Mito-TEMPO对猪精子冷冻保存效果的研究

【目的】筛选最佳的Mito-TEMPO浓度并探究其对猪精子冻后质量、抗氧化能力及线粒体功能的影响,为改善猪精子冷冻保存方法提供参考依据。【方法】在冷冻Ⅰ液中添加0.5、5.0、50.0和500.0μmol/L Mito-TEMPO,通过评估冷冻解冻后各组精子的动力学参数和活率,筛选出适用于猪精液冷冻保存的Mito-TEMPO浓度。检测冷冻解冻后猪精子的质膜完整率、顶体完整率、DNA碎片指数(DFI)、活性氧(ROS)水平、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,以及ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ~Ⅴ含量。【结果】与新鲜组(F组)相比,冷冻解冻后精子的动力学参数和活率显著降低(P<0.05,下同),而添加Mito-TEMPO对冻后精子动力学参数和活率均有不同程度的改善,以50.0μmol/L Mito-TEMPO最有效。与F组相比,冻后猪精子的质膜和顶体完整率、T-AOC及ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ~Ⅴ含量显著降低,CAT和T-SOD活性也显著降低,DFI、ROS水平、MDA含量显著升高。与冷冻对照组(C组)相比,50.0μmol/L Mito-TEMPO组(M组)中精子的质膜完整率、顶体完整率、T-AOC及ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ含量显著升高,DFI、ROS水平、MDA含量显著降低,CAT和T-SOD活性显著提高。【结论】Mito-TEMPO对猪精子具有冷冻保护作用,且Mito-TEMPO的最佳浓度是50.0μmol/L,可通过提高冷冻解冻后猪精子的抗氧化能力和线粒体功能来改善精子质量。

麦角硫因对猪精液常温保存效果的影响

本实验旨在探究麦角硫因(ERG)对猪精子常温保存效果(17℃)的影响,筛选出适合猪精子常温保存的ERG浓度,并分析其抗氧化效果。实验设置对照组和不同浓度的ERG组(猪精液稀释后添加75、150、300、450、600μmol/LERG),检测各组精子的活率和动力学参数,筛选出最适ERG添加浓度和保存天数;之后设置新鲜组、对照组和最佳ERG浓度组,对各组猪精子的质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位(MMP)、DNA碎片指数(DFI)和抗氧化能力进行检测。结果显示:与对照组相比,添加300μmol/L ERG,常温保存2d时精子活率和总活力、线性运动比例、平均路径速度、直线运动速度、曲线运动速度、交叉运动频率和头部摆动振幅等运动学参数均显著提高,因此选用添加300μmol/L ERG保存2 d的精子用于后续实验。与常温保存2 d的对照组相比,添加300μmol/L ERG显著提高了猪精子的质膜完整率、线粒体膜电位、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和总抗氧化能力水平,显著降低了DNA碎片指数、丙二醛和活性氧水平。本研究发现常温保存猪精液中添加ERG可以改善猪精子的品质,最适添加浓度为300μmol/L,最佳保存时间为2 d。

仿生技术在猪人工授精中的应用研究进展

猪人工授精技术是科学养猪的重要手段,对养猪业向规模化、标准化、工业化发展起到重要的促进作用。生产中,仿生技术常应用于公猪的调教、采精、母猪的发情鉴定、输精等环节。该文综述了基于母猪与公猪效应仿生技术下,猪人工授精操作方法、配套用品、器械、设备的改良与发展,猪人工授精仿生技术在促进公猪精液质量、母猪发情、繁殖率提高等方面的应用效果,提出仿生技术存在的主要问题及展望。

海藻糖对猪睾丸组织冷冻保存效果的影响

为探讨添加不同浓度海藻糖对猪睾丸组织冷冻保存效果的影响,将猪睾丸组织分为7个处理组,分别为未冷冻的新鲜对照组、未添加海藻糖的冷冻Control组以及分别添加50、100、200、400和800 mmol/L不同浓度海藻糖的试验组,对冷冻-解冻后的睾丸组织的细胞活率、组织结构形态、细胞凋亡率及活性氧含量等指标进行检测。结果表明:与新鲜组比较,冷冻过程会造成睾丸细胞活率显著下降(P<0.05),细胞内活性氧含量显著上升(P<0.05),组织形态结构被严重破坏(P<0.05)、细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。与未添加海藻糖的冷冻Control组相比,200 mmol/L海藻糖对冷冻-解冻后睾丸组织细胞活率、细胞凋亡及活性氧含量均有显著改善(P<0.05)。100 mmol/L海藻糖组冷冻-解冻后睾丸组织的形态结构、细胞凋亡及活性氧含量与200 mmol/L海藻糖组相比无显著性差异(P>0.05)。此外,800 mmol/L海藻糖组的细胞凋亡率显著高于其他组(P<0.05),细胞活率显著低于其他组(P<0.05)。综上所述,不同浓度海藻糖对猪睾丸组织冻存效果有显著影响,其中200 mmol/L为最适添加量。

不同稀释用水对猪精液常温保存效果的影响

猪人工授精(Artificial insemination,AI)作为提高生猪生产效率最佳的繁殖技术,在猪的繁殖中得到了广泛应用。17℃保存精子的技术因其成本低廉,操作简便,繁殖效率高而被广泛使用。在猪精液的常温保存中,除了要考虑猪精液本身质量、基础营养液和抗生素等因素外,溶解稀释剂所用水也是需要考虑的主要因素。

水蛭素对冷冻前后猪精液中超氧化物歧化酶活性及mRNA表达的影响

课题组前期试验表明,0.08%水蛭素能够显著提高冻后猪精液质量。为研究其作用机理,用含不同浓度(0、0.04%、0.08%、0.12%)水蛭素的稀释液稀释美系长白公猪精液,分别检测平衡后及冻融后精液中超氧化物歧化酶的活性和mRNA表达量的变化。结果表明:(1)不含水蛭素的冷冻稀释液显著降低新鲜猪精液超氧化物歧化酶活性(P<0.05),而含有0.08%水蛭素的冷冻稀释液处理的猪精液超氧化物歧化酶活性分别在平衡组与冷冻组最高(P>0.05);(2)含有0.08%水蛭素的猪精液平衡及冻融后的超氧化物歧化酶mRNA表达量最高,但差异不显著(P>0.05)。总之,添加0.08%水蛭素对冷冻前后猪精液超氧化物歧化酶活性及mRNA表达无显著影响。

口蹄疫O型、A型二价3B表位缺失灭活疫苗在奶水牛的免疫效果观察

为了评价口蹄疫(FMD)O型、A型二价3B表位缺失灭活疫苗在奶水牛临床应用的安全性及免疫效果,本试验选择90~100日龄健康奶水牛犊牛24头,平均分为2个组,试验组接种表位缺失疫苗,在首免后30 d,二免后180 d加强免疫,对照组按照相同的免疫程序接种常规疫苗;在不同时间点采集血清进行口蹄疫O型、A型抗体效价和非结构蛋白3ABC抗体检测,采集食道-咽分泌液(OP)进行口蹄疫病原学检测。结果显示:在抗体平均滴度方面,试验组抗体比对照组高1.4~2.8个滴度,在9个免疫后时间点试验组O型抗体平均滴度全部显著(P<0.05)甚至极显著(P<0.01)高于对照组,7个免疫后时间点试验组A型抗体平均滴度显著(P<0.05)甚至极显著(P<0.01)高于对照组;试验组抗体合格率比对照组高出25%~41%;口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体标记疫苗免疫动物均为阴性。综合分析表明,口蹄疫O型、A型二价3B表位缺失灭活疫苗具有良好的免疫保护效果,在感染抗体水平上也能保证非结构蛋白抗体阴性。本试验为口蹄疫净化和口蹄疫无疫小区、无疫区建设探索可行的方法。

鉴别牛结节性皮肤病病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为实现牛结节性皮肤病病毒(LSDV)和羊痘病毒属(CaPV)其他成员的鉴别诊断,针对LSDV 010基因保守区域设计特异性引物及TaqMan探针,与文献报道的CaPV 068基因的通用引物及探针组合,通过优化反应体系和条件,建立了一种可同时鉴别检测LSDV和CaPV其他成员的双重荧光定量PCR检测方法。结果显示:本方法可以特异性扩增LSDV和CaPV其他成员,并且与其他牛、羊病毒无交叉反应,特异性好;对pLSDV-010和pCaPV-068质粒标准品的最低检测限均为15 copies/μL,具有较高的灵敏性;组内和组间变异系数均小于1.75%,重复性良好。应用本试验建立的方法与荧光定量PCR方法同时检测542份临床样品,发现CaPV的样品符合率为98.52%,LSDV为99.63%。本试验建立的方法为CaPV鉴别筛查、LSDV精准防控及流行病学调查提供了快捷有效的技术手段。

锰苯甲酸卟啉对猪精液冷冻保存效果的影响

本实验旨在探究锰苯甲酸卟啉(MnTBAP)对猪精液冷冻保存的影响,从而筛选出适用于猪精液冷冻的MnTBAP浓度。实验一共分为6组:新鲜组、冷冻对照组、不同浓度MnTBAP组(在冷冻液I中添加50、100、150、200μmol/LMnTBAP),对冷冻后猪精子动力学参数以及活率进行检测,从而筛选出适用于猪精子冷冻的最佳MnTBAP浓度。实验二共分成3组:新鲜组、冷冻对照组、最佳MnTBAP浓度组,对冷冻后猪精子质膜完整率、顶体完整率、DNA碎片指数(DFI)、线粒体膜电位(MMP)、活性氧(ROS)进行检测。结果表明:与其他浓度的MnTBAP组相比,100μmol/L MnTBAP对动力学参数以及活力改善最显著;与冷冻对照组相比,100μmol/L MnTBAP组猪精子质膜完整率、顶体完整率、MMP和抗氧化酶显著升高,DFI、ROS显著降低。综上所述,在冷冻液稀释中添加MnTBAP可以改善猪精液冷冻后的质量,且最适添加浓度是100μmol/L。

抗凋亡蛋白PTD-FNK对镉致雄性小鼠生殖受损的保护作用

为探究抗凋亡蛋白PTD-FNK对镉(Cd)引起雄性小鼠生殖系统受损的保护作用,将24只6周龄的雄性小鼠随机均分为3组,对照组(生理盐水),CdCl_(2)组(20μg/kg CdCl_(2)),CdCl_(2)+PTD-FNK组(20μg/kg CdCl_(2)+300μg/kg PTD-FNK),每天下午7:00腹腔注射1次,连续7 d,每天记录小鼠的生理指标(采食量、饮水量、体长、体重、体温、血糖、Lee’s指数),第8天颈椎脱臼处死小鼠,收集精液测精子畸形率,摘除睾丸观察其病理变化并测定其功能。结果显示:与镉组相比,PTD-FNK同期处理后,降低了小鼠夜间的摄食行为(P<0.001),但其余生理指标无明显变化。该蛋白还显著降低了精子畸形率(P<0.001),缓解了睾丸病理损伤程度,并且抑制了B细胞淋巴相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)基因的表达(P<0.001),恢复了谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)(P<0.01)、超氧化物歧化酶(SOD)(P<0.001)、类固醇激素急性调节蛋白(StAR)(P<0.001)基因的表达。结果表明:PTD-FNK对小鼠的摄食行为有影响,并且通过抗细胞凋亡和抗氧化应激减轻了睾丸病理损伤以及精子畸形程度,可以对镉引起雄性小鼠生殖系统受损起到一定的保护效果。

α-酮戊二酸对猪精子获能及抗氧化能力的影响

[目的]研究α-酮戊二酸(AKG)对猪精子获能过程中运动状态、糖代谢及抗氧化能力的影响,为体外获能试验模型提供理论和科学依据。[方法]将长白猪精子分为7组,分别为新鲜精子组(Fresh)、获能对照组(0 mmol/L AKG)及获能AKG处理组(5、15、30、45、60 mmol/L),检测精子活率、顶体完整率、质膜完整性、活力、运动速率、ATP含量及乳酸含量,筛选出最适AKG浓度,进一步测定最适浓度处理后抗氧化指标的变化。[结果]AKG对获能精子的活率、顶体完整率、质膜完整性、活力均无显著影响,但能显著提高精子的运动速率、ATP和乳酸含量,且AKG浓度为15 mmol/L时ATP和乳酸含量升高效果最佳。与获能对照组相比,15 mmol/L AKG获能组的总抗氧化能力、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性显著增加,丙二醛含量显著降低。[结论]添加AKG能够提高获能猪精子的运动速率、糖代谢水平及抗氧化能力。

茶多酚对高温下猪睾丸间质细胞损伤及睾酮分泌异常的缓解作用

旨在探究茶多酚(TP)对高温下猪睾丸间质细胞的凋亡及睾酮分泌的影响。通过酶消化与过筛法相结合的方式分离培养2~3周龄的仔猪睾丸间质细胞,分为空白组、热处理组和热+TP处理组。使用CCK8方法检测细胞存活率以筛选最适TP浓度;通过酶联免疫法(ELISA)检测热休克蛋白70(Hsp70)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、细胞色素C(Cytc)和睾酮的浓度;荧光定量PCR方法检测B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和Cytc、Caspase-3的mRNA表达水平;利用荧光探针DCFH-DA法测定细胞活性氧(ROS)水平。结果显示,与热处理组相比,TP处理后可明显提高细胞存活率(P<0.01),Bcl-2的mRNA表达水平显著升高(P<0.05),Bax、Cytc、Caspase-3的mRNA表达水平极显著降低(P<0.01),ROS水平极显著降低(P<0.01),Hsp70、Cytc、Caspase-3的蛋白含量极显著降低(P<0.01),睾酮分泌水平极显著升高(P<0.01)。由上可知,TP对高温下猪睾丸间质细胞的凋亡损伤和睾酮分泌功能异常具有明显的缓解作用。

稀释液中卵黄浓度对猪精液冷冻保存效果的影响

为探索卵黄在猪精液冷冻中的应用效果,筛选出猪精液冷冻稀释液中卵黄的最佳浓度,分别在猪精液冷冻稀释液中添加不同比例(20%、25%、30%)的卵黄,并以精子活率、活力、路径速率(VAP)、轨迹速率(VCL)、直线运动速率(VSL)等为指标,对猪精液稀释后、平衡后和冷冻后3个阶段的精液质量进行比较分析。结果表明,将猪精液冷冻稀释液中卵黄的添加量提高5～10个百分点,其稀释后、平衡后及解冻后3个阶段精子的5个运动参数与常规添加量相比均无显著差异(P>0.05)。可见,提高猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度未能显著改善猪精液冷冻后的质量,综合考虑,猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度仍以20%(v/v)为宜。

基于PBL教学法的家畜解剖学实验教学改革

在动物科学专业家畜解剖学实验课教学中进行了PBL(problem-based learning,以问题为中心)教学法试验,结果表明,PBL教学法在明显减少教师工作量的情况下,不影响学生对基础知识、知识要点和难点的学习,更有利于对学生分析和解决问题能力的培养。在家畜解剖学实验课教学中采用PBL教学法是可行的。

猪精液冷冻保存程序的优化

研究共4个试验:①按入氮温度分为-5、-30、-60、-90、-120℃5个组;②按鲜精液预处理方式分为未预稀释和预稀释2个组;③按解冻温度设37、50、70℃3个组;④按稀释后精子密度分为1.25×108、2.50×108、5.00×108spz/mL 3个组。结果表明:①不同入氮温度下精子冻后活力差异不显著,但随着入氮温度的降低,精子冻后活力呈升高趋势;②预稀释不能显著提高平衡后精子活力,但可以显著或极显著提高精子稀释后活力、冻后活力、VAP、VSL及VCL等运动指标;③3种解冻温度在精子冻后活力、VAP、VSL、VCL等4个冻后运动指标上没有显著差异,但是,随着解冻温度的上升,冻后活力呈上升趋势;④3种稀释后精子密度在猪精子冻后活力、VAP、VSL上没有显著差异,但随着密度的上升,冻后精子活力及VAP呈下降趋势,而且最高密度组精子的VCL显著慢于其它两组。总之,5种入氮温度中,以-120℃组精子的冻后活力最高;预稀释对于新鲜猪精液的冷冻保存很有必要;3种解冻温度中,70℃组精子冻后活力最高;而高密度不利于猪精子的冷冻保存。

卵磷脂取代卵黄冷冻牛精液效果观察

在常用的果糖-柠檬酸钠-卵黄-甘油液中分别加入1.50%、3.00%、4.50%、6.00%的大豆卵磷脂取代卵黄,以比较大豆卵磷脂与卵黄对牛精液的冷冻保存效果。冷冻前各组稀释液隔15 m in分两次加入,之后平衡4 h。结果表明,各试验组的精子畸形率、顶体完整率、每剂量菌落数与对照组相比差异不显著(P>0.05),冻后活力、复苏率、路径速率、直线运动速率和轨迹速率除了6.00%大豆卵磷脂组显著差于对照组(P<0.05)外,其余3组相当于(P>0.05)或显著优于(P<0.05)对照组。在所有试验组中以1.50%大豆卵磷脂组效果最好。

丙酮酸盐对牛精液冷冻效果的影响

在常用的果糖-柠檬酸钠-卵黄-甘油液的基础上,分别添加1.25 mmol/L或2.00mmol/L的丙酮酸钾、丙酮酸钠或丙酮酸钙,以观察丙酮酸盐在牛精液冷冻中的应用效果。冷冻前各组稀释液隔15min分2次加入,之后平衡4h。结果表明,各组精子的冻后活力、复苏率、畸形率和顶体完整率之间没有显著差异,但6个试验组的冻后活力、复苏率和对照组相比有提高趋势。

丙氨酸、半胱氨酸及精氨酸对牛精液冷冻效果的影响

在常用的果糖-柠檬酸钠-卵黄-甘油组合稀释液的基础上,分别添加不同浓度的丙氨酸(0.25、0.50、0.75、1.00 mmol.L-1)、半胱氨酸(0.25、0.50、0.75、1.00 mmol.L-1)和精氨酸(2.50、5.00、7.50、10.00mmol.L-1),以观察3种氨基酸在牛精液冷冻中应用的最佳浓度。再以最佳浓度的3种氨基酸进行两两或三重组合,与3种氨基酸单一应用进行效果对比,检测这些氨基酸对牛精液冷冻后质量是否有协同作用。结果表明,无论单一或合并应用丙氨酸、半胱氨酸及精氨酸,均未能显著提高精液的冻后质量。但相同的处理应用于不同的公牛可能会有显著不同的效果。

牛精液冷冻技术的研究进展

简要介绍精液冷冻技术发展历史 ,分析影响牛冷冻精液受胎率的主要技术因素。认为近年来冻精生产和应用的各个技术环节均没有重大突破 ,今后应该继续对这些环节进行优化组合 ,尤其是在水牛冻精生产技术的标准化、细管冻精生产成本的降低及分离精子的冷冻保存等方面应加大研究投入和力度。

催产素、孕酮和促排卵素3号对长大母猪繁殖性能的影响

为了研究催产素、孕酮和促排卵素3号对母猪繁殖性能的影响,将180头长大母猪随机分成4组:对照组46头;试验Ⅰ组56头,配种前肌注催产素;试验Ⅱ组38头,配种后4～30 d口服孕酮;试验Ⅲ组40头,配种前肌注催产素、促排卵素3号,配种后口服孕酮.本交配种.结果表明:①各组的受胎率和分娩率差异不显著(P>0.05);②试验Ⅰ组与对照组、试验Ⅱ组比较,产仔数、产活仔数差异显著(P<0.05),其他组间差异不显著(P>0.05);③试验Ⅰ组与对照组、试验Ⅱ组或试验Ⅲ组与对照组比较,窝重差异显著(P<0.05);其他组间差异不显著(P>0.05).各组的初生重差异不显著(P>0.05).总之,单独使用催产素是最方便、经济而有效的.