动脉粥样硬化靶向适配子的亲和力筛选

目的：筛选动脉粥样硬化高亲和力适配子,为动脉粥样硬化靶向引导物的体内应用提供实验基础。方法将前期研究获得的一组巨噬细胞源性泡沫细胞适配子中的12个适配子进行生物素标记,采用酶联寡聚核苷酸吸附试验（ELONA）方法测定其亲和力（Kd）,采用高脂方法建立载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）动脉粥样硬化模型,将亲合力最高的适配子Cy5进行荧光标记,激光共聚焦显微镜下观察其与动脉粥样硬化病变组织的结合能力。结果12个巨噬细胞源性泡沫细胞的适配子均具有较好的亲和力,解离平衡常数（Kd值）范围在4.33-39.58 nmol/L之间,其中9号适配子（Apt9）的亲和力最高,Kd值为（4.33±0.33）nmol/L,体内亲和力检测发现Apt9能特异性结合ApoE-/-动脉粥样硬化血管斑块病变组织。结论筛选的Apt9适配子能与巨噬细胞源性泡沫细胞和动脉粥样硬化病变血管组织特异性结合,可以用于进一步的体内研究。

人单核细胞THP-1源性泡沫细胞内雷帕霉素含量测定的HPLC法的建立及应用

目的:建立人单核细胞THP-1源性泡沫细胞内雷帕霉素(RAPA)含量的测定方法,研究RAPA靶向制剂(RAPA-NP-Apt)对泡沫细胞的靶向作用。方法:以氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1细胞建立泡沫细胞模型,取200 ng/m L的RAPA和200、400、800ng/m L的RAPA-NP-Apt与泡沫细胞共同孵育60 min。采用高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内RAPA含量,色谱柱为Diamonsil C18,流动相为乙腈-水(90∶10,V/V),流速为1.0 m L/min,柱温为40℃,检测波长为278 nm,进样量为20μL。结果:RAPA检测质量浓度线性范围为50~6 400 ng/m L(r=0.999 96),平均回收率为98.72%(RSD=0.62%,n=3),日内、日间RSD均不大于6.15%(n=6),稳定性试验的RSD<2%(n=6),重复性试验的RSD=1.64%(n=6)。RAPA和低、中、高质量浓度的RAPA-NP-Apt与泡沫细胞共孵育后RAPA的含量分别为12、43、98、140 ng/10~6个细胞。结论:本方法操作简单,稳定性和重复性好,可用于泡沫细胞内RAPA的含量测定。RAPA-NP-Apt可提高RAPA对泡沫细胞的靶向作用。

适配体介导的MRI-As靶向造影剂的动物体内实验

目的合成一种靶向于动脉粥样硬化（As）病变的核磁共振成像（MRI）纳米造影剂,为开发新型动脉粥样硬化MRI诊断技术提供实验依据。方法运用自主研发的对泡沫细胞具有靶向性的寡合苷酸适配体PM1,与四氧化三铁（Fe_3O_4）纳米粒耦联,制备出具有靶向作用的MRI造影剂,命名为MRI-As。用高脂饲料饲养建立载脂蛋白E基因敲除（ApoE^（-/-））小鼠As动物模型,苏丹红Ⅳ染色鉴定主动脉As病变。MRI成像仪检测MRI-As造影剂对As小鼠斑块MRI成像的影响。结果 ApoE^（-/-）小鼠模型动物MRI显像可以观察到主动脉壁毛糙,As病灶呈高信号亮点,与周围组织形成良好对比,中心信号较高,较均匀,边缘较清楚。注射MRI-As造影剂后,As病变区信号强度呈下降趋势,管壁不光滑,呈多发斑点状信号的缺损。对照组动物注射MRI-As造影剂后,血管壁信号强度无明显变化。结论 MRI-As造影剂对As病变能起到主动靶向作用,利用Fe_3O_4纳米粒对As病变的阴性对比效果,显著提高了As病变的MRI图像分辨率,具有As MRI影像的新型、快速、高效、无创、无辐射造影剂的潜质。

脐带间充质干细胞来源的外泌体通过抑制上皮间质转化缓解肺纤维化

目的研究人脐带间充质干细胞外泌体(hUCMSC-EXOs)的抗纤维化作用及其潜在机制。方法采用随机数字表法将24只C57 BL/6小鼠平均分为4组,6只/组。空白组:气管内注射生理盐水(3 mg/kg);肺纤维化组:气管内注射1.5 mg/mL博来霉素溶液(生理盐水配成,3 mg/kg);EXOs1组:气管内注射1.5 mg/mL博来霉素溶液(3 mg/kg)和hUCMSC-EXOs(造模第2天尾静脉注射,100μg/250μL);EXOs2组:气管内注射1.5 mg/mL博来霉素溶液(3 mg/kg)和hUCMSC-EXOs(造模第11天尾静脉注射,100μg/250μL)。造模后21 d处死小鼠,取小鼠双侧肺组织,计算肺系数,分别通过HE染色和Masson染色进行肺组织病理学和胶原蛋白沉积检查,ELISA实验检测血清中TGF-β1的表达水平,免疫组化法检测vimentin、E-cadherin和p-Smad2/3的表达水平。在体外A549细胞模型上,CCK8实验观察hUCMSC-EXOs对细胞增殖的影响,Western blotting观察hUCMSC-EXOs对p-Smad2/3、vimentin和E-cadherin的表达水平的影响。结果hUCMSC-EXOs显著降低肺纤维化小鼠的肺系数(P<0.05)、改善肺组织切片胶原沉积和肺组织病理变化,减少小鼠TGF-β1的表达(P<0.05),抑制p-Smad2/3、vimentin的表达而增加E-cadherin的表达,且外泌体一组的治疗效果优于外泌体二组;hUCMSC-EXOs对细胞增殖无明显影响(P>0.05),且可抑制p-Smad2/3、vimentin的表达而促进E-cadherin的表达。结论hUCMSC-EXOs可以通过抑制TGF-β1/Smad2/3信号通路激活的上皮-间质转化而缓解小鼠肺纤维化程度,且在第2天给予缓解效果更加明显。

血栓弹力图与传统凝血指标对妊娠期糖尿病孕妇凝血功能的监测价值比较

目的:对比血栓弹力图与传统凝血指标对妊娠期糖尿病(GDM)孕妇凝血功能的监测价值。方法:选取2019年1月至2020年11月我院收治的86例GDM患者作为观察组,将同期常规孕检的70名健康孕妇作为对照组,两组均接受传统凝血指标检测与血栓弹力图(TEG)监测,对比两组各项检测结果,分析TEG与传统凝血指标的相关性。结果:观察组纤维蛋白原(FIB)、血小板(PLT)高于对照组,活化部分凝血酶时间(APTT)低于对照组,组间差异经统计学检验显示P<0.05,但两组在凝血酶原时间(PT)、D-二聚体(D-D)方面的差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者凝血时间(K值)、反应时间(R值)低于对照组,Angle、最大振幅(MA)及凝血综合指数(CI值)高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示Pearson相关性分析显示PLT、FIB与K值负相关,与Angle、MA、CI值呈现出明显正相关(P<0.05)。结论:TEG指标能够反映出GDM孕妇凝血功能情况,较传统凝血指标预测价值更高,可作为凝血功能指标监测的辅助手段,为GDM孕妇早期治疗提供参考。

脐带间充质干细胞对脓毒症小鼠的器官保护作用及其机制

目的探讨脐带间充质干细胞(hUCMSCs)对脓毒症小鼠的器官保护作用及对炎症因子的调节作用及其机制。方法 29只C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=5)、脂多糖(LPS)组(n=12)和hUCMSCs组(n=12)。LPS组和hUCMSCs组小鼠腹腔注射10mg/kg LPS诱导建立脓毒症模型,1h后hUCMSCs组尾静脉注射经提取鉴定的正常新生儿脐带间充质干细胞(2.5×105个/只),LPS组给予等量PBS,并于3、6、12、24h时随机处死小鼠,收集肺、肾、肝组织及血液标本。采用HE染色观察器官损伤及恢复情况;采用免疫组化、酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝脏、外周血中白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果成功培养鉴定hUCMSCs并建立脓毒症小鼠模型。HE染色结果显示,hUCMSCs明显改善了脓毒症小鼠肺、肾、肝组织受损程度。免疫组化结果显示,与LPS组比较,hUCMSCs处理明显降低了同时间点肝组织TNF-α的表达水平(P<0.05),增加了IL-10的表达水平(P<0.05)。ELISA结果显示,与LPS组比较,hUCMSCs处理24h明显降低了外周血TNF-α的表达水平(P<0.05),处理3、6、12h明显增加了外周血IL-10的表达水平(P<0.05)。结论 hUCMSCs可改善脓毒症小鼠肝、肺、肾组织受损情况,调节脓毒症炎性因子分泌水平。

血栓弹力图联合常规凝血功能诊断老年肺癌患者凝血功能的价值研究

目的探讨血栓弹力图(TEG)联合常规凝血功能检查对评价老年肺癌患者凝血功能临床价值。方法选择2019年1月-2019年12月我院收治的老年肺癌患者14例作为观察组,另选择同期在我院健康体检者14例作为对照组,所有受试者均行血栓弹力图、常规凝血指标及血小板检查,分析老年肺癌患者凝血功能指标变化情况,以及不同病理分期患者TEG参数及常规凝血功能指标的水平差异。结果观察组患者的R值、K值、CI值及LY30均明显小于对照组(P<0.05);观察组患者的Angle角、MA值均明显大于对照组(P<0.05);观察组患者的PT、APTT、TT、FIB及INR指标水平均明显大于对照组(P<0.05);但两组患者的PLT水平差异无统计学意义(P>0.05);Ⅰ-Ⅱ期患者的R值、K值、CI值及LY30均明显小于Ⅲ-Ⅳ期患者(P<0.05);Ⅰ-Ⅱ期患者的Angle角、MA值均明显大于Ⅲ-Ⅳ期患者(P<0.05);Ⅰ-Ⅱ期患者的PT、APTT、TT、FIB及INR指标水平均与Ⅲ-Ⅳ期患者差异无统计学意义(P>0.05);但Ⅰ-Ⅱ期患者的PLT明显少于Ⅲ-Ⅳ期患者(P<0.05)。结论老年肺癌患者血液呈高凝状态,TEG联合常规凝血功能检查可实现对老年肺癌患者凝血功能的动态观察,同时对评估患者病情具有一定参考价值。

住院医师规范化培训学员医学叙事能力现状与影响因素分析

目的了解住院医师规范化培训(简称住培)学员医学叙事能力现状及其影响因素,为提高住培学员的医学叙事能力提供参考。方法2022年2至3月,采用便利抽样方法,选取广东省某三级甲等医院住院医师规范化培训基地2019至2021年参加住培的220名学员为研究对象,采用一般资料调查问卷、医学叙事能力量表进行调查。采用多元线性回归方法分析相关数据。结果共回收有效问卷206份。住培学员医学叙事能力评分为(141.39±22.94)分;多元线性回归分析结果显示,叙事知识储备程度(b=7.66,P=0.007)、职业满意程度(b=-5.23,P=0.003)评分越高的住培学员,医学叙事能力越强;与未婚和未参与志愿者服务的住培学员相比,婚姻状况为已婚(b=10.74,P=0.029)和参与志愿者服务(b=-7.20,P=0.025)的住培学员医学叙事能力越高。学员的婚姻状况、叙事知识储备程度、职业满意程度和是否参与志愿者服务4个变量共可以解释医学叙事能力评分总变异的21%。结论住培学员医学叙事能力处于较弱水平。叙事知识储备程度和职业满意程度对住培学员的医学叙事能力产生正向影响。住培管理者应多关注未婚学员,积极组织住培学员参加志愿者服务活动和叙事医学知识的培训,提高职业满意度,从而进一步提高住培学员的医学叙事能力。