白介素6受体基因rs4129267位点多态性与汉族儿童哮喘易患性及血清IgE水平的关联研究

背景有研究证实,白介素6受体（IL-6R）基因中的rs4129267位点多态性与哮喘易患性显著相关,但尚无评估rs4129267位点多态性在汉族儿童中分布情况及其与血清IgE水平相关性的研究。目的研究IL-6R基因rs4129267位点多态性与汉族儿童哮喘易患性及血清IgE水平的关系。方法选取2013—2014年于广东省妇幼保健院儿科就诊的哮喘患儿410例为哮喘组,同期选取广东省妇幼保健院住院的非哮喘患儿513例为对照组。提取两组患儿基因组DNA,采用SNa Pshot法对IL-6R基因rs4129267、rs527236128位点进行基因分型,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测两组患儿血清总IgE水平。结果两组患儿rs4129267位点和rs527236128位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡（χ~2=3.264、2.135,P〉0.05）。两组患儿rs4129267位点基因型频率和等位基因频率比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。两组患儿rs527236128位点基因型频率和等位基因频率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。Logistic回归分析结果显示,TT基因型是儿童哮喘的影响因素（P〈0.05）。对照组患儿血清总IgE水平低于哮喘组（P〈0.05）。对照组、哮喘组组内不同基因型患儿血清总IgE水平比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;对照组各基因型患儿血清总IgE水平均低于哮喘组（P〈0.05）。结论 IL-6R基因rs4129267位点多态性与汉族儿童哮喘易患性有关,而与哮喘患儿血清IgE水平无关。

儿童急性坏死性脑病研究进展

儿童急性坏死性脑病(ANEC)以病毒性热性疾病后迅速出现惊厥意识障碍及对称多灶性脑损害为特征。脑损害主要累及双侧丘脑、上脑干被盖、侧脑室周围白质和小脑髓质。并伴不同程度的肝功能异常,有特征的影像学和病理改变。目前仍无特异性治疗,预后较差。

广州地区HCMV临床病毒株UL137基因的结构特征与多态性

【目的】研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代分离株UL137基因的结构特征与基因多态性。【方法】从62份被证实为临床HCMV感染的新生儿尿液标本中分离获得3株低传代临床病毒株,经多重PCR鉴定后分别命名为HCMVD2、D3和D52。对3株临床分离株进行HCMVUL137基因全序列PCR扩增,PCR产物纯化后进行基因克隆,构建HCMVUL137-pMD18-T重组质粒;基因测序;将HCMVUL137基因序列呈报GenBank,并进行基因生物信息学分析。【结果】成功从广州地区新生儿感染HCMV患儿体内分离3株HCMV临床病毒株。克隆测序后呈报GenBank并被收录,收录序列号分别为:DQ180388、DQ180376、DQ180360。通过序列分析,结果显示低传代分离株UL137基因DNA序列高度保守,同源性在96.91%～100%之间,其变异均为碱基替换;编码蛋白均由96个氨基酸残基组成,同源性在90.63%～100%之间,超半数的变异发生在第61～81位氨基酸残基之间;编码蛋白翻译后修饰位点包括PKS、MYS、cAMPs三类,其中4个PKS和44～49位的MYS高度保守,cAMPs位点仅在5株病毒出现;编码蛋白等电点在11.50～12.00之间,呈强碱性。【结论】广州地区临床低传代分离株HCMVUL137基因核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列极为保守,但仍存在一定多态性。提示HCMVUL137ORF可能是一个具有重要功能的基因。

多重PCR方法鉴定人巨细胞病毒临床病毒分离株

目的:应用多重PCR技术鉴定体外培养、分离获得的人巨细胞病毒(HCMV)临床病毒株。方法:以先天性感染HCMV的新生儿为研究对象,采集尿液标本进行病毒分离,将分离获得的临床低传代病毒感染HELF细胞,提取病毒DNA,针对较保守基因IE和LA,设计两对引物,同时扩增IE和LA基因,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析。结果:成功分离获得2株HCMV临床低传代病毒株(D2、D3),经多重PCR同时扩增出209bp(IE)和401bp(LA)目的片段。结论:多重PCR可以作为病毒分离后,基础研究中鉴定HCMV临床病毒株的一种方法。

广州地区HCMV低传代临床病毒株UL143基因的多态性研究(英文)

目的研究广州地区人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代分离株UL143基因的多态性。方法对3株经多重PCR鉴定的HCMV临床低传代分离株进行HCMVUL143基因全序列扩增,扩增产物克隆到pMD18-T载体上测序,并将其序列与GenBank中公布的其它临床分离株UL143基因一起进行分析。结果D3株UL143基因因碱基缺失形成多处终止密码无法产生有功能的蛋白;Toledo株UL143基因开放读码框由279个核苷酸组成,编码蛋白由92个氨基酸残基组成;其它临床分离株UL143基因开放读码框均由252个核苷酸组成,DNA序列比较保守,变异均为碱基替换,编码蛋白由83个氨基酸残基组成,氨基酸序列也很保守,不同临床分离株氨基酸变异率为1.2%～2.4%;HCMVUL143蛋白翻译后修饰位点在除Toledo株之外的所有分离株中均高度保守,没有缺失或新增;不同临床分离株UL143蛋白二级结构有所不同;除Toledo株外,其余分离株UL143蛋白的等电点均为8.75。结论临床低传代分离株HCMVUL143基因DNA及其编码产物的氨基酸序列极为保守,但仍存在一定多态性。

广东省区域性手足口病医疗服务能力现状调查

目的通过调查了解广东省不同地区医疗卫生机构儿童手足口病诊疗服务能力现状,分析存在问题,提出应对建议。方法在全省共21个地级市分层随机抽取78所能提供手足口病医疗服务的医疗卫生机构,并对其进行手足口病医疗服务相关内容进行问卷调查,调查时间为2017年6月1日~12月31日,调查内容包括:儿科病床数、儿科医生数、床位医生比、PICU配置情况、手足口病门诊、病房收治数量。结果珠三角地区儿科病床数、儿科医生数、PICU设置数明显高于广东其他地区医疗机构,各地区高等级医疗机构普遍高于较低等级机构;而地区间、级别间医疗机构床位医生比、手足口病门诊接诊数量差异较小;珠三角地区医疗机构、高等级医疗机构手足口病住院患者明显高于其他医疗机构。结论广东省儿童手足口病服务基本医疗配置存在明显地区性不平衡,珠三角地区医疗机构优于其他地区,而各地区医疗机构承担的基础手足口病医疗服务工作量相近,与不平衡的发展基础形成反差。

多参数预测人巨细胞病毒临床病毒株UL145基因B细胞表位

目的应用多参数预测及分析人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)临床病毒株UL145基因B细胞表位。方法根据人巨细胞病毒UL145基因氨基酸序列预测其二级结构,结合跨膜结构、亲水性、可及性及抗原性方案等参数综合预测UL145基因B细胞表位。结果HCMV pUL145氨基酸等电点为6.64,二级结构以无规则卷为主,1~130位氨基酸均为膜外区域,结合多种预测方法分析提示,88~99位氨基酸序列内可作为HCMV UL145基因的B细胞候选表位。结论多参数预测提示88~99位氨基酸序列为HCMV UL145基因B细胞表位预测序列,为进一步制备相应的抗体提供了重要依据。

广州地区人巨细胞病毒临床低传代株UL141基因的序列特征

目的 UL141基因的结构特征及多态性对发现人巨细胞病毒(HCMV)感染致病性机制具有指导意义。文中旨在研究广州地区HCMV临床低传代株UL141基因的序列特征。方法选取2016年3月至2017年3月在广州医科大学附属广东省妇儿医院儿科就诊的10例HCMV患儿,收集患儿尿液标本,从中分离低传代临床病毒株,应用多重PCR方法鉴定,对其进行HCMV UL141基因全序列扩增、克隆、鉴定、测序,并在Gen Bank搜索HCMV UL141同源序列,行序列分析。结果UL141基因存在UL141a及UL141b 2处开放阅读框架(ORF),分别由315及1017个核苷酸构成,Gen Bank登记号分别为DQl80372和DQl80371。UL141基因全长1277 bp,编码蛋白由338个氨基酸残基组成,UL141a及UL141b开放阅读框架ORF分别为315、1017 bp,其DNA序列比较保守,存在46处位点变异,变异皆为碱基替换,无插入或缺失。HCMV UL141编码蛋白翻译后修饰位点在所有分离株中均比较保守,所有分离株UL141蛋白的等电点均在8.36~8.68之间。结论广州地区HCMV临床低传代分离株UL141基因及其编码的氨基酸序列比较保守,但仍存在一定的多态性,为进一步揭示ULl41蛋白的功能及HCMV感染的致病机制奠定了基础。

新生儿大脑豆纹血管病变的相关因素分析

目的:探讨新生儿豆纹血管病变的相关因素,为减少豆纹血管病变相关神经系统后遗症提供依据。方法:选择广东省妇幼保健院收治的447例新生儿,对其行临床资料搜集、豆纹血管超声检查以及其他相关的检查。采用Logistic回归分析筛选豆纹血管病变的相关因素,P<0.05为差异有统计学意义。结果:单因素Logistic回归分析发现,先天性巨细胞病毒(HCMV)感染、新生儿窒息、先天性心脏病、妊娠期高血压与豆纹血管病变有关(P<0.05)。再对这些因素进行多因素Logistic回归分析显示,先天性HCMV感染、新生儿窒息、先天性心脏病、妊娠期高血压对豆纹血管病变的发生有重要作用(P<0.05)。结论:先天性HCMV感染、新生儿窒息,先天性心脏病、妊娠期高血压是新生儿豆纹血管病变的相关因素。提示临床医生应对存在这些相关因素的新生儿进行豆纹血管的超声筛查,早期干预。

111例广东省重症手足口病死亡病例流行病学分析

目的分析111例广东省重症手足口病死亡病例流行病学特点。方法回顾性分析111例广东省手足口病死亡病例的性别、年龄、高发季节、病原学特点、地域分布、就诊医院等级及病程特点等情况。结果 111例死亡病例中男性占64%,女性占36%,男女之比为1.775∶1。死亡人数主要集中在5岁以下,其中1～3岁占73.9%,明显高于其他年龄段。发病高峰位于每年的4-6月,主要分布于珠三角地区。死亡病例中EV71阳性者明显高于其他病原,占79%。首诊医疗机构约58.7%为镇级及以下医院,而末次就诊医疗机构72.5%为市级及以上医院。死亡病例的病程特点分析显示,发病到出现重症表现平均(2.9±1.7)d,发病到死亡平均(4.2±2.5)d,出现重症表现到死亡平均(1.3±2.1)d,入院到死亡平均(1.2±2.1)d。结论手足口病死亡病例在发病年龄、病原学及高发季节具有其自身特点,死亡病例病程短、病情进展迅速,各级医疗机构需重视对重症的识别,基层医院需及时转诊。

医护人员接种流感疫苗的获益与相关问题

接种流感疫苗是预防流感及其并发症最有效的措施。医护人员是流感暴露的高风险人群,自身患病率高且易导致流感在院内的传播,增加患者患病及重症和死亡的风险。提高医护人员流感疫苗接种率,不仅能降低医护人员流感的患病率、保障流行时期诊疗服务的正常运转,还能减少患者及高危人群重症和死亡的发生,提高全人群的接种率。目前医护人员流感疫苗的接种率普遍较低,其原因主要在于对疫苗存在一定的顾虑及误解,应实施多种策略大力提高医护人员流感疫苗的接种率。

人巨细胞病毒临床病毒株UL148基因的体外表达及功能位点预测

目的 体外获得人巨细胞病毒（human cytomegalovirus, HCMV）临床病毒株 UL148 RNA及探讨其基因功能.方法 将感染HCMV的新生儿尿液接种人胚肺细胞,分离HCMV临床病毒株,并经多重PCR鉴定.扩增UL148基因,经双酶切后克隆入pGEM-T-Easy质粒,构建重组质粒,并置于T7启动子下游,经重组质粒、PCR产物、双酶切产物电泳鉴定及序列测定.克隆成功的质粒以32P标记,进行体外转录RNA.根据UL148序列特征应用生物信息学分析其翻译后修饰位点.结果 成功在体外获得HCMV临床病毒株,经电泳及序列测定证实重组质粒构建成功,在T7 RNA聚合酶作用下,体外获得UL148 RNA.翻译后修饰位点显示UL148基因存在1个与细胞黏附相关的特征序列,1个豆荚外源凝集素β-链标记位点、2个N-豆蔻酰化位点,1个酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点,7个蛋白激酶C磷酸化位点,1个cAMP/cGMP-依赖性蛋白激酶磷酸化位点和2个N-糖基化位点,1个跨膜区域.结论 UL148基因编码产物可能为一个病毒黏附分子,参与宿主细胞的信号转导作用.

广州地区先天性感染婴儿人巨细胞病毒UL145基因多态性研究

目的:研究广州地区先天性感染患儿体内巨细胞病毒(HCMV)临床低传代分离株UL145基因序列的特异性和多态性。方法:从广州地区先天性HCMV感染患儿体内分离HCMV临床病毒株。应用多重PCR方法鉴定HCMV后,对UL145基因扩增、克隆、鉴定及测序;应用生物信息学技术对临床HCMV病毒株的UL145基因进行序列分析,并分析UL145编码蛋白的理化性质及翻译后修饰位点。结果:成功地从先天性患儿体内分离出2株HCMV低传代病毒株(D2、D3),经鉴定后的UL145基因序列被GenBank收录,序列号为:DQ180367,DQ180381。分析显示,UL145的DNA和氨基酸序列的变异率分别是0.7%～1.5%和0.7%～2.2%;其编码蛋白等电点为6.35～6.64;该基因存在1个PKC磷酸化位点和2个CKⅡ磷酸化位点。结论:来自广州感染婴儿的HCMVUL145基因及其编码的氨基酸序列极为保守,但仍具有一定的多态性,这在HCMV临床感染与致病机制研究中具有重要意义。

应用外部引导序列切割人巨细胞病毒UL148 RNA的研究

目的 研究人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus,HCMV）临床病毒株UL/b＆#39;区域UL148基因功能及抗HCMV治疗新策略,应用DNA性质外部引导序列（External guide sequences,EGS）在体外抑制UL148 RNA的表达.方法 应用RNA structure生物软件模拟UL148 RNA二级结构,选择二级结构相对简单的区域设计EGS,并合成EGS核苷酸序列.应用PCR方法分别扩增UL148及M1RNA基因,克隆至T7启动子下游,在T7 RNA聚合酶的作用下,体外转录UL148 RNA及M1RNA,其中UL148以32p标记并进行体外转录.混合EGS、M1RNA及UL148 RNA于切割反应液中,反应1h后,进行尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,Typhoon扫描仪观察结果.结果 根据UL148 RNA二级结构选取第58 ～72位碱基作为EGS结合区域,其切割位点位于57位,针对此区域设计EGS57,并在体外进行EGS57与UL148 RNA结合的二级结构的模拟,可形成M1RNA天然作用底物类似的茎环结构.在T7 RNA聚合酶的作用下,分别在体外转录M1RNA及UL148 RNA,其大小均与预期相符.经切割反应,可获得与预期切割位点相符的切割条带.结论 EGS57可切割UL148RNA,其切割位点准确,与预期相符.该研究为进一步探讨UL148基因功能提供有效基因沉默工具.

体外快速获得核酶P中M1RNA基因的研究

目的在体外转录快速获得原核生物来源核酶P的核心催化亚基M1RNA。方法以大肠埃希菌DH5α菌液为模板,应用聚合酶链式反应的方法扩增M1RNA基因,并将该基因置于T7启动子下游,其聚合酶链式反应产物经电泳及测序鉴定。以M1RNA基因为模板,以32P标记,在T7 RNA聚合酶的作用下体外转录M1RNA。将产物以尿素变性聚丙烯酰胺凝胶分离并观察结果。结果应用聚合酶链式反应的方法从大肠埃希菌基因组扩增M1RNA基因,经凝胶电泳观察及测序鉴定,证实成功在体外扩增M1RNA基因,并置于T7启动子下游。在T7 RNA聚合酶的催化下,应用尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离产物,结果显示377nt处可见与预期相符的条带,证实成功在体外获得M1RNA。结论成功在体外快速获得具有独立催化功能的M1RNA,基于此的基因沉默技术具有发展成新型反义核酸药物的良好前景。

临床低传代人巨细胞病毒株UL148开放阅读框mRNA的表达与鉴定

目的研究广州地区人巨细胞病毒（HCMV）临床病毒株特有基因UL148的结构，分析其结构多态性与HCMV先天性感染致病的关系；研究UL148的表达情况，探讨其产物可能的功能及在致病机制中的可能作用。方法采集广州地区新生儿HCMV感染患者尿液标本进行病毒分离培养，从分离的病毒株中提取病毒DNA，扩增鉴定UL148基因片段；TA克隆，基因测序；抽提病毒总RNA，用RT-PCR方法鉴定UL148基因mRNA表达情况。结果成功分离到HCMV低传代临床株，获得UL148基因全序列。RT-PCR产物检测582bp大小的特异性条带，证实了UL148基因mRNA的表达。结论广州地区临床低传代HCMV分离病毒株存在UL148基因结构，证实UL148开放阅读框是具有mRNA水平表达的基因结构。

轻度持续性支气管哮喘患儿单用孟鲁司特的疗效

目的评估在实际生活条件影响下轻度持续性支气管哮喘(哮喘)患儿单独使用孟鲁司特进行控制治疗的效果。方法选取2～14岁在社区进行治疗的轻度持续哮喘患儿,进行前瞻性、单组、非盲观察性研究。孟鲁司特每天1次,2～5岁年龄组每次4 mg,6～14岁年龄组每次5 mg,持续12周,患儿通过监护人员给药,采取门诊复诊、随访的方式进行治疗及评估。分别在研究的0、4、8、12周,对过去7 d的日间症状、夜间症状进行严重程度评分,对峰值流速(PEF)、短效β2受体激动剂使用量进行检测和记录。采用SPSS 16.0统计软件进行统计分析。结果 2个年龄组日间症状、夜间症状严重程度评分在各随访时间点的评分逐步降低,各相邻时间点均数差异有统计学意义(P<0.05);短期使用短效β2受体激动剂的量明显下降,从第0周到第4周观察到显著的减少量(P<0.05);PEF不断改善,终点观察值(第12周)与起始值(第0周)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论对轻度持续哮喘患儿在社区实际生活条件影响下单用孟鲁司特仍可以有效控制哮喘症状的发作。

广州地区人巨细胞病毒临床低传代株UL138基因的序列特征及多态性分析

目的研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒（HCMV）临床低传代分离株UL138基因序列特征与多态性。方法从10例被证实为临床HCMV感染的新生儿尿液标本中分离HCMV低传代临床病毒株，进行多重PCR鉴定。对临床分离株进行HCMVUL138基因扩增、克隆、鉴定、测序及呈报GenBank；同时在GenBank搜索HCMVUL138同源序列，行序列分析，应用生物信息学在线软件分析UL138基因翻译后修饰位点、二级结构及等电点。结果成功分离3株HCMV临床病毒株，分别命名为HCMVD3、D2和D52。克隆测序后呈报GenBank并被收录。收录序列号分别为：DQ180375、DQ180387和DQ180359。分析结果显示在HCMV临床低传代D3、D2和D52病毒株UL138基因全序列841个碱基中，存在16个位点变异，可能编码的蛋白质氨基酸残基总数为169个，其基因序列高度保守，核苷酸变异均为碱基替换，无插入或缺失，碱基替换导致了7处氨基酸的改变。HCMVUL138蛋白翻译后修饰位点在除Toledo株外的所有分离株中均高度保守；所有分离株UL138蛋白的预测等电点均为6．51。结论广州地区感染婴儿的HCMVUL138基因及其编码的氨基酸序列极为保守，但仍具有一定的多态性，这在HCMV临床感染与致病机制研究中具有重要意义。

广州地区人巨细胞病毒临床低传代株UL136基因的序列特征及多态性

目的研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒（HCMV）临床低传代株UL136基因的序列特征与基因多态性。方法从10例广州感染新生儿体内分离获得2株（D2、D3）临床HCMV分离株，经多重PCR鉴定后进行UL136基斟全序列扩增。PCR产物纯化后进行基因克隆，构建HCMVUL136-pMD18-T重组质粒。经基冈测序及应用生物信息学分析方法，分析其核酸序列稳定性、编码蛋白质的二级结构与特衙。结果成功分离2株HCMV临床分离株，测序结果显示，D2、1）3及与GenBank中公布的11株临床分离株（4J、51C、39J、33J、63J、22M、10J、32C、29C、27C、Toledo）中，UL136序列高度保守。同源性分析显示在UL136全基因序列1019个核苷酸中，存在30个位点变异，所有的变异均为碱基替换，无插入及缺失突变。编码蛋白的氨基酸序列也高度保守，240个氨基酸残基巾，不同临床分离株氨基酸变异率为1．6％～3．7％。不同分离株的UL136蛋白巾参与形成二级结构的氨基酸数目及等电点不同。进化树分析结果显示D2和D3均属于1a群。结论广州地区临床低传代分离株HCMVUL136基因核苷酸序列及其氨基酸序列极为保守，但仍存在一定多念性。其基因的稳定性提示HCMVUL136开放阅读框（ORF）可能是一个具有重要功能的基因。其编码后修饰位点提示UL136可能与膜受体介导的细胞信号转导通路有关。

智力发育迟缓患儿染色体亚端粒区研究

目的联合应用多重连接依赖探针扩增技术（multiplex ligation—dependent probe amplmcation，MLPA）对不明原因智力发育迟缓（mental retardation，MR）患儿进行病因学研究，探讨本地区MR患儿亚端粒区异常与表型的关系。方法将2009年7月至2011年12月在广东省妇幼保健院就诊的原因不明的67例MR患儿纳入研究，采集患儿及其父母外周血，提取基因组DNA，通过MLPA筛查，检测亚端粒区异常情况，用2种MLPA试剂盒（P070和P036）进行相互验证，异常者进一步分析其父母染色体亚端粒区情况，确定是否新发；根据检测结果与临床表现，分析染色体亚端粒区重排与临床表型的相关性。结果67例MR患儿纳入研究，男42例，女25例；年龄6个月-15岁；IQ20—70分，轻度MR（IQ≥50分）47例，中重度MR（IQ〈50分）20例；7例有抽搐史，体表畸形24例，脏器畸形18例。经MLPA检测发现4例亚端粒拷贝数异常，检出率5．97％，4例均为新发病例。亚端粒异常阳性和阴性患儿的性别比例、年龄、是否有抽搐病史等进行比较，差异均无统计学意义（P均〉0．05）。中重度MR患儿亚端粒异常比例（20．0％）较轻度高；阳性患儿在生长发育、体格畸形及脏器畸形等方面的异常比例均较阴性患儿高，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论染色体亚端粒区异常可能是不明原因MR的重要病因之一；原因不明智力低下者，应对其亚端粒区进行检测，为寻找可能的病因提供线索，为遗传咨询提供依据。