肠内营养对梗阻性黄疸幼鼠肠黏膜Bax、Bcl-2蛋白表达的影响及意义

目的探讨肠内营养对梗阻性黄疸幼鼠肠黏膜中Bax、Bcl-2表达的影响及意义。方法将40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、梗阻性黄疸(OJ)组、OJ+能全素组,免疫组织化学法检测肠黏膜Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果OJ组大鼠肠黏膜Bcl-2表达降低,Bax表达升高,Bcl-2/Bax比值下降(均P<0.01);OJ+能全素组大鼠Bcl-2表达增加(P<0.05),Bax表达降低(P<0.01),Bcl-2/Bax比值升高(P<0.01)。结论梗阻性黄疸时肠黏膜细胞凋亡显著增加,应用肠内营养对肠黏膜损伤有保护作用,其机制可能是与上调肠黏膜Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白有关。

电针对脊髓损伤后星形胶质细胞增生的影响

目的探讨电针治疗脊髓损伤的机理。方法选用成年Wistar大鼠,Allen氏法制备脊髓损伤模型,分别应用督脉电针治疗3d、1w、2w或4w,以正常组和损伤组作对照。应用电镜、免疫组化、原位杂交显色观察星形胶质细胞的形态、数量的变化;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测损伤脊髓星形胶质细胞特异性标志蛋白胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA表达变化。结果电镜观察,术后3d,损伤组星形胶质细胞肿胀明显;1w时见反应性增生,体积增大,数量增加;4w时,形态基本正常。电针组胶质反应轻,线粒体、核糖体增多,常见吞噬现象。免疫组化见,同一动物星形胶质细胞数灰质多于白质,尾侧多于头侧;组间比较阳性细胞数损伤组明显多于电针组,且损伤范围大,胶质界膜明显。原位杂交结果与免疫组化结果类似。电泳结果表明损伤早期电针组GFAPmRNA表达明显低于损伤组。结论电针治疗可抑制脊髓损伤后星形胶质细胞反应性增生,防止胶质瘢痕形成,创造有利于神经再生的微环境。

口腔鳞癌中let-7a、miR-21和miR-27a的表达及其作用

目的探讨let-7a、miR-21和miR-27a在口腔鳞状细胞癌(OSCCs)中的表达及其作用。方法采用地高辛标记的锁定核酸修饰的miRNA探针进行原位杂交,对5例正常口腔黏膜组织和30例口腔鳞癌及其癌旁组织中let-7a、miR-21、miR-27a的表达进行定性、定位研究,通过图像分析对实验结果进行了半定量分析。结果let-7a、miR-21和miR-27a分别在40%(2/5)、80%(4/5)、40%(2/5)的正常口腔黏膜组织中有微弱表达,而在肿瘤组织和癌旁组织均有不同程度的表达。这3种miRNAs在口腔鳞癌组织中的表达均明显高于其癌旁组织和正常组织(P<0.01),let-7a和miR-27a在癌旁组织中的表达明显高于正常组织(P<0.01),但miR-21在癌旁组织和正常组织中的表达差异无显著性(P>0.05)。这3种miRNAs的表达在不同年龄、不同性别及有无淋巴结转移的口腔鳞癌患者之间的差异均无显著性(P>0.05)。miR-27a在中低分化口腔鳞癌组织中的表达明显高于其在高分化肿瘤组织中的表达(P<0.05),而let-7a和miR-21的表达与肿瘤分化程度无关(P>0.05)。相关分析发现,OSCCs中let-7a与miR-21的表达之间具有相关性,而miR-27a与let-7a和miR-21表达之间均无相关性。结论 Let-7a、miR-21和miR-27a过度表达在口腔鳞癌发生发展中具有一定作用,miR-27a可能是与口腔鳞癌分化程度有关的一个分子标志。在OSCCs中let-7a和miR-21之间可能存在一定联系。

Toll样受体4及Tollip蛋白在大肠癌中的表达及临床意义

目的探讨Toll样受体4(TLR4)及Tollip蛋白在大肠癌发生、发展过程中的作用。方法采用免疫组化SP法检测TLR4和Tollip蛋白在51例大肠癌癌组织和20例癌旁正常组织中的表达,并分析两者与大肠癌临床分期、病理分级的相关性。结果TLR4及Tollip蛋白在大肠癌组织中的表达显著强于癌旁正常组织,且两者表达随肿瘤临床病理分期进展及病理分级降低而升高(P<0.01)。结论TLR4、Tollip蛋白在大肠癌发生、发展过程中发挥一定免疫作用,可作为判断大肠癌进展程度的参考指标。

雌激素对雌鼠抑郁样行为和海马BDNF表达的影响

目的检测雌鼠不同性周期时的抑郁样行为、海马脑源性神经营养因子(BDNF)的表达量及雌激素剥夺和补加对抑郁样行为和BDNF表达的影响,阐明雌激素对抑郁症发病和治疗的调控作用。方法雌性C57小鼠利用阴道涂片染色法区分为发情前期和发情间期组,采用强迫游泳行为评价两组雌鼠的抑郁样行为,并通过Real-time PCR和Western blot方法检测2组小鼠海马中总BDNF mRNA和蛋白表达水平。运用糖水偏好方法检测基础条件下和慢性不可预知应激(CUS)条件下卵巢摘除(OVX)后雌鼠的抑郁样行为。最后,在CUS条件下,利用糖水偏好、强迫游泳及Real-time PCR方法分别检测雌激素补加对雌激素剥夺所诱导的抑郁样行为和海马中总BDNF mRNA表达的影响。结果强迫游泳行为结果显示发情间期雌鼠不动时间高于发情前期(P<0.05)。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示发情间期海马中总BDNF mRNA和蛋白的表达量比发情前期显著降低(P<0.05)。糖水偏好结果显示:基础条件下,与假手术组相比,卵巢摘除组糖水偏好值没有变化(P> 0.05),CUS条件下,糖水偏好值降低(P<0.05)。糖水偏好和强迫游泳结果显示外源性补加雌激素能翻转CUS条件下OVX所诱导的糖水偏好值的降低和不动时间的增加。实时荧光定量PCR结果显示:与假手术组相比,OVX后海马BDNF总mRNA水平降低(P<0.05),而外源性补加雌激素后海马BDNF总mRNA水平恢复(P<0.05)。结论雌鼠性周期能影响抑郁样行为和海马BDNF的表达,雌激素缺失能增加小鼠对CUS诱导的抑郁样行为的易感性;而外源性雌激素补加能翻转CUS条件下OVX所诱导的抑郁样行为和海马BDNF mRNA表达的降低。

Trim5α对TAB2诱导的NFκB启动子荧光素酶报告基因活性的影响

目的构建人Trim5α的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Trim5α,观察其对TAB2诱导的NFκB启动子荧光素酶报告基因活性的影响。方法提取Hela细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增出Trim5α基因编码区全长片段,克隆到5`-Flag-pcDNA3.1(+),经酶切、菌落PCR及测序进行鉴定。转染HEK293T细胞,Western blot检测Trim5α蛋白的表达,双萤光素酶报告基因系统检测Trim5α对TAB2诱导的NFκB报告基因活化的影响。结果经鉴定,成功构建Trim5α表达载体,该载体可在HEK293T细胞中表达Trim5α,Trim5α对TAB2诱导的NFκB报告基因活化无显著影响。结论 Trim5α对TAB2诱导的NFκB报告基因活化未见显著影响,初步建立了Trim蛋白对NFκB报告基因影响的功能筛选平台。

异丙酚预处理对拟AD模型大鼠海马CA1区ChAT表达的影响

目的观察异丙酚预处理对拟阿尔茨海默病(AD)大鼠海马CA1区胆碱乙酰转移酶(cho- line acetyl-transferase,ChAT)表达的影响,分析异丙酚的脑保护作用。方法30只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、拟AD模型组(简称模型组)和异丙酚预处理组(简称异丙酚组)。模型组、异丙酚预处理组在大鼠海马CA1区微量注射冈田酸(Okadaic acid,OA),建立拟AD大鼠模型。异丙酚预处理组大鼠于拟AD模型制作前30 min,腹腔注射异丙酚100 mg/kg。然后用免疫组化方法观察大鼠海马CA1区ChAT的表达。结果30只大鼠顺利完成全部实验的有27只,模型组和异丙酚预处理组有2只大鼠死亡、1只出现偏瘫无法进行余下实验,这可能与动物的个体差异不能耐受实验有关。随机取27只大鼠作为结果分析样本(每组9只)。①模型组与对照组大鼠相比:海马CA1区ChAT免疫组化阳性表达明显减少(P<0.05);②异丙酚预处理组与模型组大鼠相比:海马CA1区ChAT免疫组化阳性表达明显增多(P<0.05)。结论拟AD模型建立前30 min异丙酚预处理能增强ChAT的表达,有明显的脑保护作用。

肠内营养对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡及增殖的影响

目的探讨肠内营养(EN)对梗阻性黄疸(OJ)大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡及TGF-β1表达的影响及意义。方法 40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、OJ组、OJ+能全素组。OJ+能全素组给予肠内营养10 d,总能量提供为630kJ/(kg.d),含氮量1.0 g/(kg.d)。TUNEL法检测肠黏膜上皮细胞凋亡率,免疫组织化学法检测肠黏膜TGF-β1的表达。结果 OJ+能全素组肠黏膜细胞凋亡指数低于OJ组(P﹤0.05),OJ组大鼠肠黏膜TGF-β1阳性细胞表达显著减少(P<0.01)。OJ+能全素组大鼠肠黏膜TGF-β1阳性细胞表达与OJ组比较明显增加,差异显著(P<0.01)。结论肠内营养可抑制肠黏膜上皮细胞凋亡,促进肠黏膜上皮细胞TGF-β1分泌,维持肠黏膜屏障的完整性,从而防止OJ时细菌和内毒素的移位。

指掌侧固有动脉的断层观测

目的观察国人手指掌侧固有动脉的管径和截面积,以期为临床提供数据。方法用27例成人手指作组织切片后,取近侧、中间和远侧指横纹及相邻指横纹中点处的横断面切片,对指掌侧固有动脉管径和截面积进行了观测。结果指掌桡侧固有动脉多出现在断面中的4、5区,指掌尺侧固有动脉多位于8、9区内;拇指在Ⅰ、Ⅱ断层上,动脉的外径、截面积桡侧大于尺侧,在Ⅲ断层两者相仿;示指、中指管径、截面积皆为尺侧大于桡侧;环指、小指管径、截面积平均值桡侧大于尺侧。结论在临床指掌侧固有动脉吻合时,应注意先吻合优势动脉。

黄芪对梗阻性黄疸幼鼠肝细胞TNF-α及ICAM-1表达的影响及意义

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在梗阻性黄疸(OJ)肝细胞损伤中的作用,以及黄芪对OJ幼鼠肝细胞TNF-α及ICAM-1表达的影响及临床意义。方法将90只Wistar大鼠随机分为正常对照组、OJ组、OJ+黄芪(A)三组,OJ+A组给予黄芪注射液250mg/100g体质量腹腔注射,作用7d后应用放射免疫法检测各组血清TNF-α含量,免疫组织化学法检测肝细胞TNF-α、ICAM-1的表达。结果 1血清检测:ALT在OJ及OJ+A明显高于对照组,在OJ组明显高于OJ+A组;DBIL在OJ组与OJ+A无显著差别。2OJ组及OJ+A组血清TNF-α含量明显高于正常对照组;OJ组实验鼠血清TNF-α高于OJ+黄芪组;3TNF-α及ICAM-1在肝细胞的表达:OJ组及OJ+A组的表达较正常对照组明显增强,OJ组表达强于OJ+A组。结论本研究结果表明OJ大鼠出现肝功能损害,肝细胞TNF-α、ICAM-1表达增强;应用黄芪有助于减轻OJ所致的肝功能损害,对肝细胞有保护作用,其机制可能与降低肝细胞内TNF-α、ICAM-1表达有关。

神经生长因子和神经节苷脂GM1联合应用对鼠基底前脑胆碱能神经元的保护作用

目的探讨神经生长因子(NGF)和神经节苷脂GMl联合应用对基底前脑胆碱能神经元是否具有延缓退变的作用。方法实验分为NGF组、NGF+神经节苷脂GMl组和单纯对照组。取孕20 d SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于24孔培养板中,按分组加入NGF、NGF+神经节苷脂GMl和不含神经营养因子的DMEM培养液,分别于体外培养12、18、24、30 d后进行乙酰胆碱酯酶组织化学反应。显微镜下计数各孔中乙酰胆碱酯酶阳性神经元数,每孔随机测量和计数20个乙酰胆碱酯酶阳性神经元的平均胞体直径、发出的突起数和最长突起长度。数据用方差分析和SNK检验进行统计学处理。结果在培养的4个时期,NGF组和联合组的各项数据均明显优于单纯对照组,神经节苷脂GMl+NGF组的各项数据,特别是最长突起长度优于单独使用NGF组。结论NGF和神经节苷脂GMl联合应用及NGF单独应用不仅对体外培养的胚胆碱能神经元发育生长具有促进作用,而且还可延缓体外长期培养的人鼠胚基底前脑胆碱能神经元的退变;联合应用效果更佳。

湿润烧伤膏联合表皮细胞生长因子修复兔膝关节软骨缺损的实验研究

目的:观察湿润烧伤膏(MEBO)联合表皮细胞生长因子(epidermal growth factor,EGF)对兔膝关节局部全层软骨缺损的修复作用。方法:30只新西兰大白兔,制成兔膝关节软骨缺损创面。按治疗方法不同随机分为三组,A组:MEBO+EGF组,B组:EGF组,C组:庆大霉素对照组。分别于术后4、8和12周每组各处死3只动物,取材进行大体、组织学及免疫组化染色观察,根据关节软骨组织学计分标准进行评分,数据输入SPSS11.0软件统计分析,比较各组的评分差异是否具有统计学意义。结果:MEBO+EGF组为透明软骨样修复,而单纯EGF组和对照组为纤维性修复;对术后12周大体及各阶段组织学形态评分结果示,MEBO+EGF组明显优于EGF组和对照组(P<0.05);EGF组优于对照组(P<0.05)。结论:MEBO联合EGF对兔膝关节全层软骨缺损有修复作用。

巨细胞病毒感染与女性不孕的相关性研究

目的研究巨细胞病毒感染与女性不孕的相关性。方法随机选取了300例女性不孕患者作为研究组,300例孕前健康查体患者作为对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中的抗HCMV IgM抗体。结果研究组中45例阳性,阳性率为15.0%;对照组中7例阳性,阳性率2.3%,两组比较,差异非常显著(P<0.01)。结论女性不孕症的发生与HC-MV感染有较密切的关系。

梗阻性黄疸合并肌肉减少症的相关影响因素

目的 调查梗阻性黄疸患者合并肌肉减少症(SA)的发生率,并探讨其相关影响因素。方法 纳入梗阻性黄疸患者104例。按照2019年亚洲肌少症工作小组(AWGS)诊断标准将其分为SA组32例和无SA组72例。收集并比较两组患者一般临床资料、人体成分分析、生化指标。采用多因素二元logistic回归分析模型筛选梗阻性黄疸合并SA患者的危险因素。结果 梗阻性黄疸患者SA占比为30.76%。SA组与无SA组患者营养评估风险评分、体质量、握力、体质量指数(BMI)、去脂体质量、四肢骨骼肌指数、细胞外水分比率(ECW/TBW)、上臂肌肉围度、相位角、白蛋白、预后营养指数(PNI)和血红蛋白比较,P<0.05。握力和PNI是梗阻性黄疸患者合并SA的保护因素。不同黄疸严重程度患者SA发生率比较,P<0.05。结论 梗阻性黄疸患者合并SA的发生率较高,SA的发生与PNI降低、握力降低和黄疸严重程度有关。

Trim6真核表达载体的构建及表达

目的:构建人Trim6的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Trim6,并观察其在HEK293T细胞中的表达。方法:提取HeLa细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增出Trim6编码区全长基因片段,克隆到pcDNA3.1(+),通过酶切、菌落PCR及测序进行鉴定。将该载体转染HEK293T细胞,用蛋白印迹检测Trim6蛋白的表达。结果:通过酶切、PCR及测序鉴定,成功构建人Trim6表达载体,该载体可以在HEK293T细胞细胞系中表达Trim6。结论:构建Trim6真核表达载体pcDNA3.1(+)-Trim6,为研究Trim6在固有免疫应答中的作用奠定了基础。

脑源性神经营养因子对烧伤大鼠血清引起基底神经元损伤的保护作用

目的观察脑源性神经营养因子(BDNF)对于烧伤大鼠血清造成基底神经元损伤的保护作用。方法取出生后1d乳鼠前脑基底神经元培养,随机分为正常对照组、损伤组(烧伤大鼠血清损伤组)、BDNF保护组。测定烧伤大鼠基底神经元NO和LDH含量;给予原代培养基底神经元不同浓度BD-NF24h后,加入不同浓度烧伤大鼠血清,测定细胞存活率和培养液中NO含量。结果大鼠烧伤后基底组织NO和LDH含量明升高,烧伤大鼠血清可引起培养的基底神经元存活率下降,培养液中NO含量升高;BDNF能降低基底组织中NO和LDH的含量,提高培养的基底神经元的存活率,减少培养液中NO含量,其作用呈剂量依赖性,BDNF对神经元存话率的影响与NO含量呈显著负相关。结论BDNF对烧伤大鼠血清引起的基底神经元损伤有保护作用,其作用机制可能是通过抑制NO的神经毒性。

迷走神经结状神经节与心肌细胞联合培养的动态观察

目的探讨迷走神经结状神经节与心肌细胞之间的联系与作用方式。方法体外联合培养心肌细胞与迷走神经结状神经节,采用相差显微镜观察两者联合培养不同时间的活细胞生长状况。结果联合培养24～48h,可见结状神经节组织块周围有神经元迁出,组织块长出的神经纤维呈放射状向四周延伸。联合培养72～96h,得到具有选择性结状神经节神经元支配的心神经纤维在单层分散的心肌细胞表面相互交织成网状,并可见有神经终末终止于分散培养的心肌细胞的表面。联合培养7d后,单纯培养心肌细胞逐渐停止搏动并变性、死亡,而联合培养中心肌细胞仍搏动良好。结论联合培养的心肌细胞诱导了结状神经节神经元的迁移,并且神经元与心肌细胞之间可能通过神经-肌肉接头的方式进行联系。