尾静脉注射衰老标志蛋白30对脓毒症小鼠心肌损伤的抑制作用及其机制

目的观察尾静脉注射衰老标志蛋白30(SMP30)对脓毒症小鼠心肌损伤的抑制作用,并探讨其作用机制。方法取60只雄性C57BL/6小鼠,随机分为空载对照组、空载模型组、SMP30模型组各20只,空载对照组和空载模型组尾静脉注射空载腺相关病毒载体,SMP30模型组尾静脉注射SMP30腺相关病毒载体。注射2周后,空载模型组和SMP30模型组通过一次性腹腔注射脂多糖(LPS)建立脓毒症模型,空载对照组腹腔注射同等体积生理盐水。于LPS注射24 h后,使用超声心动图仪检测小鼠心功能指标左心室射血分数(LVEF)和左心室缩短分数(LVFS);处死小鼠,收集血清及心脏标本,ELISA法检测血清肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平以及心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量;TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡情况;免疫荧光染色法检测心肌组织巨噬细胞浸润情况;二氢乙锭荧光探针检测心肌组织活性氧自由基(ROS)生成量;qRT-PCR法观察心肌组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA;Western blotting法观察心肌组织SMP30和沉默信息调节因子1(SIRT1)通路相关蛋白SIRT1、乙酰化核因子κB p65(Ac-NF-κB p65)、乙酰化叉头框蛋白O1(Ac-FOXO1)。结果与空载对照组比较,空载模型组LVEF、LVFS降低,血清CK-MB、LDH、cTnI水平升高,心肌细胞凋亡率增加;心肌组织巨噬细胞浸润明显,IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达升高;心肌组织ROS及MDA生成增加,SOD和GSH-Px活性减弱;心肌组织SIRT1表达下降,Ac-NF-κB p65和Ac-FOXO1表达升高(P均<0.01)。与空载模型组比较,SMP30模型组LVEF、LVFS升高,血清CK-MB、LDH、cTnI水平降低,心肌细胞凋亡率降低;心肌组织巨噬细胞浸润减少,IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达降低;心肌组织ROS及MDA生成减少,SOD和GSH-Px活性增强;心肌组织SIRT1表达升高,Ac-NF-κB p65和Ac-FOXO1表达下降(P均<0.01)。结论尾静脉注射SMP30可上调脓毒症小鼠心肌组织SMP30表达,抑制心肌炎症反应和氧化应激水平,从而减轻心肌损伤,其机制可能是通过激活SIRT1信号通路来发挥作用。

miR-145-5p对脓毒症小鼠心肌损伤的保护作用及其机制

目的 探讨miR-145-5p对脓毒症小鼠心肌损伤的保护作用及其机制。方法 80只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术+尾静脉注射agomir-NC组(sham+ago-NC)、假手术+尾静脉注射agomir-miR-145-5p组(sham+ago-miR)、脓毒症+尾静脉注射agomir-NC组(CLP+ago-NC)和脓毒症+尾静脉注射agomir-miR-145-5p组(CLP+ago-miR),每组20只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症模型。绘制小鼠生存曲线,ELISA法检测血清心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)和肌钙蛋白I(cTnI)水平以及促炎细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达,HE染色观察心肌组织微观结构,超声仪检测心脏收缩功能(LVEF、LVFS),免疫荧光染色检测CD68、Ly6G、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达情况,碘化丙啶染色评估心肌细胞焦亡,qRT-PCR检测miR-145-5p表达,Western blot检测NLRP3、ASC、裂解的半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(cleaved Caspase-1)、白细胞介素18(IL-18)和GasderminD蛋白N端片段(N-GSDMD)蛋白表达。结果 与sham+ago-NC组相比,CLP+ago-NC组小鼠生存率明显下降(P<0.001),血清CK-MB和cTnI水平显著升高(P<0.01),心肌纤维排列紊乱且断裂明显,LVEF、LVFS值显著降低(P<0.01),心肌CD68阳性巨噬细胞和Ly6G阳性中性粒细胞明显增多(P<0.01),IL-1β、IL-6和TNF-α表达显著上调(P<0.01),心肌组织炎症小体和心肌细胞焦亡明显增多(P<0.01)。与CLP+ago-NC组相比,CLP+ago-miR组小鼠生存率明显上升(P<0.05),血清CK-MB和cTnI水平显著下降(P<0.01),心肌纤维紊乱及断裂程度明显减轻,LVEF、LVFS值显著升高(P<0.01),心肌巨噬细胞和中性粒细胞明显减少(P<0.01),IL-1β、IL-6和TNF-α表达显著下调(P<0.01),心肌组织炎症小体和心肌细胞焦亡明显降低(P<0.01)。结论 过表达miR-145-5p可通过抑制心肌组织炎症反应和心肌细胞焦亡来改善心脏功能,进而发挥保护脓毒症小鼠心肌损伤的作用。

钠通道 SCN5a 突变体 R104W 的构建及验证

目的构建并验证Brugada综合征相关钠通道SCN5a基因R104W突变体。方法采用一步法PCR突变技术,以pEGFP-SCN5a为模板,体外定点诱变构建pEGFP-SCN5a-R104W突变体,进行基因测序,并用Lipofectamine TM3000脂质体转染法转入HEK293细胞,通过Western blotting和膜片钳记录检测蛋白质表达和电流加以验证。结果测序结果显示SCN5a-R104W突变体基因序列上第310C>T,其他序列碱基与野生型相比未发生改变;Western blotting结果显示SCN5a-R104W突变体蛋白表达量较野生型SCN5a降低;荧光显微镜下显示SCN5a-R104W突变体蛋白位于胞质内;SCN5a-R104W突变体转染后膜片钳记录未能检测到钠电流,且R104W突变体对野生型通道有负显性抑制作用。结论成功构建并验证SCN5a基因R104W突变体。

针刀配合低温等离子射频消融治疗颈椎间盘突出症

目的:观察针刀配合低温等离子射频消融治疗颈椎间盘突出症的临床疗效.方法:55例经临床和影像(CT或MRI)确诊的颈椎间盘突出症患者,采用颈前穿刺入路行低温等离子射频治疗,术后第3天、第10天行颈部小针刀松解术.评价患者治疗前及末次随访时疼痛视觉模拟评分及临床疗效.结果:末次随访时疼痛视觉模拟评分较术前明显改善,由治疗前的8.26±0.84分降至1.53±0.49分,差异有统计学意义(P <0.01);临床疗效采用改良MacNab 评价标准评价,优35例,良15例,可3例,差2例,优良率90.91%,无1例出现严重并发症.结论:针刀配合低温等离子射频消融治疗颈椎间盘突出症疗效好,值得临床推广.

高频电刀在永久性心脏起搏器术中的应用

目的:探讨高频电刀在永久性心脏起搏器植入术及更换术中的安全性。方法:观察永久性心脏起搏器植入术及更换术中应用高频电刀对术后囊袋血肿发生的影响,对更换起搏器者随访观察电极参数的变化情况。结果:高频电刀在344例起搏器植入或更换患者中囊袋血肿发生率为0。在6个月~1年随访期间,更换起搏器的患者电极的阈值、感知及阻抗均正常,且各参数前后变化无统计学差异。结论:高频电刀在起搏器植入及更换术中应用安全、可靠。

ABCA3基因定点突变及其在A549细胞株中的表达

目的探讨构建与新生儿呼吸窘迫综合征相关的ABCA3基因突变体c.875A>T(p.E292V)和c.2169G>A(p.M723I)及其绿色荧光表达载体的方法,并观察其在人肺腺癌(A549)细胞株中的表达。方法应用重叠延伸PCR法构建ABCA3基因的两个突变体E292V和M723I,运用限制性酶切连接等技术构建两个突变体的绿色荧光表达载体,使用脂质体Lipofectamine 2000将构建的载体瞬时转染到A549细胞株,使其在体外表达,在荧光显微镜下观察转染效率,利用激光共聚焦显微镜观察重组子的表达情况。结果构建的两个突变体E292V和M723I经测序分别证实ABCA3基因c DNA第875位碱基A变为T和第2169位碱基G变为A,重组子转染A549细胞后,野生型和突变型基因的蛋白质都在细胞内成功表达。结论成功构建了ABCA3基因野生型及突变型的绿色荧光表达载体,并使其在A549细胞表达,为后续实验提供了条件。

多指标联合对急诊经皮冠脉介入治疗的急性ST段抬高型心肌梗死患者发生主要心血管不良事件的预测

目的探讨全球急性冠脉事件登记(GRACE)评分、应激高血糖和N末端脑钠肽前体(NT-pro-BNP)对急诊经皮冠脉介入(PCI)治疗的急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者发生主要心血管不良事件(MACEs)的预测价值,为STEMI患者临床诊疗中早期风险分层和预后判断寻找更好的方法,为患者制定最佳个体化治疗策略提供可靠的临床依据。方法本研究最终纳入342例急诊PCI的STEMI患者,在1年的随访中有88例患者出现MACEs。采用多因素Cox回归分析评估各危险因素对MACEs的预测价值。进一步用受试者操作特征(ROC)曲线计算曲线下的面积(AUC)。结果以性别、GRACE评分、入院随机血糖、NT-pro-BNP、吸烟、冠心病、高血压、糖尿病、脑卒中和冠状动脉血管病变(单支病变、双支病变、三支病变)、发病时间和用药情况作为协变量,MACEs作为状态变量,进行多因素Cox回归分析显示,GRACE评分、入院随机血糖、lgNT-pro-BNP是急诊PCI的STEMI患者发生MACEs的独立预测因子。根据AUC计算的入院随机血糖、GRACE评分、NT-pro-BNP及三指标联合对STEMI患者MACEs的预测值分别是0.694、0.758、0.732和0.813。结论GRACE评分、入院随机血糖、NT-pro-BNP对急诊PCI的STEMI患者1年后MACEs有独立的预测价值。联合GRACE评分、入院随机血糖、NT-proBNP可进一步提高对急诊PCI的STEMI患者MACEs的预测价值。