巨噬细胞及其相关因子在家兔不稳定斑块中的作用及其机制

[目的]探讨巨噬细胞及其相关炎症因子在家兔不稳定斑块中的作用及其机制。[方法]高脂饲料喂养家兔2周,按随机数字表法随机分为假手术组和模型组,模型组球囊拉伤腹主动脉内皮,假手术组仅暴露动脉但不进行拉伤。术后10周以蝰蛇毒和组胺进行两次药物触发,第2次药物触发后24 h处死动物、取材。计数破裂斑块的数量。行免疫组织化学染色,确定斑块中巨噬细胞百分比。酶联免疫吸附法(ELISA)法检测相关炎症因子C反应蛋白(CRP)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。[结果]与假手术组比较,模型组斑块破裂数量明显增多、斑块面积较大,泡沫细胞数量较多,脂核较大,纤维帽较薄,炎细胞浸润较多。模型组粥样斑块内巨噬细胞浸润百分比、血清炎症相关因子CRP、MCP-1及TNF-α的水平均高于假手术组(P<0.01)。[结论]球囊损伤内皮细胞促进动脉粥样硬化的发生发展,巨噬细胞介导的炎症反应可能是不稳定斑块模型形成的重要机制。

补阳还五汤对易损斑块模型家兔心脏和肝脏组织学的影响

[目的]探讨补阳还五汤对动脉粥样硬化易损斑块模型家兔心脏和肝脏组织学的影响。[方法]通过喂养高脂饲料和主动脉球囊内皮拉伤术复制动脉粥样硬化易损斑块模型,实验分为假手术组,模型组,补阳还五汤组,历时10周。称质量,处死后,称取心肝质量,计算心体指数和肝体指数。取部分心肝组织行苏木精-伊红(HE)染色,观察镜下病变。[结果]1)心体指数和肝体指数的观察:补阳还五汤能够有效降低心体指数和肝体指数,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。2)HE观察:补阳还五汤可以有效减轻心肌细胞和肝细胞水肿。[结论]补阳还五汤可以减轻易损斑块模型家兔心肝组织的细胞水肿,其机制尚待进一步研究。

5-氮胞苷联合丹酚酸B促进大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

[目的]探讨5-氮胞苷及丹酚酸B的联合作用下骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞的能力。[方法]体外分离、培养、鉴定的骨髓MSCs分为4组:正常对照组,5-氮胞苷组,丹酚酸B组,5-氮胞苷+丹酚酸B组。诱导2周后,利用实时荧光定量PCR(QPCR)和蛋白免疫印迹技术检测心肌早期转录因子(GATA-4)和心肌特异性肌凝蛋白重链(α-MHC)的表达含量。[结果]各诱导组GATA-4及α-MHC RNA和蛋白的表达量均高于正常对照组,而5-氮胞苷+丹酚酸B组高于5-氮胞苷组和丹酚酸B组,且差异有统计学意义。[结论]5-氮胞苷联合丹酚酸B可提高MSCs向心肌样细胞的分化率。

丹酚酸B体外诱导MSCs向心肌细胞分化中β-catenin表达的实验研究

[目的]体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌细胞分化,检测分化过程中β-catenin蛋白表达的变化。[方法]大鼠MSCs经采用密度梯度离心法和贴壁筛选法培养,免疫细胞化学法检测MSCs的表面抗原表达,取纯化稳定的P3代MSCs,将其分为4组:空白对照组、5-氮胞苷组、丹酚酸B组、5-氮胞苷联合丹酚酸B组、进行诱导,诱导4周,观察细胞形态学改变;免疫组化方法检测心肌特异性蛋白cTnT的表达,逆转录———聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MSCs诱导前后糖原合成激酶(GSK)、β-catenin基因mRNA表达。[结果]诱导分化后的各组不同程度的阳性表达心肌细胞特异性蛋白心肌肌钙蛋白T(cTnT),RT-PCR显示诱导组GSK基因表达上调,β-catenin基因表达下调。[结论]丹酚酸B促进MSCs向心肌细胞分化,并伴有wnt经典信号通路的抑制。

经典Wnt信号通路在心肌细胞分化作用的研究进展

缺血性心脏病已成为发达国家的主要死因,并有着惊人的发病率。急性心肌梗死后,心脏自我更新能力有限及重构导致左室功能下降。

银杏叶提取物对家兔高胆固醇血症模型脑组织形态学的影响

[目的]通过高胆固醇血症家兔模型观察银杏叶提取物(EGB761)对中枢神经纤维的影响。[方法]以成年雄性新西兰大白兔复制高胆固醇血症模型,实验分为4组:对照组、模型组、阳性药辛伐他汀组、EGB761组。用苏木精-伊红(HE)染色和嗜银染色法观察神经元及神经纤维的形态学改变。[结果]外周胆固醇升高时,模型组海马出现较多神经元变性、坏死,神经纤维缠结等病理改变。EGB761组变性、坏死的神经元明显少于模型组,细胞核形态基本规则,嗜神经现象少见,神经纤维缠结少于模型组。[结论]EGB761可有效保护高胆固醇血症时神经纤维结构的完整性。

电针对家兔易损斑块模型VEGF和TGF-β1的影响

目的:观察电针对家兔易损斑块模型血管内皮细胞生长因子(VEGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法:将30只日本大耳白兔随机分为假手术组、模型组、电针组,每组10只,历时12周。采用球囊内皮拉伤+高脂饲养制备主动脉粥样硬化斑块易损模型。采用苏木素-伊红(HE)染色法观察动脉组织病理形态学变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA法测定)检测血清VEGF、TGF-β1变化。结果:HE染色显示模型组大部分兔形成不稳定粥样斑块模型,电针对实验动物已形成不稳定斑块有抑制、减轻病变程度的效果。电针干预降低实验动物血清VEGF的含量、提高了血清中TGF-β1含量,与模型组相比有差异性(P<0.05)。结论:VEGF、TGF-β1可能与斑块稳定有关,电针可能通过下调VEGF、上调TGF-β1的表达发挥稳定斑块的作用。

电针对家兔易损斑块模型单核细胞趋化因子-1和斑块内巨噬细胞浸润的影响

目的:探讨电针刺激对家兔易损斑块内巨噬细胞浸润和血清单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的影响。方法:日本大耳白兔27只,随机分为对照组、模型组和电针组,每组9只,采用高脂饲料喂养加球囊拉伤法制备家兔腹主动脉易损斑块模型。对照组以普通饲料喂养,电针组在模型复制成功后行电针治疗,每日1次,连续两周。实验结束后,HE染色观察兔腹主动脉的斑块变化;采用免疫组织化学技术,观察斑块内巨噬细胞浸润的变化;采用ELISA法测定血清MCP-1的水平。结果:电针可减少斑块内巨噬细胞的浸润、降低血清MCP-1的浓度,与模型组相比差异显著。结论:电针可通过降低MCP-1表达和减少巨噬细胞的浸润起到稳定斑块的作用。

不稳定斑块内形成易损血管机制的研究进展

动脉粥样硬化内不成熟新生血管促进易损斑块发生、发展。从周细胞募集入手,综述易损斑块内新生血管不成熟机制的研究进展。

心复康含药血清对心脏干细胞中缝隙连接蛋白43水平的影响

目的探讨心复康含药血清对心脏干细胞分化的促进作用。方法采用细胞免疫荧光方法对传代后心脏干细胞进行检测,采用实时荧光定量PCR和Western印迹分别检测心脏干细胞中缝隙连接蛋白(Cx43)mRNA和蛋白表达。结果 5%心复康含药血清培养72 h后,心脏干细胞中Cx43的转录水平和蛋白表达水平明显提高(P<0.05)。结论心复康含药血清具有促进心脏干细胞分化的作用,有利于阐明心复康治疗心肌梗死的作用机制。

可注射含钙骨基质材料的制备及骨修复评价

目的制备一种可注射含钙骨基质(injectable calcium-containing bone matrix,ICBM),评价其骨修复效果,并分析用于临床治疗的可行性。方法将甘油和明胶作为赋型剂,与其制备的含钙骨基质(calcium-containing bone matrix,CBM)粉进行混合,得到ICBM;通过测定骨粉、赋型剂和ICBM的pH值、钙含量,以及赋型剂、ICBM的注射推力情况,对ICBM进行初步表征;通过体外L929细胞增殖实验对ICBM进行体外生物相容性评价;在昆明小鼠和白化豚鼠体内分别植入ICBM评价其体内安全性;进一步用裸鼠进行体内骨诱导验证;最后采用兔股骨髁缺损模型进行体内骨缺损修复,评价ICBM的有效性。结果骨粉pH值为6.51±0.32、钙含量为(26.24±1.25)%;赋型剂pH值为5.56±0.28,注射推注力为(1.23±0.16)N;ICBM pH值为6.44±0.47,钙含量为(5.32±0.73)%,注射推注力为(10.87±1.53)N。ICBM组细胞相对增殖率为(104.25±3.39)%,细胞毒性为0级;ICBM未对昆明小鼠产生急性全身毒性反应,也未引起白化豚鼠发生迟发型超敏反应;在体内骨诱导组织学观察发现ICBM组可见大量有明显成骨出现;在兔股骨髁缺损修复8周时,脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)组缺损修复面积为(12.91±2.27)%,ICBM组为(15.68±2.25)%,两组缺损修复面积差异有统计学意义(P<0.05)。结论制备一种ICBM,使CBM具有注射可操作性同时不影响其成骨诱导活性,不仅使用方便,安全性高,还具有较高的临床推广应用价值。

RAGE与阿尔茨海默病关系的研究进展

阿尔茨海默病属于神经系统退行性疾病,该类疾病给社会和家庭带来了沉重的负担,且目前尚无一疗效突破性药物,已经成为一个严重的社会问题和经济问题。Aβ是阿尔茨海默病的重要发病机制之一,通过多种途径介导神经损伤,其中与细胞表面的结合位点结合而引发的病理损害成为当今的前沿认识。一方面,它们可以使Aβ聚集,造成细胞膜的直接损伤;另一方面,它们可以以受体的形式,参与细胞内的信号传导;另外,还可以激活细胞内吞作用,通过溶酶体途径造成细胞损伤。关于与Aβ结合的细胞表面结合位点,晚期糖基化终末产物受体备受瞩目。它是一种多功能受体,属于细胞表面免疫球蛋白家族成员,在神经元、小胶质细胞以及血管内皮细胞上都有表达,Aβ是它的配体之一。研究已证实,它与Aβ相互作用,通过激活细胞内不同的信号通路,对阿尔茨海默病的发生发展发挥重要作用。随着对它的不断深入研究,有望在防治退行性疾病方面产生新的治疗策略与措施。

不同浓度rhBMP-2对MC3T3-E1细胞增殖、ALP活性及成骨分化的影响

目的研究不同浓度rh BMP-2对MC3T3-E1细胞增殖、ALP活性及成骨分化的影响规律。方法 MC3T3-E1细胞接种到培养板24 h后,试验组分别加入1.25、2.5、5、10μg/ml的rh BMP-2进行药物干预,对照组加入全培。试验组应用CCK-8法检测细胞增殖活性,PNPP法检测细胞ALP活性,RT-PCR法检测成骨标志蛋白m RNA的表达情况。结果rh BMP-2浓度为2.5μg/ml时开始促进细胞的增殖(P<0.05),rh BMP-2浓度为5μg/ml时促进作用达到峰值(P<0.05)。rh BMP-2浓度为2.5μg/ml时ALP活性显著提高(P<0.05);rh BMP-2浓度为5μg/ml和10μg/ml时,ALP活性较浓度为2.5μg/ml时继续升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。ALP、COL1-α以及转录因子RUNX-2的m RNA含量均在加入浓度5μg/ml rh BMP-2后明显升高(P<0.05),继续加大rh BMP-2浓度,m RNA含量没有明显增加。结论在研究范围内,rh BMP-2对MC3T3-E1的影响呈浓度依赖性。

γ射线终末辐照对同种异体肌腱病毒灭活效果及生物力学性能影响的研究

目的研究γ射线终末辐照灭菌对同种异体肌腱病毒灭活的效果及对肌腱生物力学性能的影响。方法采用细胞培养法,检测γ射线辐照(照射剂量25 kGy)灭活PRV、VSV、PPV、EMCV、HIV-1病毒的效果。取正常供体手部肌腱12根,直径4~5 mm,随机分为实验组(辐照组)和对照组(新鲜不处理),进行病毒滴度检测,MTS力学试验机检测两组极限拉伸载荷。结果经过γ射线辐照可使污染在同种异体肌腱上的病毒滴度下降超过4 Log值,且盲传3代无病毒检出。辐照前后,同种异体肌腱极限拉伸载荷和组织结构差异无统计学意义(P>0.05)。结论终末辐照灭菌(照射剂量25 kGy)是同种异体肌腱病毒灭活的有效方法,可避免引入其它化学试剂,且该工艺不会影响肌腱的极限拉伸载荷和组织结构。

心复康含药血清对骨髓干细胞转录和分泌SDF-1α的影响

目的 研究心复康含药血清对骨髓干细胞（BMSCs）中间质源性细胞因子α（SDF-1α）mRNA表达和蛋白分泌的影响.方法 采用全骨髓培养法分离和扩增BMSCs,并用流式细胞仪进行鉴定.以定量PCR（q-PCR）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）分别检测含药血清作用后BMSCs中SDF-1α mRNA表达和蛋白分泌的改变情况.结果 经心复康含药血清作用72 h后,SDF-1α mRNA的表达量明显增加,实验组约为对照组的200倍（P＜0.05）;SDF-1α蛋白分泌量增加近1倍（P＜0.05）,其中实验组为（277.561 1±15.651 8）pg/ml,对照组（153.107 1±14.765 1）pg/ml.结论 全骨髓培养法可获得高纯度的BMSCs,含药血清可明显促进SDF-1αmRNA的表达及其蛋白分泌.

75%酒精超声清洗工艺对同种脱钙骨基质性能的影响

目的研究75%酒精超声清洗对同种脱钙骨基质(DBM)结构及成骨性能的影响。方法制备2组DBM,A组(75%酒精超声清洗处理),B组(常规处理),通过HE染色观察脱钙骨基质结构变化。建立裸鼠异位诱导成骨试验模型,通过拍摄X线片观察成骨情况,进而行大体观察和组织形态学观察,并进行成骨反应的组织学评分。结果结构观察:A组和B组均可见骨胶原结构保持完整,无明显破坏,2组无差异。X线观察:术后当天,裸鼠后腿部为正常肌肉显影,术后28 d双侧均可见较亮的显影。大体观察:术后观察裸鼠活动自如,切口愈合良好,脱钙骨基质被肌肉包裹,无肌肉坏死。A、B组无差异。组织形态学观察:术后28 d,HE染色可见A组:植入部位炎症反应较小,肌肉无坏死,脱钙骨基质有少量降解,周围或中间空隙可见一些透明软骨细胞,软骨细胞活跃,并开始分泌形成软骨基质。脱钙骨基质周围甚至有新生骨基质形成,可见成熟的骨细胞。B组与A组组织形态学观察结果大体一致。经组织学评分显示,2组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 75%酒精超声清洗30 min不会对同种脱钙骨基质结构及性能造成损失,可作为脱钙骨基质制备的一道程序。

聚维酮碘作为脱钙骨基质保存剂的实验研究

目的探讨聚维酮碘(PVP-I)作为脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)长期保存剂的可行性。方法选用4种标准菌种进行PVP-I重复5次的灭菌效果验证。分别采用CCK-8法、PNPP法、RT-PCR法检测PVP-I对成骨细胞的增殖、前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)活力以及成骨分化标志分子COL1α、ALP、RUNX2、OCN m RNA表达的影响;裸小鼠肌间隙植入实验验证PVP-I长期保存的DBM成骨活性是否受到影响。结果 PVP-I对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭率均为100%,对大肠杆菌的杀灭率为88.7%;与对照组(1±0.09)相比,高浓度PVP-I抑制细胞生长(0.63±0.03)(P<0.05),低浓度PVP-I不促进也不抑制细胞增殖;PVP-I显著增强成骨细胞的ALP活力,上调COL1α、ALP、RUNX2 m RNA的表达量(1.25±0.15、1.38±0.14、1.23±0.09)(P<0.05),对OCN m RNA的表达影响不明显;裸鼠肌间隙植入实验表明,PVP-I长期保存的DBM其成骨活性不受影响。结论 PVP-I有望被开发成DBM的保存剂。

3种植骨材料在大鼠下颌骨骨缺损修复实验中的长期效果观察

目的评价3种植骨材料在植入大鼠下颌骨缺损模型1年后的成骨作用及降解情况。方法SEM、XRD观察分析材料的结构和组成。选用18只成年SD大鼠,随机分为3组,单侧造直径5 mm的下颌骨全层缺损。A组植入自制煅烧骨,B组植入Bio-Oss骨粉,C组植入Hongros-HA。结果材料结构及组成:A、B组保留了松质骨天然多孔结构,C组呈大小不一的颗粒状,无孔隙结构。3种材料成分均为HA,B组晶体结晶度低于A、C组。术后12个月,所有动物活动良好,取材时皮肤、肌肉形态完好,未见组织坏死。成骨能力:Micro-CT显示,新骨生成率(BV/TV)A组与B组相比差异无统计学意义(P>0.05),均优于C组(P<0.05)。组织学染色可见A、B组缺损大部分被修复,新骨长入较多,C组成骨情况则略差。Lane-Sandhu组织学评分A、B组差异无统计学意义(P>0.05),均优于C组(P<0.05)。降解性能:Micro-CT结果显示,剩余材料占缺损区域的体积百分比(MV/TV)A组与B组相当(P>0.05),均低于C组(P<0.05),HE染色结果也可看到C组材料剩余较多。结论通过低温梯度煅烧工艺制备的煅烧骨材料具有与商品化Bio-Oss相似的结构、成分、成骨潜能及降解性能,为国产异种植骨材料的发展奠定了研究基础。

不同脱脂方法对异种松质骨脱脂效果及免疫原性的影响

目的比较研究不同脱脂方法对异种松质骨脱脂效果及免疫原性的影响,以优选最佳脱脂工艺。方法将成年牛松质骨用4种脱脂方法处理,A组为化学法,B组为超声波清洗法,C组为超临界CO2萃取法,D组用纯化水冲洗(对照组)。观察处理后的异种松质骨大体结构,检测异种松质骨的总脂肪含量、总蛋白含量及力学强度,MTT法检测异种松质骨细胞毒性。将异种松质骨植入小鼠体内后2周检测各组脾脏中淋巴细胞增值率,以及血清IgG、IgM含量。结果A组与C组异种松质骨清洗后效果相当,但明显优于B组。A、B、C组极限载荷低于D组,且C组>A组>B组;A、B、C组总脂肪含量较D组明显降低,且C组<A组<B组;B组总蛋白含量高于A组与C组,差异有统计学意义(P<0.05)。A组与C组总蛋白含量差异无统计学意义(P>0.05)。MTT检测结果发现B组与C组异种松质骨无细胞毒性。B组淋巴细胞增值率与血清中IgG、IgM含量高于A组和C组,差异有统计学意义(P<0.05);而A组和C组淋巴细胞增值率与血清中IgG、IgM含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论超临界CO2萃取法的脱脂效果与化学法相似,且生物相容性优于化学法,对异种骨力学性能无明显影响,是一种较优的脱脂方法。

BMP-2与TBC复合的参数和骨诱导能力的动物活体内评价

目的探讨骨形成蛋白-2(BMP-2)、异种煅烧骨(TBC)复合的剂量以及TBC的粒径对复合材料骨诱导能力的影响。方法制备TBC支架材料(粒径0.300~0.710 mm),分别与不同剂量的BMP-2复合(125μg/g、250μg/g、500μg/g),观察新骨生成情况;以0.710~1.400 mm、0.300~0.710 mm、0.150~0.300 mm 3种粒径TBC为支架材料,分别与500μg/g的BMP-2复合,观察新骨生成情况。结果BMP-2负载量为125μg/g时,无明显新骨生成;BMP-2负载量为250μg/g时,50%的标本观察到新骨生成;当BMP-2负载量为500μg/g时,所有标本均观察好的骨诱导能力。粒径越小,骨小梁数目明显减少,粒径在0.300~1.400 mm的复合材料新骨生成情况更好。结论通过控制BMP-2与TBC复合材料中BMP-2的剂量和TBC的粒径,可保证复合材料具有较好的骨诱导能力。