龟裂链霉菌M527荧光定量PCR内参基因的选择及其稳定性评估

龟裂链霉菌Streptomyces rimosus M527是龟裂霉素(rimocidin)的生产菌,其对多种植物病原真菌具有较强的拮抗作用。为从转录水平分析菌株M527以及其抗性突变株中龟裂霉素的合成调控机制,荧光定量PCR内参基因的选择与稳定性评估显得尤为重要。本研究选用16SrRNAsr、hrd Bsr、rpoAsr、sigFsr、sigBsr、gyrBsr这6个基因作为候选内参基因,使用geNorm、NormFinder、BestKeeper三个软件分析在野生型龟裂链霉菌M527、高产龟裂霉素抗性突变株M527-GR7和低产龟裂霉素抗性突变株M527-GR21中候选内参基因的稳定性,筛选出稳定性最高的内参基因。结果显示,sigBsr基因在菌株M527及抗性突变株M527-GR7和M527-GR21中表达稳定性最好。通过以基因sigBsr、16S rRNAsr、rpoAsr为内参基因,检测龟裂霉素生物合成基因簇中的结构基因rim Gsr在菌株M527-GR7中不同时间的相对表达量,发现基因sigBsr作为内参基因时能得到更准确的结果。