HPLC法同时测定不同产地五味子中8种木脂素类成分

目的测定产自辽宁、河北和黑龙江省的五味子中五味子醇甲、戈米辛J、五味子醇乙、戈米辛G、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素8种木脂素成分,为其质量控制提供检测手段。方法五味子用甲醇超声提取,色谱柱为依利特ODS-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～17 min,A为50%;17～25 min,A为50%～55%;25～30 min,A为55%～75%;30～35 min,A为75%;35～40 min,A为75%～65%;40～45 min,A为65%～50%);体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长217 nm。结果 8种被测木脂素成分分离度良好;各成分质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系(r>0.999 5);重复性良好;加样回收率(RSD)(n=9)分别为99.75%(0.38%)、100.69%(2.31%)、100.46%(1.39%)、99.87%(1.15%)、100.22%(1.45%)、100.15%(0.99%)、100.61%(0.25%)和101.31%(1.03%)。结论本实验所建立的HPLC方法稳定可靠、简便可行,可用于五味子中木脂素类成分的同时定量分析。

LC-MS测定大鼠血浆中五味子的3个木脂素成分及其药动学研究

目的建立测定大鼠血浆中五味子醇甲、五味子甲素与五味子乙素浓度的LC-MS法，并探讨其在大鼠体内的药代动力学过程。方法SD大鼠6只，按5mg·g^-1。剂量ig给予五味子醇提液，以睾丸酮为内标，血浆样品经甲醇沉淀蛋白后，采用LC—MS法测定不同时间点大鼠血浆中的五味子醇甲、五味子甲素、五昧子乙素的浓度，对其血药浓度-时间采用DAS1．0软件拟合，计算其药动学参数。结果大鼠血浆样品中，五味子醇甲、五味子甲素与五味子乙素的线性范围分别为0．114～3．66mg·L^-1（r=0．9994）、0．0299～0．995mg·L^-1（r=0．9992）和0．0251—0．803mg·L^-1（r=0．9991），提取回收率为83．12％～103．48％，日内与日间精密度均≤14．00％，Cmax分别为（0．54±0．07）、（0．23±0．07）和（0．40±0．04）mg·L^-1，Tmax分别为（4．67±0．26）、（4．33±0．26）和（4．08±0．20）h，q分别为（1．95±0．26）、（8．30±3．36）和（6．46±3．82）h。结论本法专属性强，灵敏度高，快速准确，可作为大鼠血浆中五味子醇甲、五味子甲素与五味子乙素的同时检测及其药动学研究。

重楼醇提物镇痛抗炎作用研究

目的通过不同的致痛、致炎模型观察重楼醇提物的镇痛抗炎作用。方法以重楼醇提物大、中、小3个剂量组(1.2、2.4、4.8g/kg),采用小鼠热板法和扭体法,观察其镇痛作用;采用耳肿法及毛细管通透性法观察药物的抗炎作用。结果重楼醇提物对醋酸所致的扭体有明显的抑制作用,热板法显示各剂量组均能明显提高小鼠的痛阈值,其中以大、中剂量组作用较为明显。重楼醇提物对二甲苯所致的耳廓肿胀及醋酸所致的毛细管通透性增加都有明显的抑制作用。其中以大、中剂量组作用较强。结论重楼醇提物各剂量组均有显著的镇痛抗炎作用,其中以大、中剂量组作用较强。

金银花高效液相指纹图谱条件优化与建立

目的优化金银花饮片指纹图谱建立的条件,并建立金银花高效液相指纹图谱,为金银花饮片的质量鉴定提供依据。方法对金银花指纹图谱建立的条件进行优化,包括检测波长、提取溶剂、提取方法、饮片粒度、提取次数、提取时间、色谱条件和色谱柱等,并运用优化的方法建立金银花指纹图谱,选用Kromasil KR100-5C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.4%磷酸水,梯度洗脱,流速为1.0 ml.min-1,检测波长为330 nm,柱温为30°C。结果建立了精密度、稳定性和重复性均良好的HPLC指纹图谱检测方法和金银花指纹图谱,并利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件对山东10批金银花饮片的指纹图谱进行相似度评价,10批饮片指纹图谱相似度均大于0.95。结论优化所得方法简便易行,稳定可靠,重复性好,可为金银花指纹图谱的建立提供方法参考,建立的指纹图谱检测标准可以作为金银花饮片质量评价和品种鉴别的重要依据。

HPLC法测定不同产地醋五味子中6种木脂素类成分的含量

目的测定不同产地醋五味子中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素6种木脂素的含量。方法色谱柱为依利特ODS-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～17min,A为50%;17～25min,A为50%～55%;25～30min,A为55%～75%;30～35min,A为75%;35～40min,A为75%～65%;40～45min,A为65%～50%)。结果 6种被测木脂素成分分离度良好;各成分质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系(r>0.999 5);重现性良好;准确度(RSD)分别为101.8%(1.5%)、99.5%(1.2%)、103.26%(2.1%)、99.8%(1.0%)、100.0%(1.9%)和101.3%(1.9%)。结论 HPLC法同时检测五味子6种木脂素成分,所建立方法稳定、可行。

川芎嗪纳米制剂抗大鼠术后腹腔粘连实验研究

目的探讨川芎嗪纳米制剂抗大鼠术后腹腔粘连的作用。方法将大鼠随机分组,共8组。术后观察大鼠一般情况,各组于术后1周和2周取8只观察粘连情况,采用Phillips评分法对腹腔粘连进行分级。结果各组分级评分与模型组比较,1周组与2周组中的川芎嗪纳米中、高剂量组具有较明显的抗术后粘连作用(P<0.05,P<0.01)。且以川芎嗪纳米组降低粘连发生率的作用尤为显著。结论川芎嗪纳米制剂具有较好的抗术后腹腔粘连的作用。

不同炮制方法对莪术挥发油及其4种主要活性成分的影响

目的比较不同炮制方法对莪术挥发油及其4种主要活性成分莪术二酮、莪术醇、牻牛儿酮和β-榄香烯的影响。方法以药典挥发油测定法测定生、醋炙和醋煮莪术饮片中的挥发油,采用HPLC法同时测定莪术二酮、莪术醇、牻牛儿酮和β-榄香烯。色谱柱为依利特ODS-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱,0～30 min,40%～60%(A),30～40 min,60%～80%(A),40～60 min,80%～90%(A);进样量10μL;柱温25℃;体积流量1.0 mL/min;检测波长214 nm。结果与生品相比,莪术的醋煮品和醋炙品挥发油及其4种活性成分均有不同程度下降;并且莪术醋炙品高于醋煮品。结论本研究所建立的定量测定方法可用于莪术挥发油及其4种活性成分的同时定量分析。为莪术饮片及其炮制品的质量控制和临床应用提供参考依据。

HPLC测定损伤复元颗粒中川续断皂苷Ⅵ的含量

目的为有效控制损伤复元颗粒的质量,建立制剂中川续断皂苷Ⅵ的HPLC定量测定方法。方法 Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相乙腈-水(28∶72);检测波长212nm;体积流量1.0mL/min;柱温30℃。结果川续断皂苷Ⅵ在0.104～0.936mg/mL范围内呈良好的线性关系,r=0.999 6,平均加样回收率为100.17%,RSD为1.87%。结论该方法快速、灵敏,准确度高,可用于该制剂的质量控制。

肠宁清颗粒的质量标准研究

目的建立肠宁清颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱(TLC)法对方中的枳实、大黄、厚朴、苍术进行定性鉴别,用高效液相色谱法(HPLC)对柚皮苷、新橙皮苷进行含量测定。结果 TLC斑点清晰,分离度良好,阴性对照无干扰;柚皮苷、新橙皮苷检测浓度在10.2～163.2μg/mL、23.8～380.7μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系,平均回收率依次为97.48%、98.11%,RSD分别为1.88%和1.14%(n=6)。结论定性定量方法简便、结果准确可靠、专属性强,所建标准可用于肠宁清颗粒的质量控制。

HPLC法同时测定五味子饮片中6个木脂素类成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定五味子中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素6个木脂素类成分含量。方法:采用依利特C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～17min,50%A;17～25 min,50%A→55%A;25～30 min,55%A→75%A;30～35 min,75%A;35～40 min,75%A→65%A;40～45min,65%A→50%A),流速1.0 mL.min-1,检测波长217 nm,柱温30℃。结果:6个被测木脂素类成分分离度良好;各成分质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系(r>0.9995);平均加样回收率(n=9)分别为99.8%,100.7%,101.6%,100.3%,100.5%,100.4%。结论:本研究所建立的HPLC方法稳定可靠,简便可行,可用于五味子中木脂素类成分的同时定量分析,为五味子药材及其炮制品的质量评价和质量控制奠定了基础。

高效液相色谱法测定不同产地大腹皮中槟榔碱的含量

目的建立高效液相色谱法测定大腹皮中槟榔碱的含量。方法采用Thermo-BioBasic SCX离子交换柱(4.6 mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(55∶45),浓氨试液调节pH值至3.8,流速1.0 mL.min-1,柱温30℃,检测波长215 nm。结果氢溴酸槟榔碱的色谱峰面积与质量浓度呈良好的线性关系,线性范围为5.2～83.2μg.mL-1(r=0.999 1),平均回收率(n=9)为98.8%。结论该方法简便、准确、专属性强,为大腹皮饮片的质量评价提供了方法。

液-质联用研究五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素在大鼠体内的组织分布

目的:建立HPLC-MS同时测定大鼠组织中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的分析方法,并应用于3个木脂素成分在大鼠体内的组织分布研究。方法:以睾丸酮为内标,组织样品经乙腈沉淀蛋白后进行HPLC-MS分析,采用依利特ODS-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈(A)-0.05%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱;正离子选择性检测(SIM)模式,选择的检测离子质荷比(m/z)为五味子醇甲433.2、五味子甲素401.0、五味子乙素417.0和睾丸酮289.0。结果:在大鼠不同组织中,3个木脂素成分在测定的线性范围内线性关系良好(r≥0.9951);方法的精密度和稳定性RSD均小于15%;回收率为81.11%～99.49%,RSD小于15%,符合化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则。3个木脂素成分在大鼠体内分布比较广泛,主要分布在肝和肺组织中,在脾中的分布浓度最低。结论:建立的方法简便易行、准确可靠,应用于大鼠体内木脂素成分的组织分布研究,获得了满意的结果。

不同器具煎煮补阳还五汤的4种成分含量比较

目的:应用HPLC对补阳还五汤中苦杏仁苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素4种成分同时定量检测的方法比较不同器具煎煮对补阳还五汤4种成分含量的影响。方法:分别用砂锅、不锈钢锅、全自动中药壶煎煮补阳还五汤,采用依利特Hypersil ODS2色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸为流动相二元梯度洗脱,流速1mL.min-1,检测波长218nm,柱温30℃。结果:砂锅煎煮组补阳还五汤4种成分含量明显高于不锈钢锅煎煮组及全自动养生壶煎煮组,且不锈钢煎煮组4种成分含量最低。结论:采用砂锅煎煮4种有效成分含量最高,即砂锅为补阳还五汤传统煎煮的最佳煎煮器具。

五味子不同炮制品对小鼠CYP450的诱导作用

目的研究五味子不同炮制品对小鼠肝微粒体CYP450的诱导作用。方法分别灌胃给予小鼠不同剂量的生、醋五味子水、醇提浸膏,测定肝脏系数、蛋白含量及CYP450的水平。结果与生理盐水组比较,生、醋五味子水提浸膏组均有显著性差异(P<0.01、P<0.05);与空白组比较,中剂量生五味子水提浸膏组、高剂量生、醋五味子醇提浸膏组和高剂量醋五味子水提浸膏组有显著性差异(P<0.01、P<0.05);与苯巴比妥组比较,各提取组无显著性差异(P>0.05)。结论五味子经醋制后对CYP450酶含量产生诱导作用,且与提取的溶媒及给药剂量呈正相关。

HPLC测定山茱萸不同炮制品中5-羟甲基糠醛和没食子酸的含量

目的:测定山茱萸及其炮制品中5-羟甲基糠醛和没食子酸的含量。方法:色谱条件,Kromasil-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(5∶95),流速1.0 mL.min-1,检测波长240 nm,柱温30℃。测定没食子酸的色谱条件,Kromasil-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸(8∶92),流速1.0 mL.min-1,检测波长271 nm,柱温30℃。结果:与生品相比,炮制品中5-羟甲基糠醛为新增加成分,没食子酸含量明显增加;高压蒸制中两种成分含量高于常压蒸制,但没有显著性差异。结论:该方法稳定可靠、简便可行,可以为制定山茱萸的炮制工艺提供依据。

不同粒度五味子有效利用率评价

目的:比较不同粒度五味子饮片中五味子醇甲等6种木脂素成分含量来确定临床最佳有效利用率的研究。方法:通过HPLC法同时测定同一来源、不同粒径的五味子经过水煎煮后五味子醇甲等6种有效成分含量的对比情况。结果:粉碎组的五味子醇甲等6种木脂素成分含量明显高于不粉碎组;50,65,80,100目粉碎的五味子中五味子醇甲等6种木脂素成分含量随粒度的变细而增高,但差异性不明显。结论:粉碎组优于不粉碎组;粒度越细,加大了工作成本,故临床使用五味子时以过三号筛(50目)粗粉为宜。

高效液相色谱法同时测定不同产地莪术饮片中5种倍半萜类成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定不同产地莪术中莪术二酮、莪术醇、吉玛酮、呋喃二烯、β-榄香烯等5种倍半萜类成分的含量。方法:采用Kromasil C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～35min,45%A→70%A;35～40min,70%A→90%A;40～60min,90%A→95%A),流速1.0mL·min-1;检测波长214nm;柱温25℃。结果:莪术二酮、莪术醇、吉玛酮、呋喃二烯、β-榄香烯分别在27.88～278.8,20.42～204.2,3.475～34.75,5.380～53.80,10.12～101.2μg·mL-1范围内线性关系良好,r≥0.999 6。平均加样回收率(RSD)分别为97.36%(1.85%),97.96%(2.30%),97.47%(2.02%),98.10%(2.38%),98.94%(2.01%)。结论:本方法操作简便、准确可靠,适用于莪术中5种倍半萜类成分的定量分析。

HPLC法测定不同产地莪术中羟基异吉马呋内酯的含量

目的：建立测定莪术中羟基异吉马呋内酯含量的方法，并比较不同产地莪术中羟基异吉马呋内酯的含量差异。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为KromasilC18（250mm×4．6mm，5μm），流动相为乙腈．水（梯度洗脱），流速为1．0ml／min，检测波长为214nm，柱温为25℃。结果：羟基异吉马呋内酯的质量浓度在1．47～14．68μg／ml范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系（n=0．9997）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD〈3％；平均加样回收率为95．31％～95．80％，RSD为0．07％～1．36％（n=3）。不同产地同品种、同产地不同时期莪术中羟基异吉马呋内酯的含量存在差异。结论：该方法分离度好、专属性强、重复性好、简便易行。可用于莪术中羟基异吉马呋内酯的含量测定，并能完善现行莪术药材的质量标准。

高效液相色谱法同时测定五味护肝咀嚼片中7种木脂素类成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定五味护肝咀嚼片中五味子醇甲、戈米辛J、五味子醇乙、戈米辛G、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素7种木脂素类成分的含量,为制定其质量标准提供依据。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Kromasil 100-5C18(250mm×4.6mm,5μm);检测波长217nm;柱温为30℃;流速为1.0mL.min-1;流动相为乙腈-水,梯度洗脱。结果:被测的7种木脂素成分分离度良好;各成分质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好线性关系(r>0.999 5);重现性良好;准确度(RSD)(n=9)分别为99.90%(1.63%)、100.12%(1.26%)、99.42%(1.72%)、100.30%(2.21%)、99.81%(2.07%)、99.79%(1.91%)和100.57%(1.61%)。结论:本方法简便易行,结果准确可靠,适用于本制剂中五味子木脂素类成分的同时定量分析。

液-质联用法同时测定L-02肝细胞中五味子甲素和五味子乙素含量

目的:建立HPLC-MS同时测定L-02肝细胞中五味子甲素和五味子乙素的分析方法,并应用于研究2个木脂素成分在L-02肝细胞的摄取过程。方法:以睾丸酮为内标,细胞样品经乙腈沉淀蛋白后进行HPLC-MS分析,采用依利特ODS-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.05%甲酸水溶液(45∶55)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1);正离子选择性检测(SIM)模式,选择的检测离子质荷比(m/z)为五味子甲素401.0、五味子乙素417.0和睾丸酮289.0。结果:在L-02肝细胞中,2个木脂素成分在测定的线性范围内线性关系良好(r≥0.996 6);方法的精密度和稳定性RSD均小于15%;回收率为94.99%~100.8%,RSD小于15%,符合化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则。2个木脂素成分均能够被L-02肝细胞所摄取,并呈现先升高后下降的趋势。结论:本文方法应用于研究2种木脂素成分在L-02肝细胞的摄取过程,获得了满意的结果。