4种血浆游离DNA提取方法的比较

目的比较4种方法对血浆游离结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)DNA和质粒DNA的提取效率。方法MTBDNA和重组质粒DNA经紫外分光光度法准确定量并梯度稀释,建立标准品。构建含有一定浓度MTBDNA和质粒DNA的血浆,分别采用4种方法提取血浆游离DNA,采用实时荧光PCR技术定量检测模拟血浆中MTBDNA和质粒DNA的含量,比较各种方法的提取效率。结果4种方法中,磁珠法对MTBDNA和质粒DNA的提取效率最高,分别为52.8%和69.2%;相对丢失率最低,分别为40.1%和31.8%;重复性最好,其变异系数分别为26.7%和26.0%。结论在4种方法中,磁珠法对血浆游离DNA的提取效率最高,尤其适合于小片段DNA的提取。

K-RAS基因突变的套式PCR检测及其在大肠癌中的应用

目的探讨高敏感性K-RAS基因点突变检测方法在大肠癌临床的应用价值。方法用套式聚合酶链反应结合限制性片段多态性分析(PCR-RFLP)检测大肠癌组织及其癌旁组织K-RAS基因第12密码子点突变。结果癌组织K-RAS基因第12密码子点突变率为12%(4/34),表现为GGT→GAT和GGT→GTT,癌旁组织无K-RAS突变。伴有12密码子突变的大肠癌以隆起型为主,患者年龄较大,均属C和D期。结论大肠癌患者K-RAS基因突变与患者的年龄、肿瘤的大体形态和患者Dukes分期等临床病理参数有关。