蝙蝠草多糖的提取和分离及其活性测定

目的提取和分离纯化蝙蝠草多糖,并进行结构分析与活性测定。方法对蝙蝠草多糖进行提取和分离纯化,得到均一组分蝙蝠草多糖02-2(christia vespertilionis polysaccharides 02-2,CP 02-2)。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼[1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH]自由基清除、小鼠巨噬细胞增殖、吞噬能力和产生NO等试验方法对CP 02-2的活性进行研究。结果 CP 02-2对浓度0.1 mmol·L^(-1)DPPH溶液的自由基清除率为28.99%,对小鼠巨噬细胞RAW264.7的增殖、吞噬能力和产生NO的能力均具有促进作用,与空白对照组有显著性差异(P<0.01),且当质量浓度为1 500 mg·L^(-1)时,活性最大。结论蝙蝠草多糖CP 02-2具有一定的药理活性。

药物性耳聋的治疗

问：我是一位乡村教师，两个月前因急性中耳炎去乡卫生所，大夫让我用新霉素液滴耳，疗效很好。没过几天我感觉耳鸣，故自作主张地用了一段时间的新霉素液。近几天，我发现听力不好。请问：像我这种情况是中耳炎引起的，还是药物引起的?该怎样治疗?

2ʹ,4ʹ-二羟基-3ʹ-甲基-3-甲氧基查耳酮上调p21抑制人肝癌HepG2细胞的生长

目的探讨2ʹ,4ʹ-二羟基-3ʹ-甲基-3-甲氧基查耳酮(C20)对人肝癌HepG2细胞的体外抗肿瘤作用及其潜在的作用机制。方法通过CCK-8法、集落形成实验、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色法检测C20对人肝癌HepG2细胞增殖的影响;通过彗星实验检测C20(10μmol·L^(−1))对HepG2细胞DNA损伤的影响;通过流式细胞术检测C20(5、10μmol·L^(−1))对HepG2细胞周期阻滞的影响;通过Hoechst染色和流式细胞术检测C20(5、10μmol·L^(−1))对HepG2细胞凋亡的影响。借助Western blotting法检测C20(5、10μmol·L^(−1))处理对HepG2细胞中与凋亡、DNA损伤、细胞周期阻滞相关蛋白表达水平的调控作用。结果与对照组比较,C20显著抑制HepG2细胞的活力(P<0.001),给药48 h的半数抑制浓度(IC50)为7.937μmol·L^(−1);5μmol·L^(−1) C20能够显著抑制HepG2细胞的集落形成能力(P<0.01);EdU染色结果显示5、10μmol·L^(−1)的C20能够抑制人肝癌HepG2细胞的增殖能力;5、10μmol·L^(−1)的C20显著诱导HepG2细胞G2/M期阻滞(P<0.001);5、10μmol·L^(−1)的C20显著促进HepG2细胞凋亡(P<0.001),并显著上调Caspas-3、Caspase-9以及PARP的剪切水平(P<0.01);10μmol·L^(−1)的C20能够诱导HepG2细胞发生DNA损伤,并且5、10μmol·L^(−1)的C20显著上调γH2AX、p21的蛋白水平(P<0.01)。结论C20能够造成HepG2细胞发生DNA损伤,上调p21蛋白水平,导致细胞G2/M期阻滞,并进一步诱发凋亡,发挥体外抗肝癌作用。

没药倍半萜化合物M36抑制人肝癌细胞生长的作用

目的:针对从没药Myrrha中分离得到的倍半萜化合物M36对人肝癌Hep G2细胞的抗肿瘤活性开展观察和研究。方法:分别加入不同浓度M36(0、2、4、6、8、10μmol·L^(-1))干预Hep G2细胞。首先采用噻唑蓝(MTT)比色法、集落形成实验、Ed U增殖实验来检测M36对人肝癌Hep G2细胞的增殖影响。再利用Hoechst染色、流式细胞术和蛋白免疫印迹法研究M36对人肝癌Hep G2细胞凋亡的影响。通过采用吖啶橙染色和蛋白免疫印迹法检测M36是否激活人肝癌Hep G2细胞发生自噬。最后借助蛋白免疫印迹法来检测相关通路的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,M36能显著抑制人肝癌Hep G2细胞增殖(P<0.01),给药处理48 h的半数抑制浓度(IC_(50))为5.03μmol·L^(-1),且具有浓度和时间依赖性。M36还能够诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡和自噬。8μmol·L^(-1)M36作用于Hep G2细胞48 h,其细胞凋亡率为(42.03±9.65)%(P<0.01)。与空白组比较,M36组(4、8μmol·L^(-1))Hep G2细胞孵育48 h,剪切的聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(cleaved-PARP)蛋白水平显著上调(P<0.01)。吖啶橙染色结果显示,与空白组比较,M36组(4、8μmol·L^(-1))Hep G2细胞孵育48 h自噬被显著激活(P<0.01),并从微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白水平上调中得到进一步验证(P<0.01)。蛋白免疫印迹实验结果显示,与空白组比较,M36组磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)及其下游核转录因子c-Jun、p-c-Jun蛋白水平均发生明显上调(P<0.05,P<0.01),说明其作用机制可能与上调MAPK信号通路有关。结论:没药倍半萜化合物M36能够抑制人肝癌细胞增殖,促进其凋亡和自噬,其机制可能与激活MAPK信号通路有关。

一种新型查耳酮衍生物C13通过ErbB4/PI3K/AKT信号通路抑制人胃癌细胞的生长

3ʹ-羟基-4ʹ-甲氧基-2-羟基-5-溴查耳酮(以下简称C13)是本课题组对龙血竭抗肿瘤活性化合物DHMMF进行结构修饰过程中获得的一个新型查耳酮衍生物。本研究探讨了C13对人胃癌HGC-27、AGS细胞增殖、凋亡的影响及其潜在的作用机制。首先采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)、集落形成实验、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(5-ethynyl-2ʹ-deoxyuridine,EdU)染色法发现C13能显著抑制人胃癌HGC-27、AGS细胞的增殖能力。采用流式细胞术和免疫印迹法检测发现C13能诱导人胃癌HGC-27、AGS细胞发生凋亡,并上调剪切的聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(cleaved-poly ADP-ribose polymerase,cleaved-PARP)的蛋白水平。转录组测序分析结果显示C13可能通过调控人表皮生长因子受体4/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(Erb-B2 receptor tyrosine kinase 4/phosphoinositide 3-kinase/AKT,ErbB4/PI3K/AKT)信号通路发挥抗胃癌作用。最后免疫印迹实验结果表明,C13处理后能下调人胃癌细胞中ErbB4总蛋白及磷酸化水平,并能够抑制其下游PI3K及AKT蛋白磷酸化水平,进一步验证了转录组测序结果。综上所述,新型查耳酮衍生物C13能够显著抑制人胃癌HGC-27、AGS细胞增殖并诱导其发生凋亡,其机制可能与下调ErbB4/PI3K/AKT信号通路有关。本研究能够为胃癌治疗提供一个候选研究药物。

槐耳抗肿瘤作用研究进展

槐耳在中国已经广泛应用于癌症的辅助治疗,基础研究与临床应用已经证实其抗癌效果,包括对肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌等具有一定的疗效,其主要机制涉及抑制肿瘤细胞的生长与增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制血管新生、抑制肿瘤细胞的侵袭与转移、调节多种癌基因与抑癌基因的表达、提高机体的免疫能力、逆转肿瘤细胞的耐药性等。该文对近年来槐耳抗肿瘤作用最新的研究进展进行总结,以期对槐耳抗肿瘤作用深入研究和临床应用提供参考。

槐耳清膏抑制人前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭作用及其机制研究

该研究探讨槐耳清膏对人前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭的抑制作用及其相关分子机制。采用CCK-8法检测槐耳清膏对PC3细胞的增殖抑制作用。采用流式细胞术分析槐耳清膏给药后PC3细胞凋亡及细胞周期的变化。采用细胞划痕实验及Transwell侵袭实验分析给药后PC3细胞侵袭与迁移能力的变化。通过Western blot法,检测槐耳清膏给药后与侵袭迁移相关的EMT蛋白标志物表达水平的变化及MAPK信号通路中关键蛋白磷酸化水平的变化。结果显示,槐耳清膏可以明显抑制人前列腺癌PC3细胞的增殖。槐耳清膏8 g·L^(-1)作用于PC3细胞48 h后,细胞凋亡率较对照组明显升高,且细胞发生明显的S期阻滞。槐耳清膏给药后可以明显降低PC3细胞的侵袭与迁移能力,并且能够下调N-cadherin和TCF8/ZEB1的表达水平和上调E-cadherin的蛋白表达水平,表明槐耳清膏能够促进PC3细胞MET的发生,同时还发现MAPK信号通路中的关键蛋白JNK和ERK的磷酸化水平明显下降。因此,槐耳清膏能够抑制人前列腺癌PC3细胞增殖和迁移侵袭能力,这可能与其调控EMT及抑制MAPK信号通路有关。

中药诱导细胞周期阻滞抗肿瘤研究进展

癌症患病率和死亡率逐年上升,已成为当今世界上造成死亡的主要原因之一。癌症的诱因多种多样,遗传、辐射、致癌物等都可能诱发癌症,细胞周期调控的异常也是诱因之一。细胞周期是一个复杂的事件序列,细胞通过该事件重复其内容并分裂。细胞周期有高度的组织性和条理性,以确保遗传物质的完整性。该过程依赖于许多基因和蛋白的共同调节,当这些物质发生改变时,细胞周期出现异常,导致细胞增殖失去管控,细胞凋亡被抑制,最终导致肿瘤的发生。目前,肿瘤的治疗手段有传统的手术切除、放射治疗和化学药物治疗及靶向治疗等。中药来源广泛、不良反应小,是中医药文化的瑰宝,值得进一步地研究和开发。越来越多的研究发现,多种中药能够通过诱导细胞周期阻滞发挥抗肿瘤作用,从而提升肿瘤中晚期患者的生存质量,延长患者生存期。该文首先介绍了细胞周期各时期的特点和相关调控因子,列举了细胞周期异常导致肿瘤发生的临床和实验实例,接着综述了国内外靶向细胞周期抗肿瘤热点药物,如周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂、细胞分裂周期因子25(CDC25)抑制剂、ATR丝氨酸/苏氨酸激酶(ATR)抑制剂和细胞周期检查点激酶1(CHK1)抑制剂等,最后从细胞周期G0/G1期、S期和G2/M期3个方面切入,总结了近些年来中药通过诱导细胞周期阻滞发挥抗肿瘤作用的相关研究,以期为中药抗肿瘤作用研究提供一定的参考。

槐耳清膏通过激活自噬抑制人肝癌细胞SK-HEP-1增殖

该研究探讨槐耳清膏对人肝癌细胞SK-HEP-1自噬的影响及此影响在细胞增殖中发挥的作用。采用CCK-8法检测了槐耳清膏不同作用浓度以及不同作用时间下对人肝癌细胞SK-HEP-1增殖的影响。采用吖啶橙染色法检测了槐耳清膏给药对SK-HEP-1细胞中自噬溶酶体形成的作用。采用免疫荧光法检测了槐耳清膏给药后SK-HEP-1细胞中自噬标志物LC3的表达及分布情况。此外,还借助免疫印迹法检测了槐耳清膏给药后SK-HEP-1细胞中LC3的表达情况。最后,该研究采用CCK-8法分析了槐耳清膏与自噬抑制剂bafilomycin A1联合给药以及槐耳清膏单独给药对SK-HEP-1细胞增殖的作用。结果显示,槐耳清膏能够显著抑制人肝癌细胞SK-HEP-1的增殖,并且具有明显的时间与浓度依赖性。吖啶橙染色实验结果表明槐耳清膏能够明显促进细胞中自噬溶酶体的生成。免疫荧光及免疫印迹实验结果显示,槐耳清膏给药作用后细胞内LC3绿色荧光颗粒数量和亮度明显增高,而且自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的表达量也明显上升,这部分结果提示槐耳清膏能够明显激活SK-HEP-1细胞自噬的发生。此外,笔者还发现自噬被抑制后SK-HEP-1细胞对槐耳清膏给药的敏感性显著下调。因此,自噬活化参与了槐耳清膏对人肝癌细胞SK-HEP-1增殖的抑制作用。

槐耳蛋白聚糖TPG-1抑制人肝癌SK-HEP-1细胞生长的机制

目的:蛋白聚糖TPG-1具有良好的抗肝癌活性,本研究进一步探究蛋白聚糖TPG-1抗肝癌的分子作用机制。方法:用槐耳蛋白聚糖TPG-1(0,0.05,0.1,0.25,0.5,1 g·L^(-1))处理人肝癌SK-HEP-1细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测槐耳蛋白聚糖TPG-1对SK-HEP-1细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测TPG-1对SK-HEP-1细胞凋亡的影响。对经TPG-1处理过的人肝癌SK-HEP-1细胞进行基因芯片检测分析,探讨TPG-1抗肝癌的分子作用机制。结果:与空白组比较,槐耳蛋白聚糖TPG-1能够显著抑制人肝癌SK-HEP-1细胞的增殖能力(P<0.01)。TPG-1(1 g·L^(-1))作用于SK-HEP-1细胞48 h,SK-HEP-1细胞凋亡率显著增加(P<0.01),且TPG-1给药能够显著促进细胞凋亡重要执行者含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3和Caspase-7的剪切水平(P<0.01)。与空白组比较,TPG-1(0.1 g·L^(-1))能够抑制SK-HEP-1细胞的迁移能力(P<0.05)。基因芯片检测分析结果显示,TPG-1处理后,SK-HEP-1细胞中差异表达基因有971个,其中表达上调基因486个,表达下调基因485个。基因本体(GO)和通路(Pathway)分析结果显示表达差异基因的功能主要涉及白细胞介素-6(IL-6)生物合成、抗原加工与呈递、超氧化物歧化酶活性、丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶(MAPKKK)级联反应的正调控、自然杀伤(NK)细胞趋化、趋化因子生物合成等。此外,表达差异基因所涉及的信号通路主要包括核苷酸寡聚化结构域(NOD)样受体信号通路,凋亡,Toll样受体信号通路,维甲酸诱导基因-Ⅰ(RIG-Ⅰ)样受体信号通路,T细胞受体信号通路及趋化因子信号通路等。蛋白免疫印迹法结果显示,TPG-1(1 g·L^(-1))能够显著激活SK-HEP-1细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路(P<0.01)。结论:槐耳蛋白聚糖TPG-1能够抑制人肝癌SK-HEP-1细胞增殖及迁移能力并促进其发生凋亡,MAPK信号通路的激活可能与TPG-1发挥抑制人肝癌SK-HEP-1细胞生长作用有关。

槐耳清膏对人前列腺癌VCaP细胞增殖的作用

目的:观察槐耳清膏对人前列腺癌VCaP细胞自噬的影响及对核纤层蛋白B;(Lamin B;)表达的调控作用,并探讨其在VCaP细胞增殖中发挥的作用。方法:采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测0,2,4,6,8,10 g·L^(-1)槐耳清膏在不同时间下对人前列腺癌VCaP细胞的增殖抑制作用。采用吖啶橙染色法分析槐耳清膏给药对VCaP细胞中自噬溶酶体形成的影响。借助蛋白免疫印迹法(Western blot)检测槐耳清膏给药后细胞中与自噬密切相关的蛋白微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC3),自噬相关蛋白3(Atg3),自噬相关蛋白5(Atg5),自噬相关蛋白7(Atg7)的表达。采用CCK-8法检测槐耳清膏与自噬抑制剂(Bafilomycin A1)联合给药及槐耳清膏单独给药对细胞增殖的作用。通过Western blot检测槐耳清膏对人前列腺癌VCaP细胞中Lamin B;表达的影响,并采用RNA干扰技术探究Lamin B;在槐耳抗人前列腺癌VCaP细胞增殖中的作用。结果:与空白组比较,槐耳清膏能抑制人前列腺癌VCaP细胞的增殖(P<0.01),且呈时间与浓度依赖性。槐耳清膏给药后可促进VCaP细胞中自噬溶酶体的生成。与空白组比较,槐耳清膏能上调VCaP细胞中与自噬进程密切相关的蛋白LC3-Ⅱ,Atg3,Atg5,Atg7表达水平(P<0.05),槐耳清膏能够诱导VCaP细胞自噬的发生。进一步研究发现抑制自噬能够降低人前列腺癌VCaP细胞对槐耳清膏的敏感性(P<0.05)。与空白组比较,槐耳清膏给药能够抑制人前列腺癌VCaP细胞中Lamin B;蛋白表达(P<0.01),下调Lamin B;蛋白表达,在一定程度上也能够减弱VCaP细胞对槐耳清膏的敏感性(P<0.01)。结论:自噬活化和Lamin B;表达下调可能参与了槐耳清膏对人前列腺癌VCaP细胞的增殖抑制作用,能够为槐耳临床应用提供一定的理论基础。

缺血性脑中风的发病机制及其常用治疗中药研究进展

脑中风目前已成为世界上第二大致死疾病,其中以缺血性脑中风发病占主导地位。因其具有发病迅速、病情复杂等特点,故缺血性脑中风也是造成残疾的主要神经系统疾病。缺血性脑中风主要起源于动脉粥样硬化,进而引发脑组织能量代谢障碍、兴奋性氨基酸毒性作用、氧化/硝化应激、炎症反应、细胞凋亡、细胞自噬等一系列病理过程。传统单味中药、复方及制剂因其具有多成分、多靶点的组成和治疗特点,可作用于缺血性脑中风不同的发病阶段。该文对近年来缺血性脑中风的发病机制及常用治疗中药最新研究进展进行两方面总结,以期对缺血性脑中风的进一步研究及临床治疗提供参考。

龙血竭中双黄酮化合物HIS-4对人肝癌HepG2和SK-HEP-1细胞的抗肿瘤作用研究

抗肝癌药物的研究吸引着越来越多的人关注。天然产物中的有效成分是癌症治疗药物的重要来源。此前从龙血竭中分离得到一种双黄酮化合物HIS-4。采用MTT法、Hoechst染色和流式细胞仪分析HIS-4对人肝癌HepG2和SK-HEP-1细胞增殖和凋亡的影响。通过划痕试验和Transwell侵袭试验研究HIS-4对人肝癌HepG2和SK-HEP-1细胞迁移和侵袭能力的影响。此外,采用MTT法、流式细胞术、Hoechst染色、划痕、侵袭试验以及微管形成试验来探讨HIS-4对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管形成的影响。通过免疫印迹法研究HIS-4对HepG2和SK-HEP-1细胞信号通路的调控作用。该研究发现HIS-4能够抑制人肝癌HepG2和SK-HEP-1细胞的增殖,诱导其凋亡以及能抑制HepG2和SK-HEP-1细胞的迁移和侵袭。此外,HIS-4能有效抑制血管生成。从作用机制上来说,HIS-4发挥抗肝癌活性可能与MAPK信号通路上调和mTOR信号通路下调有关。因此,HIS-4可能是一个治疗肝癌的先导结构或候选药物。

槐耳清膏抑制人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞生长和转移及其作用机制研究

探讨槐耳清膏对人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞生长和转移的抑制作用及其潜在的作用机制。采用细胞增殖毒性试验(MTT法)检测槐耳清膏对NCI-H1299细胞增殖的影响。采用流式细胞术检测槐耳清膏给药后对NCI-H1299细胞凋亡率、细胞周期以及细胞内活性氧(ROS)水平的影响。采用细胞划痕试验研究槐耳清膏给药后对NCI-H1299细胞迁移能力的影响。此外,借助免疫印迹法检测槐耳清膏给药后与凋亡和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程相关的蛋白以及MAPK信号通路中的关键蛋白表达水平的变化。研究结果显示,槐耳清膏能够抑制人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞的增殖,而且诱导细胞周期阻滞在S期。槐耳清膏能够通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达促进NCI-H1299细胞凋亡的发生。此外,槐耳清膏给药能够升高NCI-H1299细胞内ROS的含量从而诱导细胞铁死亡的发生。EMT在癌症转移中起着重要作用。槐耳清膏给药后能够降低NCI-H1299细胞的迁移能力,并且能够下调间质标志物TCF8/ZEB1,N-cadherin,β-catenin的蛋白水平进而抑制NCI-H1299细胞EMT进程。该研究还揭示在人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞中槐耳清膏能够抑制MAPK信号通路,这可能是槐耳清膏抑制NCI-H1299细胞生长和转移的机制之一。该项工作为槐耳抗肺癌作用研究提供了新的内容,也为槐耳临床治疗肺癌提供了新的理论依据,对后续深入研究槐耳抗肿瘤作用机制具有一定的参考意义。

龙血竭抗肿瘤作用研究进展

作为我国的传统中药,龙血竭具有活血化瘀、软坚散结、收敛止血、清肿止痛、调经理血等功效,被誉为"活血圣药",临床上其已被广泛应用于治疗多种疾病。随着对龙血竭研究的深入,其在抗肿瘤方面的药用价值不断显现。现代药理研究表明,龙血竭发挥抗肿瘤作用主要是通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、诱导DNA损伤和细胞周期阻滞、诱导肿瘤细胞衰老、诱导肿瘤细胞自噬、抑制肿瘤细胞的转移能力和血管生成以及逆转肿瘤细胞多药耐药性等机制来实现的。该文重点总结了龙血竭提取物及其化学成分在抗肿瘤方面的研究进展,以期为龙血竭的深入研究和开发利用提供新的参考。

龙血通络胶囊对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:本文探讨过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞损伤后,龙血通络胶囊的神经保护作用及其潜在作用机制。方法:以500μmol·L-1H2O2构建PC12细胞损伤模型,实验分为空白组,模型组(H2O2,500μmol·L^-1),龙血通络胶囊组(LTC,1,2,4 mg·L^-1)。通过细胞增殖毒性检测(CCK-8),胞内活性氧(ROS)水平,线粒体膜电位水平(JC-1),细胞凋亡率以及蛋白免疫印迹法(Western blot)评价龙血通络胶囊对H2O2诱导PC12细胞损伤的神经保护作用。结果:与空白组比较,模型组的细胞存活率显著降低(P<0.01),ROS水平显著上升(P<0.01),线粒体膜电位水平下降,细胞凋亡率显著升高(P<0.01),剪切的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)水平显著上升(P<0.01)。与模型组比较,LTC组(1,2,4 mg·L^-1)能浓度依赖性升高细胞的存活率(P<0.01),降低ROS水平(P<0.05),维持线粒体膜电位水平,降低细胞的凋亡水平(P<0.01),并显著降低PARP蛋白的剪切水平(P<0.01)。结论:龙血通络胶囊对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有显著的保护作用,其作用机制可能是通过抑制胞内氧化应激,维持线粒体功能,促进DNA修复等途径进而抑制神经细胞凋亡。

肿瘤耐药性产生机制及中药逆转作用的研究进展

恶性肿瘤严重危害人类生命和健康,我国癌症发病率和死亡率逐年上升,攻克肿瘤一直以来都是人类生存的一大难题。化学药物和分子靶向治疗是抗肿瘤临床通用方案,也是首选方案之一,此类药物靶标明确、疗效好,但不良反应大,且肿瘤细胞常常产生耐药性阻碍药效的发挥,从而使肿瘤治疗变得困难,故研究耐药性的产生机制及如何逆转耐药性具有重要的意义。聚焦中药,多年研究发现,其拥有成分复杂、靶点繁多、方组内药味相辅相成、毒性小等居多特点,大量实验研究证明,中药有效成分或其提取部位能够明显抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭,诱导其凋亡、自噬、分化、衰老等。临床上已将中药运用于肿瘤的防护、辅助治疗、后期巩固等,中药研究将为逆转肿瘤细胞耐药性及抑制肿瘤细胞开启不一样的新篇章。已有研究表明,中药与化疗药物联用可逆转肿瘤细胞耐药性,增加化疗药物疗效,现已成为肿瘤治疗的主流趋势。此文就肿瘤细胞由保护性自噬、基因突变、酶系的过高表达、信号通路异常、核糖核酸和相关蛋白表达异常等所产生的耐药性机制,以及从中药中分离出的单体成分、单药或其提取部位及经典抗癌名方逆转肿瘤细胞耐药性的机制进行综述,为进一步研究中药抗肿瘤作用奠定基础。

血竭石油醚提取物对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞的抗肿瘤作用

目的:研究血竭石油醚提取物(SDPEF)对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞增殖、凋亡、体外迁移能力及自噬的影响,并阐明其分子作用机制。方法:采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测SDPEF(0,20,40,60,80 mg·L^(-1))作用24,48,72 h时,对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞体外增殖的影响。借助Hoechst染色实验观察不同浓度的SDPEF作用48 h后对HGC-27和MGC-803细胞凋亡的影响。采用流式细胞术检测不同浓度SDPEF作用48 h,对HGC-27和MGC-803细胞凋亡率的影响。采用细胞划痕实验观察不同浓度SDPEF在不同作用时间点对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞体外迁移能力的影响。借助吖啶橙染色实验检测不同浓度SDPEF对HGC-27和MGC-803细胞自噬的影响。利用蛋白免疫印迹法检测SDPEF作用人胃癌HGC-27和MGC-803细胞48 h后对信号通路相关蛋白表达水平的调控作用。结果:与空白组比较,SDPEF(30 mg·L^(-1))组人胃癌HGC-27和MGC-803细胞的增殖和体外迁移能力明显降低(P<0.05),且具有浓度与时间依赖性;SDPEF(60 mg·L^(-1))还能够诱导人胃癌HGC-27和MGC-803细胞凋亡(P<0.01)和自噬的发生。与空白组比较,SDPEF(60 mg·L^(-1))能够下调磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达(P<0.05,P<0.01),且能够下调磷酸化信号传导与转录激活因子3(p-STAT3)蛋白表达水平(P<0.01),提示SDPEF可能是通过抑制mTOR/STAT3信号通路来抑制人胃癌HGC-27和MGC-803细胞的增殖、迁移并诱导其发生凋亡和自噬。结论:mTOR/STAT3信号通路下调可能参与了SDPEF的抗胃癌作用。该研究能够为血竭抗肿瘤作用研究提供一定的参考。

槐耳上清对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞的抗肿瘤作用研究

探讨槐耳上清(Huaier extract supernatant, HES)对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞增殖、凋亡、自噬和体外迁移能力的影响及其分子作用机制。采用HPLC-MS对HES中的主要成分进行简单初步分析。通过MTT法、集落形成实验、EdU染色法探究HES对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞增殖的影响。利用Hoechst染色法、流式细胞术明确HES对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞凋亡的影响。通过吖啶橙染色法和细胞划痕实验分别研究HES对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞自噬和体外迁移能力的影响。借助Western blot检测HES对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞中与凋亡、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)以及信号通路相关的蛋白表达水平的调控作用。结果显示,HES中主要含有一些极性较大的成分。HES能够明显降低人胃癌细胞的细胞活力,且具有浓度和时间依赖性,给药处理人胃癌HGC-27和MGC-803细胞48 h时,其半数抑制浓度(IC_(50))分别为7.56、10.77 g·L^(-1)。同时,HES能够显著抑制人胃癌细胞的集落形成能力和短期增殖能力。8 g·L^(-1)的HES作用于2种人胃癌细胞72 h,细胞凋亡率分别为62.13%±8.92%和54.50%±3.26%。HES还能够促进人胃癌细胞发生自噬,并削弱人胃癌细胞的体外迁移能力。此外,HES能够上调人胃癌细胞中凋亡标志物PARP的剪切水平和上皮细胞标志物E-cadherin的蛋白水平,并下调p-mTOR、p-S6和p-ERK的蛋白水平。因此,HES是槐耳发挥抗肿瘤作用的有效成分之一,其能够抑制人胃癌细胞的增殖和迁移,并诱导其发生凋亡和自噬,而且mTOR信号和ERK信号可能参与了HES的抗胃癌作用。该研究能够为槐耳的深入研究和临床应用提供新的参考,对进一步推动槐耳的科学开发利用具有重要意义。