保留输卵管系膜的输卵管切除术对卵巢储备功能的影响

目的探讨保留输卵管系膜的输卵管切除术对卵巢储备功能的影响。方法收集2020年1月—2021年3月收治的输卵管疾病患者281例为研究对象,按照治疗方式的不同分为传统双侧切除组(n=53,行传统双侧输卵管切除术)、传统单侧切除组(n=56,行传统单侧输卵管切除术)、保留双侧切除组(n=60,行保留输卵管系膜的双侧输卵管切除术)、保留单侧切除组(n=54,行保留输卵管系膜的单侧输卵管切除术)、对照组[n=58,无输卵管切除术史的体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者]。比较各组患者手术时间、术中出血量和术后排气时间。患者术后2个月行IVF-ET并检测卵泡数量、卵子数量、妊娠率和受精率。IVF-ET后检测患者外周血抗苗勒氏管激素(AMH)、促卵泡生成素(FSH)、雌二醇(E_(2))、黄体生成素(LH)水平。随访至2023年3月,记录5组患者妊娠成功率。结果传统双侧切除组、传统单侧切除组、保留双侧切除组、保留单侧切除组患者围术期手术时间、术中出血量和术后排气时间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。行IVF-ET后,5组患者AMH、FSH、E_(2)和LH水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),AMH和E_(2)水平由低到高为传统双侧切除组、传统单侧切除组、保留双侧切除组、保留单侧切除组、对照组,FSH和LH水平由高到低为传统双侧切除组、传统单侧切除组、保留双侧切除组、保留单侧切除组、对照组。随访至2023年3月,传统双侧切除组、传统单侧切除组、保留双侧切除组、保留单侧切除组和对照组妊娠成功率分别为45.28%、50.00%、53.33%、59.26%、58.62%,5组患者行IVF-ET后妊娠成功率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=3.044,P=0.551)。结论与传统的输卵管切除术比较,保留输卵管系膜的输卵管切除术对卵巢储备功能影响较小。

尘螨与变应性疾病的研究进展

尘螨是最常见的室内变应原之一，随着住房缺少通气，湿度增加导致更多的住所遭受螨忠。世界范围内的多方面研究已经证实，尘螨暴露与哮喘、过敏性鼻炎和过敏性皮炎等变应性疾病之间有着密切的关联。本文从尘螨变应原，与变应性疾病的关系以及防治的研究现况予以综述。

酵母双杂交技术筛选人胰腺细胞中HCV 1b NS3结合蛋白基因

目的:应用酵母双杂交技术筛选人胰腺cDNA文库中与HCV1b亚型非结构蛋白NS3相互作用的结合蛋白的编码基因,为进一步研究HCV影响糖、脂代谢机制奠定实验基础.方法:扩增人胰腺cDNA文库并纯化鉴定,纯化后的文库质粒转化酵母菌Y187;构建诱饵质粒PGBKT7-NS3并转化酵母菌AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落.应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合,在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的四缺培养基上进行筛选,提取蓝色酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后提取质粒测序,对测序结果进行序列比对和分析.结果:成功构建人胰腺cDNA文库和pGBKT7-NS3重组质粒;将pGBKT7-NS3质粒转化AH109酵母菌株后,并从人胰腺cDNA文库中筛选出11种与HCVNS3蛋白相结合的蛋白基因.结论:筛选出的与HCVNS3蛋白结合的胰腺蛋白基因中,部分与2型糖尿病、肝脏脂肪变性密切相关.

下调转化生长因子β活化激酶1的表达逆转卵巢癌细胞顺铂耐药

目的探究转化生长因子β活化激酶1(TAK1)对卵巢癌顺铂耐药的影响及作用机制。方法体外培养人卵巢癌细胞SK-OV-3和SW626,转染对照shRNA或shTAK1质粒,经不同浓度顺铂(0~32μg/mL)处理24 h,用CCK-8法检测细胞活力,用AnnexinⅤ/7-AAD染色法检测细胞凋亡水平;建立顺铂耐药SK-OV-3/DDP细胞,经不同浓度顺铂(0~32μg/mL)处理24 h,用CCK-8法检测细胞活力;顺铂耐药细胞转染对照shRNA和shTAK1质粒,用蛋白质免疫印迹实验检测TAK1、选择性自噬接头蛋白p62、LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ的表达,用免疫荧光染色法检测LC3定位;用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)处理耐药细胞,检测细胞活力。结果与转染对照shRNA的细胞相比,转染shTAK1的细胞在不同顺铂浓度下的细胞活力均显著下降(均P<0.05),细胞凋亡水平显著升高(均P<0.05);与SK-OV-3细胞相比,SK-OV-3/DDP细胞p62、LC3-Ⅱ表达水平显著升高(均P<0.05),LC3聚集体形式增加;用3-MA抑制细胞自噬显著减弱了顺铂诱导的细胞凋亡(均P<0.05),而对紫杉醇诱导的细胞凋亡没有明显影响(P>0.05);转染shTAK1的细胞p62、LC3-Ⅱ表达水平显著下降(均P<0.05),LC3聚集体形式减少。结论在卵巢癌细胞中下调TAK1的表达减弱了细胞自噬活性,并逆转了细胞顺铂耐药。

circRNA-1565抑制CD8^(+)T细胞对宫颈癌细胞的杀伤功能研究

目的:探究circRNA-1565对CD8^(+)T细胞的作用及其对宫颈癌细胞杀伤能力的影响。方法:磁珠分选并用流式细胞术鉴定CD8^(+)T细胞。所得CD8^(+)T细胞分为Control组(转染空白质粒)和circRNA-1565组(转染circRNA-1565质粒)。CCK-8和流式细胞术检测Control组和circRNA-1565组CD8^(+)T细胞增殖能力和凋亡水平,Western blot检测Control组和circRNA-1565组CD8+T细胞Bcl-2、Bax和cleaved-caspase-3表达。将HeLa和SiHa细胞分别与Control组和circRNA-1565组CD8^(+)T细胞共孵育(HeLa+CD8^(+)T+Vector组、HeLa+CD8+T+circRNA-1565组、SiHa+CD8^(+)T+Vector组、SiHa+CD8+T+circRNA-1565组),检测各组CD8^(+)T细胞对HeLa和SiHa细胞的杀伤能力,ELISA检测共孵育后各组CD8^(+)T细胞分泌TNF-α、IFN-γ、Granzyme-B和perforin的能力。结果:磁珠分选的人PBMC CD8^(+)T细胞阳性率>88%。相比于Control组,circRNA-1565组CD8^(+)T细胞增殖能力显著下降(P<0.001),细胞凋亡显著增加(P<0.001),Bcl-2和Bax表达显著降低(P<0.001),cleaved-caspase-3表达显著增加。相比于HeLa+CD8+T+Vector组和SiHa+CD8^(+)T+Vector组,HeLa+CD8^(+)T+circRNA-1565组以及SiHa+CD8^(+)T+circRNA-1565组细胞上清中TNF-α、IFN-γ、Granzyme-B和perforin浓度均显著降低(P<0.001),对Hela和SiHa细胞杀伤能力显著降低(P<0.001)。结论:circRNA-1565调控CD8^(+)T细胞增殖和凋亡从而抑制其对宫颈癌细胞的杀伤能力。

circRNA-1565促进肿瘤相关巨噬细胞极化而诱导宫颈癌细胞的迁移和侵袭

目的研究circRNA-1565对巨噬细胞极化所介导的宫颈癌迁移和侵袭的影响及机制。方法将circRNA-1565过表达质粒以及Negative Control转染至M2型巨噬细胞(circRNA-1565组和Vector组),qRT-PCR检测circRNA-1565组和Vector组巨噬细胞CD16、TLR2、CD206和CD14表达,流式细胞术检测circRNA-1565组和Vector组巨噬细胞CD163和CD11B表达,Western blot检测各组细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活。将分别转染circRNA-1565过表达质粒以及Negative Control的M0型巨噬细胞与宫颈癌细胞HeLa共孵育(M0+Vector组和M0+circRNA-1565组),细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力,使用Transwell法检测细胞迁移和侵袭。结果相比于Vector组,circRNA-1565组巨噬细胞CD206和CD14表达显著上调(P<0.001),CD163+CD11B+细胞比例显著增加(P<0.001),PI3K/AKT/mTOR信号通路显著激活(P<0.001)。相比于M0+Vector组,M0+circRNA-1565组HeLa细胞划痕愈合率、细胞迁移和侵袭能力均显著增加(P<0.001)。结论circRNA-1565可显著诱导M2型巨噬细胞极化而促进宫颈癌细胞转移,其机制可能为激活PI3K/AKT/mTOR信号通路。

血清HE4、SMRP、IL-8、IL-17联合检测在上皮性卵巢癌患者中的意义及临床分析

目的探讨血清人附睾蛋白(HE4)、血清可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-17(IL-17)联合检测在上皮性卵巢癌患者中的意义及其临床应用分析。方法选取2013年8月至2018年8月海南省妇女儿童医学中心诊治的卵巢癌患者(n=150)和卵巢良性肿瘤患者(n=150)作为研究对象。另外再选取150例海南省妇女儿童医学中心体检的健康女性为对照组。结果卵巢癌组血清中HE4、SMRP、IL-8、IL-17水平显著高于卵巢良性肿瘤组和对照组(P<0.05),卵巢良性肿瘤组血清中HE4、SMRP、IL-8、IL-17水平与对照组无显著差异(P>0.05);卵巢癌组单项检测和联合检测血清中HE4、SMRP、IL-8、IL-17诊断卵巢癌的阳性率显著高于卵巢良性肿瘤组和对照组(P<0.05),卵巢良性肿瘤组单项检测的阳性率与对照组无显著差异(P>0.05),卵巢良性肿瘤组联合检测的阳性率显著高于对照组(P<0.05),卵巢癌组各单项检测的阳性率均显著低于联合检测的阳性率(P<0.05);联合检测的灵敏度、准确性和特异度显著高于各单项检测(P<0.05)。结论血清中HE4、SMRP、IL-8、IL-17联合检测能够有效鉴别卵巢癌,显著提高诊断率,对于卵巢癌患者的早期诊断具有重要意义,值得进一步推广应用。

沉默或抑制TAK1表达能够通过NF-κB信号通路改善卵巢癌细胞的紫杉醇耐药性

目的:探究利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)或转化生长因子β活化激酶1[transforming growth factor-β(TGF-β)-activated kinase 1,TAK1]抑制剂5Z-7-oxozeaenol进行靶向沉默或抑制TAK1表达对卵巢癌细胞紫杉醇(taxol)耐药性的影响及相关作用机制。方法:应用RT-PCR与Western blot检测TAK1在正常卵巢上皮细胞与卵巢癌细胞系中的表达,并筛选TAK1 mRNA与蛋白表达水平较高与较低的卵巢细胞OVCAR3和SKOV3进行研究;使用siRNA转染技术下调OVCAR3和SKOV3细胞中的TAK1表达,RT-PCR进行验证转染效率;将OVCAR3或SKOV3细胞分为三组:si-NC+taxol组、si-TAK1+taxol组和si-NC+taxol+5Z-7-oxozeaenol组;CCK-8法检测紫杉醇对各组卵巢细胞的半数抑制浓度(IC_(50)值),Tunel荧光染色检测紫杉醇对各组细胞的介导凋亡发生率,Western blot检测各组细胞中NF-κB信号通路IκBα(p-IκBα/IκBα)与p65(p-p65/p65)的磷酸化水平和凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达;使用SKOV3细胞建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤,并将小鼠分为四组:control组、si-NC+taxol组、si-TAK1+taxol组和si-NC+taxol+5Z-7-oxozeaenol组,监测肿瘤生长,免疫组化检测TAK1在肿瘤组织中的表达,并再次使用Tunel荧光染色与Western blot检测各组裸鼠肿瘤组织中的细胞凋亡率与NF-κB信号通路IκBα、p65的磷酸化水平和cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:与正常卵巢上皮细胞相比,TAK1 mRNA与蛋白表达水平在卵巢癌细胞系中的表达均明显升高(P<0.05),且在OVCAR3细胞中的表达水平最高,而在SKOV3细胞中表达最低;利用siRNA转染成功下调了OVCAR3与SKOV3细胞中TAK1表达;与si-NC+taxol组相比,si-TAK1+taxol组与si-NC+taxol+5Z-7-oxozeaenol组紫杉醇的IC_(50)值明显降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),细胞中IκBα与p65的磷酸化水平均明显下降(P<0.05),而cleaved caspase-3的蛋白表达水平明显升高(P<0.05);裸鼠体内实验结果表明,与control组相比,si-NC+taxol组、si-TAK1+taxol组与si-NC+taxol+5Z-7-oxozeaenol组的肿瘤重量和生长速度均明显降低(P<0.05),且肿瘤组织中TAK1的蛋白表达强度明显下降(P<0.05),NF-κB信号通路IκBα、p65的磷酸化水平亦显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率与cleaved caspase-3蛋白表达水平明显增加(P<0.05),其中与si-NC+taxol组相比,si-TAK1+taxol组与si-NC+taxol+5Z-7-oxozeaenol组中上述检测指标的变化趋势更为显著(P<0.05)。结论:本研究通过体内外实验表明TAK1是卵巢癌发生紫杉醇耐药性的重要分子,而通过沉默或抑制TAK1的表达可能通过抑制NF-κB信号通路的活化水平促进紫杉醇诱导的细胞凋亡,从而提高肿瘤对紫杉醇的化疗敏感性。

miR-107对卵巢癌细胞免疫逃逸的调控和紫杉醇耐药性的影响

目的:探讨微小RNA-107(miR-107)通过丝裂原活化蛋白3激酶7(MAP3K7)调控卵巢癌细胞免疫逃逸对紫杉醇(TAX)耐药性的影响,并阐明其作用机制。方法:293T细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)和miR-107 mimics组(转染miR-107 mimics)。采用浓度梯度递增法处理卵巢癌SKOV3细胞,获得TAX耐药细胞SKOV3/TAX。SKOV3/TAX细胞随机分为空白对照组、TAX(给予4.0μmol·L^(-1)TAX)组、TAX+miR-107 mimics(给予4.0μmol·L^(-1)TAX且转染miR-107 mimics)组和TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7(给予4.0μmol·L^(-1)TAX且转染miR-107 mimics和pcDNA-MAP3K7)组;分别与人外周血淋巴细胞HPBL共培养,分为HPBL组、HPBL+SKOV3/TAX组、HPBL+SKOV3/TAX+TAX组、HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics组和HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测细胞中miR-107表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-107和MAP3K7的靶向关系,Western blotting法检测各组细胞中MAP3K7和FAS蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果:与人卵巢上皮细胞HOSEpic比较,卵巢癌细胞中miR-107表达水平降低(P<0.05)。MAP3K7的3´-UTR与miR-107存在靶向结合位点。双荧光素酶报告基因实验,与miR-NC组比较,过表达miR-107组野生型MAP3K7的荧光素酶活性降低(P<0.01)。Western blotting法检测,过表达miR-107组细胞中MAP3K7蛋白表达水平低于miR-NC组(P<0.01)。RT-qPCR检测,与空白对照组比较,TAX组SKOV3/TAX细胞中miR-107 mRNA表达水平升高(P<0.01);与TAX组比较,TAX+miR-107 mimics组SKOV3/TAX细胞中miR-107 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与空白对照组比较,TAX组SKOV3/TAX细胞中MAP3K7和FAS蛋白表达水平降低(P<0.01);与TAX组比较,TAX+miR-107 mimics组SKOV3/TAX细胞中MAP3K7和FAS蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01);与TAX+miR-107 mimics组比较,TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7组SKOV3/TAX细胞中MAP3K7和FAS蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。与HPBL+SKOV3/TAX组比较,HPBL+SKOV3/TAX+TAX组HPBL细胞中FAS蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05);与HPBL+SKOV3/TAX+TAX组比较,HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics组HPBL细胞中FAS蛋白表达水平和细胞凋亡率降低(P<0.05);与HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics组比较,HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7组HPBL细胞中FAS蛋白表达水平降低(P<0.01),且细胞凋亡率降低(P<0.01)。与空白对照组比较,TAX组SKOV3/TAX细胞存活率降低(P<0.05);与TAX组比较,TAX+miR-107 mimics组SKOV3/TAX细胞存活率降低(P<0.05)。与TAX+miR-107 mimics组比较,TAX+miR-107mimics+pcDNA-MAP3K7组SKOV3/TAX细胞存活率明显升高(P<0.05)。与空白对照组比较,TAX组SKOV3/TAX细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与TAX组比较,TAX+miR-107组SKOV3/TAX细胞凋亡率升高(P<0.05);与TAX+miR-107 mimics组比较,TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7组细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:miR-107在SKOV3/TAX细胞中呈低表达,且miR-107通过抑制MAP3K7的表达,抑制SKOV3/TAX细胞免疫逃逸,缓解卵巢癌细胞TAX耐药性。

足月前胎膜早破的诊治分析

目的探讨足月前孕妇生殖道感染与胎膜早破(PROM)的相关性。方法 55例孕37周前确诊为PROM的孕妇作为观察组和70例无PROM门诊产检的孕28～37周孕妇作为观察组,分别进行宫颈分泌物及阴道分泌物病原学检测,同时对临床指标进行Logistic回归分析。结果观察组生殖道感染明显高于对照组,其中支原体、霉菌、细菌性阴道病检出率差异有统计学意义;产妇外阴瘙痒、性生活频率、支原体感染增加足月前胎膜早破(PPROM)的风险。结论生殖道感染能明显增加PROM的发生率,改变饮食卫生习惯及时治疗生殖道感染减少孕期性生活能降低PPROM的发生风险。

对阴道局部固有免疫细胞因子表达水平的及其同宫颈高危型HPV感染的相关性分析

目的:探究对阴道局部固有免疫细胞因子表达水平的及其同宫颈高危型HPV感染的相关性分析。方法:随机选取2017年4月~2018年4月在我院治疗的200例宫颈高危型HPV感染的患者作为研究组,选取HPV呈阴性并且宫颈情况正常的健康人作为对照组。收集两组的宫颈分泌物、宫颈组织、脱落的细胞以及阴道的分泌物。使用酶联免疫吸附的方法对血清炎性因子TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-10和IL-4进行检验,使用免疫组化法对宫颈CD4+和CD8+这两种T淋巴细胞表达相应的检测,使用液基薄层细胞学的检查方法对宫颈的病变程度做出相应的检查。结果:CD8+免疫细胞的表达率在对照组和宫颈癌Ⅰ期、宫颈癌Ⅱ期以及宫颈癌Ⅲ期这几组中无明显差距,CD4+免疫细胞的表达率在对照组和宫颈癌Ⅰ期、宫颈癌Ⅱ期以及宫颈癌Ⅲ期这几组中呈下降的趋势,CD4+/CD8+的比值在这几组中明显呈下降趋势,CD8+免疫细胞的表达率在对照组、出现淋巴结转移以及未出现淋巴结转移这几组中无明显差距,CD4+免疫细胞的表达率在对照组、出现淋巴结转移以及未出现淋巴结转移这几组中呈下降的趋势,TNF-α和IL-10的含量在对照组和宫颈癌Ⅰ期、宫颈癌Ⅱ期以及宫颈癌Ⅲ期这几组中无明显差距,IFN-γ和IL-2的含量在对照组和宫颈癌Ⅰ期、宫颈癌Ⅱ期以及宫颈癌Ⅲ期这几组中呈下降的趋势,IL-4的含量在这几组中明显呈上升趋势,TNF-α和IL-10的含量在对照组、出现淋巴结转移以及未出现淋巴结转移这几组中无明显差距,IFN-γ和IL-2的含量在对照组、出现淋巴结转移以及未出现淋巴结转移这几组中呈下降的趋势,IL-4的含量在这几组中明显呈下降趋势,随着病情的加重,患者的衣原体、滴虫、霉菌、淋球菌以及乳酸杆菌的感染率不断的增加,其中,对照组的感染率最低,宫颈癌Ⅲ期的感染率最高,出现淋巴结转移的患者的感染率最高。结论:CD4+免疫细胞的表达率的增加可以延缓宫颈癌症的发展,而良好的阴道局部环境也有利于减缓宫颈病变的发展进程,值得在临床上进一步推广和应用。

TGF-β1通过TAK1/β-catenin促进卵巢癌SK-OV-3细胞紫杉醇耐药的机制研究

目的研究上皮性卵巢癌中转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1通过TAK1/β-catenin促进SK-OV-3细胞紫杉醇耐药的作用机制。方法使用TGF-β1处理SK-OV-3细胞后,通过WB检测TAK1及β-catenin的表达情况。使用RNA干扰下调SK-OV-3中TAK1及β-catenin的表达,并通过WB验证敲减效率。使用CCK-8检测TGF-β1对于TAK1或β-catenin敲减后SK-OV-3对紫杉醇耐药的情况并通过WB检测下游TAK1、β-catenin以及凋亡相关蛋白cleaved caspase3表达的变化。结果 TGF-β1可显著促进SK-OV-3细胞中TAK1及β-catenin的蛋白表达。本研究所构建的siRNA可显著下调SK-OV-3细胞中TAK1及β-catenin的蛋白表达。通过CCK-8及WB的结果提示,TGF-β1可促进SK-OV-3对紫杉醇的耐药并抑制caspase3的活化剪切,而下调TAK1或β-catenin的表达后可以逆转TGF-β1的作用。进一步机制研究发现,TGF-β1通过TAK1调控SK-OV-3细胞中β-catenin的表达。结论 TGF-β1通过调控TAK1/β-catenin信号通路促进SK-OV-3细胞对紫杉醇的耐药。本研究为从改善卵巢癌耐药提供了一定的理论基础。

TRIF和MyD88指标在卵巢癌中的表达及与肿瘤血管生成的关系

目的探究TRIF和MyD88指标在卵巢癌中的表达及与肿瘤血管生成的关系。方法检测30例卵巢癌组织和正常卵巢组织中TRIF和MyD88表达;分析TRIF和MyD88与临床病例特征的关系;对TRIF和MyD88与肿瘤血管生成的相关性进行分析。结果卵巢癌组织中TRIF、MyD88阳性表达和VEGF表达高于正常卵巢组织,与FIGO分期和淋巴结转移有相关性(P<0.05)。卵巢癌组织中TRIF、MyD88表达和VEGF表达呈正相关,介导肿瘤血管生成。结论TRIF、MyD88在卵巢癌组织均高表达,并且和VEGF共介导肿瘤血管生成,卵巢癌和正常卵巢组织中TRIF、MyD88的表达与肿瘤血管生成,影响卵巢癌的发生发展。