微小RNA-22对妊娠糖尿病患者糖代谢的影响

目的探索微小RNA-22(miR-22)对妊娠糖尿病(GDM)患者糖代谢的影响。方法收集2018-01至2019-01在武警广东总队医院就诊的75例妊娠糖尿病孕妇组的胎盘组织作为观察组(GDM组),75例正常妊娠孕妇作为对照组(HC组)。培养人绒毛膜HTR8/Svneo细胞建立细胞模型,检测胎盘绒毛组织和细胞的miR-22表达。用人工合成的miR-22类似物和抑制物(反义寡核苷酸)转染HTR8/Svneo细胞,葡萄糖氧化酶法检测体外细胞摄取葡萄糖能力,Western blot检测细胞胰岛素信号通路上的PI3K、AKT、IRS、萄糖转运体4(GLUT4)的表达。设计构建含目的基因野生型和突变型的质粒,双荧光素酶报告基因系统分析miR-22与靶基因的关系。结果GDM胎盘组织和高糖组细胞中miR-22表达均明显低于对照组(P<0.05),miR-22表达与胰岛素抵抗指数呈负相关。GDM组织的IRS、PI3K、AKT、Glut4蛋白表达水平明显低于对照组;miR-22表达时,HTR8/Svneo细胞摄糖升高,Glut4表达升高,miR-22表达抑制时,细胞摄糖减少,GLUT4表达下降;miR-22过表达或抑制时,IRS、PI3K、AKT表达明显降低。双荧光素酶报告基因系统实验显示SLC2A4基因(编码GLUT4)是miR-22调节靶点。结论发生胰岛素耐受时,胎盘绒毛组织和细胞miR-22表达下降,miR-22过表达可以提高体外细胞摄取糖水平,miR-22可能通过调节GLUT4而参与GDM的发病机制。

血清ox-LDL与非酒精性脂肪肝超声检查关系的探讨

目的探讨不同程度非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者血清氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平及其与代谢指标的相关性。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测79例NAFLD患者和23名正常对照者血清oxLDL浓度,同时测定肝功能、代谢指标及血清同型半胱氨酸(Hcy)水平,根据B超检查结果将79例NAFLD患者分为轻(40例)、中(25例)、重度(14例)脂肪肝。分析ox-LDL与其他指标及脂肪肝程度的相关性。结果 NAFLD组丙氨酸氨基转移酶、γ谷氨酰基转移酶、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、载脂蛋白E、Hcy、尿酸、空腹血糖、纤维连接蛋白及ox-LDL水平均明显高于正常对照组(P均<0.05)。中、重度脂肪肝组血清ox-LDL水平明显高于轻度脂肪肝组(P均<0.05)。ox-LDL与Hcy、尿酸、总胆汁酸呈正相关关系[相关系数(r)为0.375、0.369和0.395,P值分别为0.007、0.013和0.029],ox-LDL水平与脂肪肝的分级呈正相关(r=0.410,P=0.011)。结论随着脂肪肝程度的加重,NAFLD患者血清ox-LDL水平逐渐升高。ox-LDL是肝功能受损及脂肪肝进展过程中的重要因素,对临床诊断和病情监测有重要意义。

转甲状腺素相关淀粉样变的研究进展

在1853年,Virchow首次发现了人体病变组织存有淀粉样变,用碘-硫酸方法能够进行检测。随后研究发现淀粉样变性疾患,是淀粉样前蛋白形成蛋白纤维沉积于细胞间质导致组织细胞核器官功能损害,引起一系列临床疾病。常见有免疫球蛋白轻链相关的淀粉样变性疾病（AL）、Aβ蛋白相关淀粉样变——阿尔茨海默病（AD）、转甲状腺素蛋白相关淀粉样变——老年性系统性淀粉样变（SSA）和家族性淀粉样多发性神经病变（FAP）等。

毛细管电泳与MALDI-TOF/MS联用测定血清转甲状腺素蛋白的化学修饰

目的建立一种毛细管电泳(CE)与基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)联用测定血清转甲状腺素蛋白(TTR)化学修饰的方法。方法用酶联免疫吸附法(ELISA)测定20例老年性淀粉样变(SSA)患者及20名健康体检者血清TTR浓度;CE法分离血清TTR并利用MALDI-TOF/MS测定TTR的化学修饰。结果健康对照组及SSA组血清TTR浓度分别为0.25±0.04(、0.26±0.03)g/L,2组间差异无统计学意义(P>0.05);MALDI-TOF/MS分析共发现4个TTR化学修饰峰,质/荷比(m/z)分别为:13 750.86±1.48、13 830.63±2.761、3 871.70±2.70、13 919.00±14.77;分别对应未修饰-TTR、磺化-TTR、半胱氨酸-TTR和半胱氨酸甘氨酸-TTR。结论 CE法分离血清TTR能够直接利用MALDI-TOF-MS测定其化学修饰,可用于临床检测血清TTR的化学修饰。

TGF-β1对单核细胞来源的树突状细胞表型和功能的影响

目的:研究TGF-β1对树突状细胞(DC)的分化、成熟及功能影响。方法:应用100万U/L粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)7d诱导单核细胞分化为不成熟DC,加入终浓度20万U/L的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)48h后获得成熟DC的体外模型,将TGF-β1加入该模型中,用流式细胞术分别检测DC分化,成熟阶段细胞表型的变化,应用ELISA检测DCIL-12的分泌水平,应用MTT法检测DC刺激同种异体T细胞增殖的能力。结果:TGF-β1对不成熟DC的特征性分子CD1a的表达无明显影响,但在诱导DC的成熟阶段,TGF-β1明显抑制CD40、CD86及CD83上调。此外,TGF-β1显著减少DCIL-12的分泌,显著抑制DC刺激同种异体T细胞增殖的能力。结论:DC是TGF-β1免疫抑制活性的靶细胞。TGF-β1不影响DC的分化,但抑制DC的成熟和细胞因子的分泌,降低DC刺激同种异体反应T细胞增殖的能力。

再生障碍性贫血骨髓与静脉血液中脂质含量的研究

目的分析再生障碍性贫血(AA)患者骨髓与静脉血液中脂质含量变化,探索AA的诊断标记物。方法对照组和AA组患者骨髓穿刺涂片进行瑞氏染色,观察骨髓增生程度和细胞形态学变化。利用贝尔1650自动化分析仪和配套试剂,分别测定AA组和对照组患者骨髓以及静脉血中总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、甘油三酯(TG)和胆固醇(Chol)含量。结果对照组血清中TP和ALB含量高于AA组,上述两种指标在血清与骨髓中无明显差别,骨髓标本混血对于上述两种指标结果无影响;AA组骨髓中TG和Chol含量高于血清中,尤其以TG增高最为明显。结论 AA患者骨髓内TG增加明显,Chol次之,二者能够作为AA辅助诊断的生物指标。

尿液转甲状腺素蛋白评价肾小球损害的指标作用研究

目的肾小球滤过试验是评价肾小球功能的主要指标。本研究目的是探索敏感、特异的评价肾小球损害的指标。方法利用赢东尿液分析仪(韩国),对肾小球肾炎患者尿液进行尿蛋白、尿白细胞、尿红细胞测定;利用SDS-PAGE电泳对尿液转甲状腺素蛋白(TTR)与其他分子蛋白进行比较。结果①选择肾小球肾炎患者尿液蛋白定性试验结果,尿蛋白含量在(+)～()之间。②尿液中发现转甲状腺素蛋白。③肾小球肾炎尿蛋白定性(+)患者,TTR占的比例为21.8%;尿蛋白定性(),TTR占的比例为18.3%;尿蛋白定性(),TTR占的比例为8.5%。结论尿液转甲状腺素蛋白含量有可能作为评价肾小球损害的敏感指标。

老年性关节病变关节组织内发现TTR淀粉样变

目的调查老年性关节损害中是否存有淀粉样变以及淀粉样变的类型。方法刚果红染色结合偏振光观察淀粉样变;免疫组织化学观察淀粉样变前蛋白类型;MALDI-TOF/MS结合DNA测序分析TTR蛋白基因是否发生突变。结果关节组织内发现刚果红染色阳性以及偏振光观察发出绿色荧光,确定淀粉样变沉积。免疫组织化学染色证实淀粉样变前蛋白为TTR蛋白。TTR基因和蛋白两方面同时检测结果,提示未发生基因突变。结论老年性关节损害患者关节组织内存有淀粉样变,淀粉样变前蛋白类型为TTR蛋白。

再生障碍性贫血患者骨髓涂片脂肪含量检测及意义

目的:检测再生障碍性贫血(AA)患者的骨髓涂片脂肪含量。方法:利用苏丹Ⅲ染色骨髓涂片,分别计算单位体积内骨髓苏丹Ⅲ染色脂肪含量及分布程度。结果:再生障碍性贫血患者骨髓脂肪含量增加。结论:再生障碍性贫血骨髓涂片脂肪染色密度和程度明显高于正常骨髓涂片,而且随着骨髓增生程度的降低,其脂肪含量逐渐增高。能够作为再生障碍性贫血的辅助诊断指标。

类风湿关节炎患者血清转甲状腺素蛋白化学修饰的蛋白质组学分析

目的通过检测类风湿关节炎(RA)患者血清转甲状腺素蛋白(TTR)的化学修饰类型和含量,探讨其在RA早期诊断中的潜在作用。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定39名RA患者[早期(<1年)16例,中晚期(>2年)23例]、20名骨性关节炎(OA)患者及20名健康体检者血清TTR含量;采用Western blot测定血清TTR分子聚合体比例;采用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术鉴定血清中TTR蛋白的化学修饰类型和比例。结果 RA早期患者血清TTR含量为(502.46±109.25)mg/L,明显高于正常对照组[(424.98±118.52)mg/L](P<0.05);RA中晚期患者[(440.67±94.15)mg/L]也有增高趋势,但与正常对照组比较差异无统计学意义(P=0.733);OA组TTR含量为(363.91±106.41)mg/L,与正常对照组比较差异无统计学意义(P=0.072)。血清TTR化学修饰有4种蛋白峰:质荷比(m/z)13 749.86±1.48、m/z 13 829.63±2.76、m/z 13 870.70±2.70、m/z 13 927±5.77,分别对应野生型TTR(native TTR)、磺化TTR(sul-TTR)、半胱氨酰化TTR(cys-TTR)和半胱氨酰甘氨酰化TTR(cysgly-TTR),且TTR修饰比例随病程发生变化。结论 RA患者血清TTR质谱分析发现4个TTR蛋白峰,且修饰比例随病程不同而发生改变;早期RA患者血清TTR含量增加,血清TTR水平有可能作为RA早期诊断的潜在指标。

miR-372-3p低表达对胰岛素抵抗细胞糖代谢的影响及机制

目的探讨降低miR-372-3p表达对胰岛素抵抗细胞糖代谢的影响及机制。方法将人类肝癌细胞系Hep G2用高糖培养法建立胰岛素抵抗细胞模型,RT-PCR法检测胰岛素抵抗细胞(胰岛素抵抗组)及非胰岛素抵抗细胞(正常对照组) miR-372-3p表达,并用Mireap分析miR-372-3p的靶基因。将胰岛素抵抗细胞随机分为hsamiR-372-3p反义寡核苷酸(ASO)组、阴性对照(NC) ASO组,分别转染hsa-miR-372-3p ASO、NC ASO。用Western blotting法检测细胞内磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达。将胰岛素抵抗细胞随机分为阴性对照组、miR-372-3p ASO抑制组和二甲双胍处理组,用葡萄糖过氧化物酶法测定细胞葡萄糖消耗水平。结果胰岛素抵抗组miR-372-3p相对表达量高于对照组(P <0. 05)。Mireap分析显示miR-372-3p的靶基因有PI3K调节亚单位β、GLUT4、PKA和MAPK等。miR-372-3p ASO抑制组PI3K、GLUT4蛋白相对表达量均较NC ASO组高(P均<0. 05)。miR-372-3p ASO抑制组体外细胞葡萄糖消耗较NC ASO组高(P <0. 05),较二甲双胍处理组低,但差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论降低miR-372-3p表达可促进胰岛素抵抗细胞糖代谢,其机制可能与miR-372-3p抑制PI3K、GLUT4表达有关。

巧设真实探究情境 发展学生科学思维——以“追及与相遇问题”的教学设计为例

以高三第二轮复习课“追及与相遇问题”的教学设计为例,巧设真实情境,激活学生思维;“进阶”设问,引导学生开展深入探究,促使学生深度学习;联系实践,“横向”拓展,贯通思维,让复习备考的物理课堂成为有效培育学生核心素养的主阵地。