检测分析各个条件培养液对神经元活性的影响特征。结果:①N-CM对正常神经元无明显影响,但对拟缺血损伤的神经元表现出一定的保护作用,尤其是NT-CM可明显提高受损的神经元活性;②I-CM可降低正常神经元活性,对已受损的神经元则进一步加重损伤,IT-CM可明显改善这种损伤状态。结论:脑微血管内皮细胞的旁分泌作用可能在中枢系统缺血性损伤中起重要作用,有可能是不能透过血脑屏障的中药成分发挥治疗作用的靶点。

不同内皮细胞条件培养液对皮层神经元线粒体功能的影响及通络救脑注射液的保护作用

目的探讨脑微血管内皮细胞条件培养液对损伤神经元线粒体功能的影响,以及通络救脑注射液对此过程的干预作用。方法制备(1)正常内皮细胞条件培养液(N-CM):正常培养的内皮细胞不作任何处理;(2)正常用药内皮细胞条件培养液(NT-CM):通络救脑注射液按1μl/ml浓度作用10h;(3)缺氧损伤内皮细胞条件培养液(I-CM);(4)缺氧损伤用药内皮细胞条件培养液(IT-CM):于损伤前4h,加入通络救脑注射液1μl/ml;分别作用于糖氧剥夺损伤的神经元模型,通过测定神经元线粒体活性、线粒体膜电位(MMP)及细胞色素C(CytC),分析各个条件培养液对损伤神经元线粒体功能的影响。结果(1)与模型组比较,N-CM组与NT-CM组(P<0.05)均可阻抑损伤神经元线粒体活性的下降,尤其是NT-CM保护作用更为明显。(2)与正常组比较,模型组MMP明显下降;I-CM使受损神经元的线粒体功能进一步下降;I-CM组可进一步降低受损神经元MMP,IT-CM可逆转神经元MMP下降,明显改善这种损伤状态。(3)N-CM组与NT-CM组均可降低损伤神经元的CytC释放,分别与模型组、I-CM组比较,差异均有显著性(P<0.05)。结论脑微血管内皮细胞的旁分泌功能对损伤神经元的存活有重要的调节作用,该作用的实现可能与维持神经元线粒体功能有关,通络救脑注射液可促进该作用的发挥。

通络救脑注射液对脑微血管内皮细胞活性影响的特征

目的:观察通络救脑注射液对培养的正常及缺血脑微血管内皮细胞的活性影响,揭示其通络作用的效应靶点与特征。方法:原代培养大鼠脑皮质微血管内皮细胞,传至第三代,分为正常及拟缺血组,采用培养基氧糖剥夺(OGD)法建立拟缺血模型。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法测定不同浓度的通络救脑注射液对正常及OGD内皮细胞的活性影响。结果:通络救脑注射液作用于正常脑微血管内皮细胞,与未加药组比较,小剂量药物抑制细胞活性趋势,大剂量促进细胞活性趋势,剂量总趋势呈反抛物线形;通络救脑注射液作用于OGD组脑微血管内皮细胞,小剂量范围促进内皮细胞的增殖活性,呈显著和极显著差异,而大剂量组则抑制细胞活性,剂量总趋势呈抛物线形。结论:通络救脑注射液对正常及缺血脑微血管内皮细胞具有双向调节作用,药物剂量与细胞增殖活性呈非线性关系。大剂量与小剂量可能是不同的作用机制,反映了中药复方药效的多维性。

鹌鹑高血尿酸高甘油三酯血症模型塑造

目的和方法 :建立一种与人类代谢途径相似的高血尿酸并高甘油三酯血症动物模型。鹌鹑随机分为 3组 ,除空白对照组外 ,模型Ⅰ组以 15g·kg-1·d-1的酵母食饵喂饲鹌鹑 ,Ⅱ组以 10g·kg-1·d-1的酵母食饵喂饲鹌鹑 ,动态检测血清尿酸 (UA)、甘油三酯 (TG)、胆固醇 (TC)、尿素氮 (BUN)、血糖 (GLU)、黄嘌呤氧化酶 (XOD)含量。结果 :模型Ⅰ组 7d后血尿酸水平开始升高 ,第 2、3、4、5周血UA水平显著高于空白对照组 (P <0 0 5 ,P <0 0 5 ,P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;第 3周血TG水平显著高于空白对照组 ,持续至 5周 ,血BUN含量与空白对照组比差异不显著 ;GLU及TC可见一过性升高。模型Ⅱ组动物血UA水平亦于第 2周升高 ;TG于第 4周显著高于空白对照组 ,但持续时间短 ;血BUN于第 2周和第 3周显著高于空白组 (P <0 0 5 )。结论 :以 15g/kg酵母喂饲鹌鹑 ,可建立高血尿酸高甘油三酯模型 ,以进行尿酸与血脂代谢交互紊乱的药理与病理研究。

锁阳乙酸乙酯提取物的雌激素样作用研究

雌激素提高学习记忆能力的功能已被广泛承认,前期实验证实锁阳乙酸乙酯提取物(ECS)可表现出雌激素样作用,提高去卵巢大鼠的学习记忆能力及血清E2水平,对Aβ损伤SK-N-SH细胞有一定的保护作用。为了进一步研究ECS的雌激素样作用机制,拟在小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro2A)上探寻ECS对学习记忆相关蛋白突触素蛋白synaptophysin和环磷腺苷效应元件结合蛋白表达影响。采用CCK8法测定ECS对小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro2A)细胞活力的影响。将小鼠神经母细胞瘤细胞分为正常组、DMSO组、ECS组、Tamoxifen组、Tamoxifen+ECS组;正常组、ECS组、ECS+G15组和正常组、DMSO组、ECS组、PD98059组、PD98059+ECS组。采用Western blot法测定synaptophysin,p-creb蛋白表达情况。实验表明锁阳乙酸乙酯提取物可促进synaptophysin,P-CREB表达,ER受体竞争性拮抗剂Tamoxifen可降低synaptophysin表达,对ECS促进synaptophysin表达无显著影响。GPR30受体特异性阻断剂G15可显著降低ECS促进synaptophysin表达。p-CREB上游Erk1/2-MAPK通路的阻断剂PD98059可显著抑制ECS上调p-CREB表达,结合前期实验结果,我们认为ECS可与GPR30结合通过MAPK通路促进学习记忆相关蛋白synaptophysin表达。

金银花对病毒性心肌炎小鼠的保护作用及其机制

目的:研究中药金银花对柯萨奇B3(CVB3)病毒性心肌炎小鼠心肌的保护作用。方法:将BALB/c小鼠随机分为正常对照组,模型组,金银花低剂量组、金银花高剂量组,灌胃给药3周。各组于CVB3感染后第7、14、21天分批处死,取心脏做组织病理学检查,同时分别用黄嘌呤氧化酶法和硫巴比妥酸法测血清、丙二醛(MDA)含量与心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性,比较各组小鼠在第7、14、21天心肌组织检测的SOD活性和MDA测定值。结果:高剂量组、低剂量组在第14天、21天小鼠活性均明显高于病毒对照组,MDA含量明显低于病毒对照组(P<0.05);高剂量组、低剂量组在第21天血清SOD活性和MDA含量基本恢复正常;各组小鼠在第7、14、21天心肌组织检测的SOD活性和MDA测定值均出现不同程度的变化,各中药组小鼠心肌炎症性病理变化均明显减轻。结论:金银花能减轻CVB3感染小鼠氧自由基损伤,对VM小鼠心肌具有保护作用。

不同脑微血管内皮细胞条件培养液抗缺血及再灌神经元损伤的比较

目的:通过乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的检测,观察解毒通络药物干预后的脑微血管内皮细胞条件培养液(conditioned medium of cerebral microvascular endothelial cells,CMECs-CM)特征及其抗缺血及再灌皮质神经元损伤的效应,探讨脑微血管内皮细胞(cerebral microvascular endothelial cells,CMECs)调控神经元功能的机制。方法:通络救脑注射液(Tongluo Jiunao Injection,TLJNI)作用于正常、缺血和缺血再灌三种培养状态的大鼠CMECs,分别收集有药物干预及无干预的三对无血清内皮细胞条件培养液,并测定其LDH值。同步原代培养大鼠脑皮质神经元,亦分为正常、缺血、缺血再灌三组,用低(10%)、中(50%)、高(100%)三种浓度的各类CMECs-CM分别作用上述三种培养状态的神经元,测定其LDH漏出率。结果:比较TLJNI干预后的CMECs-CM与无干预的CMECs-CM中LDH漏出值,CMECs缺血组与缺血再灌组经药物干预后均明显降低(P<0.01)。对于缺血神经元,缺血内皮细胞条件培养液(conditioned medium of ischemic CMECs,Is-CM)高浓度(100%)和TLJNI干预后的缺血内皮细胞条件培养液(conditioned medium of ischemic CMECs with drug treatment,IsT-CM)高浓度(100%)作用后表现为增加LDH漏出率(P<0.01),而低浓度10%的IsT-CM则降低LDH漏出率(P<0.05);对于缺血再灌神经元,与对照组比较,各类CMECs-CM作用后均能降低神经元LDH漏出率(P<0.05或P<0.01)。比较每种条件液相邻浓度间的效应差异,均以10%或50%的CM降低损伤为佳,正常内皮细胞条件培养液(conditioned medium of normal CMECs,N-CM)及缺血再灌内皮细胞条件培养液(conditioned medium of ischemic/reperfusional CMECs,Rp-CM)组间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);对于正常神经元,各类CMECs-CM作用后均增加了神经元LDH漏出率(P<0.05或P<0.01)。比较每种条件液相邻浓度间的效应差异,N-CM组间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:TLJNI能够防御CMECs缺血及缺血再灌的损伤,可以通过内皮细胞介导发挥抗缺血及缺血再灌神经元损伤的效应。提示CMECs-CM及TLJNI干预后的CMECs-CM均存在着抗缺血再灌神经元损伤的活性物质。

菊苣胶囊对糖尿病复合高脂兔血糖血脂及血尿酸的影响

采用四氧嘧啶静脉注射合高脂食饵的复合兔模型，观察菊苣胶囊对高血糖、高血脂模型兔血糖、血脂及血尿酸的影响。结果发现，菊苣胶囊在连续口服给药时，可降低模型动物第２周、第４周、第８周时空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇水平，同时降低第４周、第８周时血尿酸水平。表明菊苣具有改善代谢紊乱的多方面作用。

脑卒中后抑郁状态模型大鼠学习和记忆水平的Morris水迷宫测定

目的:观察脑卒中后抑郁状态模型大鼠学习和记忆水平的变化。方法:实验于2004-01/04在北京中医药大学基础医学院科研中心实验室进行。取雄性Wistar大鼠36只随机分为正常组、脑卒中组、抑郁组各12只。正常组大鼠不干预,脑卒中组大鼠首先制造局灶脑缺血,抑郁组大鼠在局灶脑缺血模型基础上复制大鼠脑卒中后抑郁状态模型。以蔗糖水消耗量进行行为学评价,以OPEN-FIELD测定直立活动和水平活动得分,以Morris水迷宫测试评价各组大鼠其学习和记忆水平。结果:36只大鼠均进入结果分析。①蔗糖水消耗量:脑卒中组大鼠[(23.51±3.42)g]低于正常组[(26.13±3.80)g],但差异无统计学意义(P>0.05);抑郁组[(19.85±3.06)g]低于正常组,差异有非常显著性意义(F=10.10,P<0.01)。②水平和直立活动得分:抑郁组较脑卒中组得分显著降低[(12.25±3.60,7.08±1.73)比(26.00±6.78,15.83±4.37),P<0.01]。③Morris水迷宫学习成绩:随着学习时间的延长,各组平均逃避潜伏期均显著下降,但抑郁组下降趋势较正常组和脑卒中组缓慢。第3,4天抑郁组平均逃避潜伏期[(13.78±4.45),(10.49±4.99)s]较正常组[(8.09±5.40),(6.18±2.90)s]和脑卒中组显著延长[(7.53±4.42),(7.37±2.41)s,P<0.01,P<0.05]。

小鼠高尿酸高甘油三酯血症复合模型建立及机理探讨

目的 建立一种高尿酸血症伴发高甘油三酯血症的动物模型 ,并初步探讨其发病机理。方法 通过同时给予C57BL/ 6小鼠尿酸和尿酸酶抑制剂 ,3周后分析其血尿酸和血脂水平。结果 3周后小鼠血尿酸和甘油三酯水平均显著升高。结论 表明小鼠高尿酸伴发高甘油三酯血症模型塑造成功 ,小鼠血尿酸的升高同时伴有肾功能的改变 。

一种新型大鼠结肠纵行肌细胞分离培养方法的建立

目的对大鼠结肠纵行肌细胞分离培养的方法进行改进,建立一种取材方便,纯度高的新型大鼠结肠纵行肌细胞的原代分离培养方法,并观察乙酰胆碱和去甲肾上腺素对结肠纵行肌细胞的作用,为结肠纵行肌生理、病理的研究提供细胞模型。方法取Wistar大鼠结肠,从外侧刮去外膜层,剥离外膜下结肠纵行肌,消化后过滤所剩组织进行贴块培养。观察乙酰胆碱和去甲肾上腺素对纵行肌细胞的作用,用NTS-Elements BR3.60分析软件进行分析。结果经α-SM-actin免疫组织化学染色确定培养的细胞为平滑肌细胞,且纯度高;乙酰胆碱对大鼠结肠纵行肌细胞具有收缩作用,当浓度为5.5×10-1μmol.L-1时,收缩作用最强。去甲肾上腺素对纵行肌细胞具有舒张作用,当浓度为4.86×10-2mmol.L-1时,舒张作用最强。结论从结肠外膜分离肠纵行肌层,消化后过滤,所剩组织进行贴块培养,此方法简便易行、纯度高,且对乙酰胆碱和去甲肾上腺素反应良好。

三七总皂苷对拟缺血损伤脑微血管内皮细胞PLA2G4A表达及其下游产物的影响

目的:观察三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)对拟缺血损伤脑微血管内皮细胞胞浆型磷脂酶A2IVA(phospholipase A2 group IVA,PLA2G4A)表达及其功能的影响。方法:培养大鼠原代脑微血管内皮细胞,氧糖剥夺法制备拟缺血模型,用三七总皂苷及PLA2G4A抑制剂进行干预,通过RT-PCR和Western blotting法检测各组PLA2G4A基因及蛋白表达水平,ELISA法检测各组花生四烯酸(arachidonic acid,AA)、20-羟二十烷四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE)、血栓素A2(thromboxanea2,TXA2)/前列环素(prostaglandin I2,PGI2)表达水平。结果:三七总皂苷可显著下调PLA2G4A的基因和蛋白表达,对AA、20-HETE、TXA2/PGI2也有下调作用。结论:三七总皂苷可以下调拟缺血损伤脑微血管内皮细胞PLA2G4A及其下游产物的表达,这可能是三七总皂苷在脑缺血损伤中发挥化瘀通络作用的机制之一。

菊苣提取物amyrin对家兔主动脉平滑肌细胞膜微粘度的影响

目的观察菊苣提取物αａｍｙｒｉｎ对高糖高脂环境中家兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）膜微粘度及过氧化脂质（ＬＰＯ）含量的影响。方法采用两种离体方法对比观察，即以家兔灌服该提取物后获取的含药物血清加至细胞培养基中的血清药理学方法和将提取物直接加至培养基中的直接体外给药法。结果两种方法给药均可降低高脂高糖模型细胞膜微粘度、改善细胞膜流动性，降低培养液中ＬＰＯ含量；两者之间作用强度无明显差异。结论该提取物具有一定的对抗ＳＭＣ高糖高脂损伤的药理活性；且在体内外对ＳＭＣ膜流动性作用相似；可能是菊苣防治糖尿病大血管并发症的重要组分之一。

菊苣正己烷提取物药理活性研究

从菊苣（ＨｅｒｂａＣｉｃｈｏｒｉ）提取到一种白色结晶，该成分可降低四氧嘧啶模型小鼠血糖及血清甘油三酯水平，对抗高糖高脂血清导致的兔主动脉平滑肌细胞损伤，改善平滑肌细胞膜微粘度，降低培养液中过氧化脂质浓度。

菊苣提取物对高脂模型小鼠肝脂水平和NO的影响

目的 :进一步探讨菊苣提取物对模型动物肝脂水平的影响。方法 :将快速塑造大鼠高脂血症模型的方法用于小鼠 ,塑造了小鼠高脂血症引起的肝高脂模型。结果 :高脂 1 5d时 ,血清TC水平明显升高 ,脂质在肝内蓄积 ,致使肝内TC、TG、NO、LPO明显升高 ,SOD活性则明显降低。而不同剂量菊苣可明显减少由高脂饮食引起的小鼠肝脂质蓄积 ,降低肝TC、TG、NO、LPO水平 ,提高SOD活性。结论 :菊苣对高脂饮食引起的高脂血症的改善作用 ,可能与提高脂质代谢最主要的器官肝脏脂代谢功能有关。

通络救脑注射液对大鼠脑微血管内皮细胞活性及其条件培养液影响的初步研究

目的:观察通络救脑注射液对正常及拟缺血大鼠脑微血管内皮细胞的活性影响,并初步探讨细胞条件培养液内蛋白分泌的时效特征、奠定可溶性蛋白深入分析的技术基础。方法:通络救脑注射液作用于正常及拟缺血脑微血管内皮细胞之后,用MTS/PMS比色分析法测定细胞的活性,Bradford法测定细胞培养液总蛋白含量,比色分析法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)漏出值,同步观察了5个时间点的细胞活性及条件培养液总蛋白量及LDH释放量。结果:通络救脑注射液能够提高拟缺血细胞的活性,且抑制LDH释放量;正常组分泌总蛋白量3h达到高峰,此时细胞活性最佳,LDH释放量亦少。拟缺血组分泌总蛋白量是6h达到高峰,此时LDH释放量最少,但细胞活性与3h比较有所下降。结论:通络救脑注射液对拟缺血细胞损伤具有保护作用;以3h至6h的细胞条件培养液做为收集目标是研究条件培养液的最佳时间段。