肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的探讨我院肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBL s)基因分布规律。方法对20株经双纸片试验确证为ESBL s表型阳性的肺炎克雷伯菌进行blaTEM-1、blaSHV-1、CTX-M-1组、TOHO-1组等4种基因PCR扩增,并对16株blaSHV-1基因PCR扩增阳性的菌株进行基因序列测定,在In ternet网上与G enB ank中的已知序列进行核苷酸相似性分析,并进行编码基因对位和氨基酸序列对比分析。结果产ESBL s肺炎克雷伯菌中blaTEM-1、blaSHV-1、CTX-M-1组等3种基因扩增阳性率分别是50.0%、95.0%、20.0%。16株肺炎克雷伯菌中有4株序列与SHV-1a(序列号:X 98101,74→934)氨基酸序列完全相同;有3株序列与SHV-2(序列号:AY 570959,42→812)100%相同;有2株序列与SHV-11(序列号:AY 293069,41→817)100%相同;有4株序列与SHV-27(序列号:AF 293345,2→821)氨基酸序列完全相同;有1株序列与SHV-28(序列号:AF 538324,12→823)100%相同;有2株序列在G enB ank中未找到与之完全相同的序列。结论本地肺炎克雷伯菌中有SHV-1a、SHV-11、SHV-28广谱β-内酰胺酶基因和SHV-2、SHV-27 ESBL s基因存在。

产ESBLs大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌院内垂直传播分析

目的调查产ESBLs大肠埃希菌(ECO)与肺炎克雷伯菌(KPN)院内垂直传播流行状况。方法脉冲场凝胶电泳(PFGE),用Quantity One软件进行PFGE指纹比较分析。结果ICU分离的21株ECO中有10株和7株的相似性系数>90%和100%;KPN有3株相似性系数为100%;神经外科分离的20株ECO中,有9株相似性系数>90%;6株KPN中有4株的相似性系数>90%;干部病房分离的10株ECO中有3株和2株相似性系数>90%和100%;消化科和呼吸科分别在7株和18株ECO中,有2株和2株相似性系数>90%;其他科室也有检出相似性系数>90%的菌株。结论多科室存在垂直传播,尤以ICU病房严重,应采取有力措施加强感染控制管理工作。

临床分离阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶及其基因分析

目的探讨临床分离阴沟肠杆菌对β内酰胺类抗生素的耐药性及其机制。方法采用κ—B法药敏试验检测临床分离阴沟肠杆菌耐药表型；双纸片确认试验和增效试验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）或／和高产AmpC酶菌株；PCR方法检测TEM-1、SHV-1、CTX—M型ESBLs编码基因，PCR产物直接测序分析其基因亚型。结果（1）被检菌株对IPM、AK、FEP、CIP耐药率分别是0．0％、14.1％、31.5％、48.4％；对其他常用β-内酰胺类抗生素、CN、SXT等耐药率在50.0％～90.0％以上；（2）88．1％菌株高产AmpC酶或／和产ESBLs；高产AmpC酶、单产ESBLs、同时产AmpC酶和ESBLs的菌株检出率分别为27.38％、16.67％、44.05％。60.70％菌株产ESBLs。（3）TEM-1、SHV-1、CTX-M1组ESBLs编码基因检出率分别为75.00％、23.44％、77.27％。（4）基因序列分析显示存在SHV-12、CTX-M 3.9a、14、22等ESBLs编码基因，以SHV-12、CTX—M14、22为主。结论临床分离阴沟肠杆菌多重耐药严重，对β内酰胺类抗生素的耐药机制复杂，ESBLs编码基因亚型以SHV-12、CTX—M14、22为主。

慢性乙型肝炎病毒感染者唾液HBV DNA检测及其意义

目的 探讨慢性乙型肝炎病毒 (HBV)感染者唾液HBVDNA检测的流行病学意义及诊断价值。方法 用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测HBV血清学标志物。用荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)法检测HBVDNA。对 114例慢性HBV感染者唾液和血液标本进行检测与分析。结果 114例慢性HBV感染者唾液和血液HBVDNA阳性率分别为 2 8.1%和 4 7.4 % ,阳性者平均HBVDNA含量分别为 6 .37± 0 .95和 8.18± 1.5 4 (拷贝数 /ml的对数 ) ,后者均显著高于前者。唾液HBVDNA含量与血液含量高度正相关 (r =0 .918)。血液HBVDNA阳性者的唾液阳性率为 5 9.1% (32 / 5 4 )。血液HBVDNA阴性者唾液阳性率 0 .0 0 % (0 / 6 0 )。血液HBsAg(+)、HBeAg(+)者的唾液HBVDNA阳性率为 10 0 % (2 0 / 2 0 )。血液HBsAg(+)、HBeAg(- )者的唾液HBVDNA阳性率为 15 .1% (11/ 73)。结论 慢性HBV感染者尤其是HBeAg阳性者和血液HBVDNA阳性者的唾液含有HBV 。

云南汉族原发性高血压与HLA-DQA1等位基因的相关性研究

目的 探讨云南汉族人群 HL A- DQA1等位基因与高血压病的相关性。方法 应用病例 -对照相关分析方法 ,采用 PCR- SSP基因分型技术对云南汉族健康个体 91例和高血压病患者 83例 (均无血缘关系 ) ,进行 HL A- DQA1位点 10个有表达的等位基因分型 ,并进行遗传相关分析。结果 原发性高血压患者中 DQA1* 0 30 2的频率为0 .12 8,显著高于对照组 (0 .0 11) ,χ2 =19.4 0 9,P<0 .0 1,相对危险率 RR=11.4 2 ,EF为 0 .2 3。DQA1* 0 2 0 1的频率(0 .0 6 1)显著低于对照组 (0 .170 ) ,χ2 =9.876 ,P<0 .0 5。相对危险率为 0 .35。 PF为 0 .18。结论 云南汉族 HL A-DQA1等位基因与高血压病的相关性与北方汉族存在部分差异 ,HL A - DQA1* 0 30 2可能与原发性高血压易感相关 ;DQA1* 0 2 0 1可能在云南汉族原发性高血压发病中有保护作用。

BA—ELISA检测人血浆异常凝血酶原用于原发性肝癌的诊断

以钡盐吸附除去血浆凝血酶原后,用生物素—亲和素酶联免疫吸附测定法(Biotin Avidjn ELISA)检测了39例健康人,42例原发性肝细胞肝癌(HCC)患者及17例肝脏良性病变患者血浆异常凝血酶原(AP)含量,结果显示HCC患者血浆AP含量≥150ng/ml的占64.3％。20例血清甲胎蛋白(AFP)阴性患者血浆的60％AP含量≥150ng/ml。两者相结合,可使HCC诊断率提高到81％。对12例癌肿直径小于5 cmHCC患者的血浆AP含量的检测,得到类似的结果。提示血浆AP的检测,有助于提高HCC的诊断率。

云南汉族高血压病6个候选基因相互作用研究

目的探讨AGT、ACE、eNOS、ET-2、ANP和NPRC等6个基因多态性与高血压病的相关性及其相互作用。方法用基因芯片检测技术,对100例高血压病患者及97例健康对照者进行AGTM235T、ACEI/D、eNOSGlu298Asp、ET-2A985G、ANPT2238C和NPRCA-55C等位点基因多态性检测。结果 NPRCA-55C位点的CC基因型频率(0.540)与对照组(0.237)比较差异有极显著性意义(χ2=18.973,P=0.0000),OddRatio=3.777(95%CI:2.050～6.960);ET-2A985G位点G等位基因频率(0.925)与对照组(0.851)比较,差异有显著性意义(χ2=5.507、P=0.0190),OddRatio=2.648(95%CI:1.073～6.536)。用MDR方法分析以上6个位点基因-基因交互作用,显示两位点ET-2/NPRC模型为最佳模型,该模型的OddRatio为4.002(95%CI:2.1597～7.4159)。结论云南汉族NPRCA-55CCC基因型和ET-2A985GG等位基因可能与高血压病易感性相关。ET-2A985G和NPRCA-55C两个基因多态性之间可能存在基因-基因交互作用。

ANP和NPR-C基因多态性与高血压病的相关性研究

目的探讨ANP和NPR-C基因多态性与高血压病的相关性。方法用病例-对照相关性研究,选择3代居住云南的汉族为研究对象,用基因芯片技术,对100例高血压病患者及97例健康对照者进行ANP T2238C和NPR-CA-55C位点基因多态性分析。结果 (1)云南汉族97例健康人群中ANP T2238C位点的TT、TC基因型频率分别是0.959、0.041,未检出CC基因型;T和C等位基因频率分别是0.979、0.021。(2)NPR-CA-55C的AC、CC基因型频率分别是0.763、0.237,未检出AA基因型;A和C等位基因频率分别是0.381、0.619。(3)ANP T2238C(TT、TC、CC)基因型多态性频率与对照组比较,差异无显著性意义。(4)NPR-CA-55C位点的CC基因型频率(0.540)与对照组(0.237)比较差异有极显著性意义(χ2=18.973,P=0.000),OR=3.777(95%CI:2.050～6.960)。结论云南汉族NPR-CA-55CCC基因型可能与高血压病易感性相关。

人血浆凝血酶原和异常凝血酶原的BA-ELISA法检测

应用与凝血酶原及异常凝血酶原有免疫交叉反应的非Ca(Ⅱ)依赖性抗人凝血酶原抗体,建立夹心BA-ELISA法,检测人血浆凝血酶原的最低浓度可达1ng/ml。血浆经皂土和柠檬酸钡吸附处理,除去纤维蛋白原和凝血酶原后,可用本法检出存留于血浆中的微量异常凝血酶原,并测得健康人血浆异常凝血酶原的均值为74.61±19.43ng/ml。本法操作简便,特异性强,重复性好。

临床分离阴沟肠杆菌耐药性水平传播研究

目的探讨昆明三级甲等综合医院临床分离阴沟肠杆菌的耐药性及其水平传播机制。方法采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的K-B法药敏试验检测昆明市第一人民医院2002年7月至2004年6月临床分离阴沟肠杆菌对临床常用23种抗生素的耐药性;用接合试验分析多重耐药性的水平传播状况。结果103株临床分离到的阴沟肠杆菌对23种常用抗生素的药物敏感试验显示:广谱青霉素类,第一、第二代头孢菌素的耐药率在80%以上;三代头孢菌素除头孢他啶外,耐药率均大于70%;头孢吡肟的耐药率为31.5%;头酶素类的耐药率65%以上;亚胺培南100%敏感;广谱青霉素与β-内酰胺酶抑制剂复合制剂耐药率为50%～90%;氨基糖甙类中庆大霉素耐药率高达66.7%,而阿米卡星耐药率不高,只有14.1%;喹诺酮类的环丙沙星耐药率为48.4%;磺胺类的复方新诺明耐药率为64.8%。对52株耐第三代头孢菌素菌株的接合试验显示,23.1%菌株的的耐药性可通过接合传递。结论该院临床分离阴沟肠杆菌的多重耐药严重,部分菌株的耐药性可在不同种菌株间水平传递。

冠心病患者血清胆红素测定及临床意义初探

用重氮法检测了105例不同性别老年冠心病住院患者血清胆红素浓度，结果显示：冠心病患者血清总胆总体水平显著低于健康对照组（P＜0．01），其均值仅为对照组的82％，且在性别间无显著性差异。提示胆红素与冠心病之间存在负性相关关系。推测；血清正常浓度的胆红素可能通过阻止LDL的氧化修饰，具有抗AS形成的作用，血清胆红素的降低可能为冠心病的又一危险信号。

急诊检验报告周转时间的实时监控及持续改进

报告周转时间（turnaroud time,TAT）,也称为结果回报时间,是指从临床医生开出检验申请单到接收到报告之间的时间[1]。及时的检验报告不仅可以使患者尽快得到诊治,而且在危急的情况下甚至可以帮助临床医生挽救患者的生命[2-3]。因此,临床医生和患者在关注检验结果的可靠性的同时更关注检验结果的时效性[4-6]。由于TAT包括从提出检验申请、样本采集、样本运输、样本接收、检验、报告审核、报告打印、报告发放与签收等各环节所占时间,参与部门和人员较多,涉及面广,管理难度大,提速效果常常难以达到预期。如何尽可能缩短TAT,最大限度地满足临床需求成为当前临床实验室需要解决的重要议题。

14519例血流感染病原菌构成及耐药分析

目的监测2013—2014年中国云南省28家三级医院血流感染病原菌构成及耐药状况,为菌血症病原菌分布及其耐药积累数据资料。方法 2013—2014年全国细菌耐药监测网云南省28家三级医院成员单位,按统一的方案进行血培养分离、鉴定和药敏试验。收集阳性菌株数据用Whonet5.6软件按CLSI M100-S2 4判断标准进行统计分析。结果 14519株血培养阳性菌株中革兰阴性杆菌7490株,占51.59%;革兰阳性球菌6196株,占42.68%;真菌421株,占2.90%;其他菌株412株,占2.84%。本研究检出金黄色葡萄球菌786株,其中MRSA 190株,占24.17%;凝固酶阴性葡萄球菌4395株,MRCNS 3177株,占72.29%。葡萄球菌对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁100%敏感,MRSA和MRCNS对红霉素、四环素、克林霉素、阿奇霉素、喹诺酮类耐药率均大于40%。粪肠球菌对青霉素及氨苄西林耐药率分别为4.2%及3.4%,而屎肠球菌对青霉素耐药率为89.5%,对氨苄西林耐药率为84%,对万古霉素耐药率为0.8%。肺炎链球菌对青霉素耐药率为3.7%,草绿色链球菌对青霉素耐药率为9.1%。大肠埃希菌共检出3785株,其中产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌为1984株,占比52.42%。肺炎克雷伯菌共检出1010株,其中产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌364株,占比36.04%。大肠埃希菌(ESBLs+)菌株对亚胺培南耐药率为0.9%,对美罗培南耐药率为0.2%;肺炎克雷伯菌(ESBLs+)菌株对美罗培南耐药率为22.6%,对亚胺培南耐药率为28%。沙门菌检出845株,对常规检测药物多为敏感。铜绿假单胞菌共检出264株,其中泛耐药菌株为21株,占7.95%。鲍曼不动杆菌共检出275株,其中泛耐药菌株36株,占13.09%。嗜麦芽寡养单胞菌检出158株,对常规检测药物耐药率显示:头孢他啶41.9%,左氧氟沙星3%,复方磺胺甲噁唑6.2%。结论 2013—2014年中国云南地区血培养分离菌病原菌菌谱广泛,对抗菌药物的耐药性相差较大,医疗机构应加强细菌耐药监测,指导临床合理使用抗菌药物。

产ESBLs大肠埃希菌的耐药表型及水平传播研究

目的了解昆明市第一人民医院临床分离的大肠埃希菌超广谱p内酰胺酶（extended spectrum β-lactamases，ESBLs）的耐药表型和水平传播情况。方法对2005年1月～12月昆明市第一人民医院临床分离的197株大肠埃希菌用表型确证试验检测ESBLs，用Kirby—Bauer琼脂扩散法做药物敏感试验；用接合试验了解产ESBLs基因是否定位于质粒，并对接合子进行KB法药敏试验和ESBLs表型确证。结果197株大肠埃希菌中共检出产ESBLs菌104株，检出率52．79％。在各类标本中产ESBLs菌株在纤维支气管镜（bronchofibroscope，BF）刷片中分离率最高（75％），就科别来看内分泌科标本的产ESBLs大肠埃希菌的分离率最高（78.57％）。除亚胺培南和阿米卡星外，产ESBLs菌株对其他15种抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs菌株（P〈0．01）。104株产ESBLs菌株中有91株符合供体菌的标准,64株接合成功，接合子均确证产ESBLs，其接合率为70．33％。64株供体菌及其相应接合子的药敏结果显示除复方磺胺甲噁唑、左氧氟沙星、庆大霉索、头孢吡肟和头孢西丁外，供体菌及其接合子对其他12种药物耐药率无显著性差异（P〉0．05）。结论昆明市第一人民医院大肠埃希菌产ESBLs和耐药质粒水平传播情况严重，临床应加强对大肠埃希菌耐药性的监测，严格掌握抗生素的使用指征，防止耐药菌株的传播流行。

原因不明习惯性流产与细胞因子免疫平衡的相关性

目的探讨原因不明习惯性流产患者外周血血清Th1、Th2型细胞因子水平的变化及免疫平衡状态对其的影响。方法对原因不明习惯性流产患者和正常妊娠妇女在行清宫术或人工流产终止妊娠前静脉采血,用流式细胞仪检测Th1、Th2型细胞因子水平。结果患者组Th1型细胞因子(白细胞介素-2、干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α)水平明显高于对照组,Th2型细胞因子(白细胞介素-4、6、10)水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。在患者组免疫调节Th1/Th2型平衡明显向Th1型倾斜。结论 Th1/Th2型细胞因子免疫调节失衡可能是导致流产的机制。妊娠早期监测Th1/Th2型细胞因子的水平有可能作为预测妊娠结局的指标之一。

产ESBLs大肠埃希菌CTX-M型耐药基因分析

目的了解某院CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)在大肠埃希菌中的检出率,并确定其基因型。方法对该院2005年1—12月临床送检标本中分离的197株大肠埃希菌进行ESBLs表型确证试验和接合试验;采用聚合酶链反应(PCR)检测CTX-M酶基因型,对PCR产物测序并确定其基因型。结果197株大肠埃希菌中有104株(52.79%)ESBLs表型检测阳性,其中91株符合供体菌标准,64株(70.33%)接合成功,接合子均确证产ESBLs。PCR扩增结果示104株产ESBLs大肠埃希菌中共有98株(94.23%)携带CTX-M型基因,其中38株(36.54%)检出blaCTX-M-1组基因,69株(66.35%)检出blaCTX-M-9组基因。64株接合子中共有51株(79.69%)携带CTX-M型基因,其中18株(28.13%)检出blaCTX-M-1组基因,35株(54.69%)检出blaCTX-M-9组基因。基因测序确定存在CTX-M-22、CTX-M-28、CTX-M-15、CTX-M-14、CTX-M-27五种基因亚型,以CTX-M-14为主。结论该院大肠埃希菌产ESBLs和耐药质粒水平传播情况严重,产ESBLs细菌基因型以CTX-M-9组的CTX-M-14亚型为主,同时存在CTX-M-22、CTX-M-28、CTX-M-15和CTX-M-27等多种亚型。

电堆积大体积进样-在线扫集-胶束毛细管电动色谱法测定胡黄连中的4种有机酸

建立了以电堆积大体积进样-在线扫集-胶束毛细管电动色谱法测定胡黄连中的异阿魏酸、肉桂酸、阿魏酸和香草酸的新方法。考察了pH值、四硼酸钠浓度、SDS浓度、电压、有机溶剂和进样时间对分离效果的影响。以40 mmol/L四硼酸钠-80 mmol/L十二烷基磺酸钠(SDS)为缓冲液(含10%(V/V)甲醇,pH 9.4),在进样电压-10 kV,分离电压20 kV,检测波长214 nm,环境温度25℃的条件下,达到最佳的分离效果。异阿魏酸、肉桂酸、阿魏酸和香草酸的线性范围分别为16～543μg/L,16～518μg/L,18～589μg/L和14～161μg/L;回收率分别为93%～111%,102%～107%,96%～108%和103%～108%;峰面积的RSD均小于4%;4种有机酸的检出限分别为618,148,368和76 ng/L。

多药耐药性阴沟肠杆菌院内垂直传播分析

目的了解昆明市级医院阴沟肠杆菌多药耐药菌株的院内垂直传播现状。方法采用美国临床实验室标准化研究所（CLSI）推荐的K-B法药敏试验检测昆明市第一人民医院2002年7月-2004年6月临床分离阴沟肠杆菌的耐药表型;脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析耐药菌株的克隆传播状况。结果第一、二代头孢菌素的耐药率〉80.0%;三代头孢菌素除头孢他啶外,耐药率均〉70.0%;头孢吡肟的耐药率为31.5%;头霉素类的耐药率〉65.0%;亚胺培南100.0%敏感;β-内酰胺酶抑制剂复合制剂耐药率为50.0%～90.0%;庆大霉素耐药率高达66.7%,而阿米卡星耐药率只有14.1%;环丙沙星耐药率为48.4%;复方新诺明耐药率为64.8%;ICU分离的14株阴沟肠杆菌中7株具有相同PFGE指纹。结论昆明市第一人民医院临床分离阴沟肠杆菌多药耐药严重,存在耐药菌株的垂直传播。

2013-2015年血培养阳性标本污染情况分析

目的分析探讨昆明市第一人民医院2013-2015年血培养污染率、污染途径、污染细菌构成比,为有效防止血培养污染提供依据。方法对昆明市第一人民医院3年来共送检的34 713例血培养样本的污染情况进行回顾性分析。结果血培养送检样本数34 713例,阳性培养样本数2 860例,总计污染样本数361例,污染率1.04%。按年度分类,2015年度血培养污染率最低;按季度分类,4个季度污染率差异不大;按内、外科两大系统分类,内科系统污染率1.06%,外科系统污染率0.96%;按科室分类,内科系统中污染率最高的科室是血透中心,污染率为2.71%,其次为重症医学科(ICU),污染率2.23%;外科系统中污染率最高的科室是乳腺科,污染率为2.30%,其次为骨科,污染率为1.92%;按污染菌菌株构成统计,人葡萄球菌污染居首位,占32.41%,其次为表皮葡萄球菌,占31.30%。结论医院血培养污染率较高,污染途径多样化,血培养污染问题不容忽视,污染的细菌以血培养单瓶报阳的凝固酶阴性葡萄球菌为主。