阻断神经生长因子信号部分抑制雌二醇对恒河猴视网膜血管内皮细胞的作用

目的 研究神经生长因子 (NGF)信号系统在雌激素调控视网膜血管内皮细胞中的作用。 方法 选用恒河猴视网膜 脉络膜血管内皮细胞系RF 6A ,RT PCR检测雌激素受体 (estrogenreceptor,ER)、NGF及其受体在视网膜血管内皮细胞中的表达。分别观察雌二醇 (estradiol,E2 )、NGF及VEGF、EGF、BDNF等对血管内皮细胞活力(MTT法 )的作用。用流式细胞术 细胞周期法检测E2 、NCF及E2 与K2 5 2a共同处理组的凋亡率。NGF抗体和选择性TrkA拮抗剂K2 5 2a研究对上述作用的阻断效应。同样的分组进行细胞划痕修复实验。 96孔板AngioMatrix胶上观察E2 及NGF对RF 6A内皮细胞管腔形成能力的影响。 结果 RF 6A在细胞外基质胶上可形成管腔样结构。RT PCR检测到ER α、NGF及NGF受体TrkA的mRNA。 1nmol L～ 1 0 0nmol LE2 可以剂量依赖性的增强细胞活力及单层细胞的划痕修复能力 ,其增强作用可部分被NGF抗体及 1 0 0nmol L的K2 5 2a选择性阻断。凋亡率检测显示各组凋亡率相近。E2 可促进RF 6A形成管腔 ,但不能被NGF抗体、TrkA阻断。 结论 除VEGF外 ,E2 还可通过NGF信号系统对视网膜血管内皮细胞活力、划痕修复起促进作用。但结果提示 ,阻断NGF信号系统不影响E2 促RF 6A形成管腔的作用。

突触囊泡蛋白研究进展

突触囊泡蛋白 (Synaptophysin,Syp)是分布于突触囊泡膜上含量丰富的糖蛋白之一 ,与递质释放关系密切 ,并可影响突触可塑性。Syp可作为神经元和神经内分泌细胞的可靠标记物用于神经系统形态、功能和发育以及相关疾病的研究。对于 Syp的功能及其具体作用机制 ,尚待进一步研究。

人眼球前后段发育的定量研究

目的 了解胚胎时期眼球前、后段的确切大小及其变化规律。方法 解剖 45例不同时期的眼球 ,制备眼球壁外层铺片。用计算机图像分析技术测量角膜和巩膜表面积 ,计算角膜所占整个眼球的面积比。绘制角膜与眼球表面积增长曲线。结果 人胚胎眼球在第 12周以前增长比较缓慢 ,此后眼球表面积增长迅速。角膜在眼球表面积中所占的比值在整个胚胎发育过程中变化不大 ,保持在 1/10～ 1/11;成人约为 1/15。结论 人眼角膜、巩膜在胚胎期近似成比例生长 ,出生以后眼后段生长明显快于出生前。成人角膜占眼球表面积的 1/15。

干细胞神经定向分化研究与医学转化

作为一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞,人类多能性干细胞,包括人胚干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)及人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)等,能进一步分化成为多种类型的功能细胞,修复受损组织,有望为解决退行性疾病与组织损伤等难题提供新的途径。根据发育生物学理论,目前已建立有效的干细胞分化方案,可将人多能干细胞分化为特定类型的神经元和胶质细胞,包括GABA能、多巴胺能、脊髓运动神经元,以及星形胶质细胞和少突胶质细胞。本文综述了当前干细胞生物学中的与神经分化相关的几个热点问题,着重介绍人类与小鼠干细胞生物学方面的差异及干细胞研究向再生医学转化中的问题,特别是我国干细胞研究医学转化所面临的机遇与挑战。这些问题的解决将对提高我国的干细胞研究水平,推动干细胞研究向医学应用转化具有重要意义。

血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子-2及雌激素受体在早产儿视网膜病发病机制中的作用

目的 测定新生小鼠视网膜正常发育及视网膜病时血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）和雌激素受体（ER）表达的改变,了解它们在早产儿视网膜病（ROP）发病机制中的作用.方法 选择7日龄（P7）C57BL/6J新生小鼠474只,雌雄各半,分为吸氧组和对照组两大组,再按性别分成4小组,用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）测定VEGF、FGF-2和ER的mRNA水平,用免疫组化测定它们的蛋白水平.具体分组及取材时间为：组1（n=126）,吸氧组,雌性;组2（n=126）,吸氧组,雄性,两组均自吸氧后每天分离视网膜至P21（P8～P21）行RT-PCR,每天摘眼石蜡包埋后行免疫组化;组3（n=111）,对照组,雌性;组4（n=111）,对照组,雄性,均自P7起每天分离视网膜至P17（P7～P17）行RT-PCR,自P7起每天摘眼至P21（P7～P21）行免疫组化.结果 （1）VEGF mRNA在正常小鼠自P7起上升,P9达高峰,P11起下降并始终维持低水平;在吸氧组自P8起显著下降,且在整个吸氧阶段持续降低,至出氧箱后缓慢上升,自P15起显著上升,并和对照组形成显著差异,受氧浓度的调节非常明显.FGF-2 mRNA在正常小鼠始终维持相对稳定的低水平;在吸氧组,吸氧期间无明显变化,出氧箱后3 d开始上升.ER mRNA在正常小鼠自P7起上升,P9达高峰,P11起下降并始终维持低水平;在吸氧组,吸氧期间变化与对照组相似,出氧箱后5 d开始上升,并维持较高水平直至P21.这3个细胞因子的蛋白水平变化均晚于其基因水平变化,但变化趋势基本相同.（2）性别和吸氧都不能单独影响上述细胞因子的表达（P＞0.05）;日龄可独立地影响它们的表达;吸氧和日龄两因素结合起来可显著影响它们的表达（P＜0.000 1）.结论 引起ROP发病的根本原因是早产,吸氧是其重要的外因;VEGF、FGF-2和ER参与血管的形成,在视网膜血管正常发育和ROP的发病机制中起重要作用;VEGF直接受氧浓度调节,在众多细胞因子中可能起关键性作用.

提前接受光照对小鼠视网膜TH和bFGF表达的影响

目的在通过手术使小鼠提前睁眼接受光照,并成功诱发近视的基础上,进一步研究TH和bFGF在视网膜中的表达变化,以探讨早产近视的发病机理。方法实验用新生第4d的C57BL/6J小鼠,通过手术分离单侧上、下眼睑,使之提前睁眼并接受正常光照,在第14d检查两眼屈光力,应用RT-PCR和免疫组化方法,检测视网膜中bFGF和TH的表达。结果提前接受光照能诱导形成-9.77±0.09D的相对近视。RT-PCR结果显示提前光照小鼠视网膜TH和bFGFmRNA含量明显减少(t值分别为4.316和12.189,P<0.01)。免疫组织化学显示TH免疫阳性反应主要分布在节细胞层、内网层和内核层,bFGF免疫阳性反应主要分布在内网层及其两侧的部分节细胞和内核层细胞,另在内网层和视锥视杆层也有微弱表达。免疫组织化学染色显示提前光照小鼠视网膜中TH和bFGF的表达量明显下降。结论研究表明新生小鼠提前光照后,其视网膜TH和bFGF的表达都明显下降,提示TH和bFGF与早产近视的形成有密切关系。

人眼结膜杯状细胞的定量研究

目的 :研究杯状细胞在结膜各个方位的分布、形态及数量。方法 :6眼 (3 0～ 90岁 )结膜 ,采用切片结合铺片的方法 ,1 %阿利新兰、0 .3 %甲苯胺兰、HE染色 ,经显微摄像头输入Macintosh图象处理系统计数。结果 :杯状细胞呈多房空泡状 ,圆形 ,核偏位 ,单个、散在或密集分布。不同年龄组均以鼻下象限数量最多。 80～ 90岁组杯状细胞的绝对数明显下降。结论 :切片、铺片联合图象处理系统可以定量、准确地计算杯状细胞在结膜中的绝对数 ,从而为眼表疾病的研究提供有力的参考指标。

视网膜细胞培养上清液对骨髓基质细胞的诱导分化作用

目的探讨视网膜细胞培养上清液对骨髓基质细胞(BMSCs)的诱导分化作用。方法原代培养胚龄17d(E17)及生后3d(P3)SD大鼠的视网膜细胞,分别收集培养上清液,过滤后与DMEM按2:3混合,用此混合液诱导BMSCs,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,对诱导后的细胞进行神经丝蛋白(NF)、胶质源性纤维酸性蛋白(GFAP)及视网膜特异性标记物进行免疫化学染色,统计分析阳性细胞数;再用RT-PCR进一步检测诱导结果。结果E17和P3细胞上清液均能诱导BMSCs表达NF[(10.35±2.66)%,(10.64±3.94)%]和GFAP[(27.86±7.97)%,(24.38±5.80)%],但只有P3细胞上清液诱导的BMSCs表达视蛋白(opsin),同时RT-PCR也检测到视细胞发育调节转录因子Crx mRNA的表达。结论视网膜细胞培养上清液可以诱导BMSCs向神经元、胶质细胞与视细胞分化。

基于发动机激励的客车振动分析

利用ANSYS建立客车整车有限元模型,对整车模型进行了约束模态分析,在模态分析的基础上进行发动机激励的谐响应分析,考虑发动机垂向振动,研究发动机输出的简谐力引起的车身位移响应,以考察车身各部位的振动情况,最终提出解决客车振动的方案。

新生小鼠吸入高氧视网膜的血管发育与胶质纤维酸性蛋白表达的变化

目的:研究新生小鼠吸入高氧视网膜病(ROP)过程中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化规律,探讨M黮ler细胞与血管发育的关系.方法:实验用生后7d(P7)C57BL/6J小鼠.ROP模型组在75%氧环境中饲养.在P9、P12、P14、P17和P21等不同时间取眼球,分别用ADP酶组织化学染色方法显示视网膜血管发育及免疫组织化学方法标记视网膜GFAP的表达.结果:小鼠视网膜血管生后开始发育,P21基本成熟;吸高氧后从P14开始出现新生血管,在P17～P21达到高峰.模型鼠视网膜M黮ler细胞从P14起内侧突起开始表达GFAP,到P21已遍布细胞全层.结论:高氧可导致视网膜发育晚期大量血管新生,且与GFAP表达的变化规律相一致,提示M黮ler细胞与视网膜血管发育关系密切.

氧诱导的血管增生性视网膜病变小鼠模型

目的 建立可量化的血管增生性视网膜病变小鼠模型。方法 将鼠龄为7d的C57BL/6J幼鼠17只暴露于75％氧浓度环境下饲养持续5d,然后回到正常空气中饲养;17只同龄幼鼠置于正常空气环境中饲养作为对照。ADP酶法视网膜铺片了解视网膜血管的改变;用组织切片观察并计数突破视网膜内界膜的内皮细胞核数目;视网膜组织切片用CD31进行免疫组织化学染色。结果 持续高浓度氧使幼鼠视网膜血管收缩、分支闭塞、中央部可见灌注降低,相对低氧使视网膜血管扩张、增生。组织切片可见正常对照组平均每张切片突破内界膜内皮细胞核数目<1个,给氧组平均24个/切片,两组比较差别有显著性意义(P<0.01)。给氧组视网膜组织切片经用CD31抗体处理后显示内界膜玻璃体面细胞染色阳性。结论 该模型具有可重复性强、可定量研究的优点,是进行视网膜新生血管发生机制及药物干预的合适模型。

晶状体损伤促进视神经再生的作用及机制

目的：研究晶状体损伤对视神经再生的促进作用,并探讨巨噬细胞所起的作用。方法：成年 SD 大鼠钳夹造成视神经损伤模型(NC),戳伤晶状体(LP),玻璃体内注射酵母多糖(ZI)或注射体外活化的单核/巨噬细胞 (MI),动物以此分组。用 Nissl 染色法显示存活的视网膜节细胞(RGCs),用抗 GAP-43抗体标记轴突再生 RGCs,用抗 ED-1抗体标记活化的单核/巨噬细胞。结果：NC+LP 组存活的 RGCs 比 NC 组明显增加,再生的 RGCs 及活化的单核/巨噬细胞都有明显增多的结果。NC+ZI 组与 NC+MI 组也有类似结果。结论：晶状体损伤具有显著促进视神经再生的作用,其机制可能与趋化并激活巨噬细胞有关。

电动汽车正面40%偏置碰撞仿真分析

在ANSYS Workbench中对电动汽车模型进行几何简化,将简化后的模型在VPG中划分有限元网格,同时建立整车有限元模型,然后按照欧洲ECE R94法规建立该电动汽车的正面40%偏置碰撞有限元模型,最后利用显式有限元法进行碰撞仿真分析,提出改进措施。

大客车驾驶员有无手部抓握力的伤害对比数值分析

利用MADYMO软件建立大客车和假人模型,模拟仿真大客车驾驶员在有无手部抓握力的情况下的正面碰撞,对比驾驶员的头部与胸部这两种情况下的伤害数值,分析得出造成不同伤害值的原因。最后得出,在碰撞仿真中,假人在有手部抓握力的作用下受到的伤害小于无手部抓握力作用下受到的伤害,这对以后的研究有一定的参考意义,其他碰撞仿真也可借鉴。

玻璃体内移植骨髓基质细胞显著减少小鼠氧诱导视网膜病血管新生(英文)

目的:探索通过玻璃体内细胞移植预防和治疗早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity,ROP)的可能途径。方法:获取成年大鼠骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSC),并连续传代。应用免疫组织化学和ELISA技术检测MSC中及MSC条件培养基(MSC-CM)中生长因子的表达。通过体外检测内皮细胞增殖、迁移和管腔形成确认MSC-CM的作用。将DiI标记的MSCs细胞移植入氧诱导视网膜病(oxygen induced retinopathy,OIR)模型小鼠玻璃体腔。应用免疫荧光技术检测神经或胶质细胞分布与分化标志。采用视网膜整装片ADP酶组织化学染色和视网膜前内皮血管细胞核计数方法评估新生血管的抑制作用。转染血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)干扰RNA质粒的MSCs验证VEGF的保护作用。结果:体外培养的MSCs表达VEGF,胰岛素生长因子(insulin-like growth factors,IGF)和神经生长因子(nerve growth factor,NGF)。MSC-CM促进体外培养内皮细胞的增殖,迁移和管型形成。发现眼内移植后,标记的MSCs聚集在视网膜前的玻璃体内,或者整合入视网膜,并表达胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)。吸入高氧前玻璃体内注射MSCs能显著缓解视网膜新生血管。体外和体内研究证实转染VEGF干扰RNA质粒的MSCs后其保护作用减弱。结论:在OIR早期移植MSCs能显著减少新生血管形成。VEGF等因子的旁分泌,可能在此过程发挥重要作用;通过细胞移植保护视网膜血管可以作为治疗ROP的潜在途径。

计算机作图计算神经核团的体积

目的研究神经核团体积的计算方法。方法根据神经核团切片的剖面面积，通过计算机作图及图形处理进行神经核团体积的计算。结果每例标本由不同的细胞剖面面积得到一条细胞剖面面积拟合曲线，然后将各例曲线经拉伸、拟合，得到一条剖面面积曲线，由此曲线求得神经核团体积。结论通过剖面面积拟合曲线，较准确地计算神经核团的体积并观察该核团剖面大小的变化规律。

新生小鼠视网膜病变的基因表达谱变化

目的应用基因芯片技术研究早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity,ROP)基因表达谱的变化规律及意义。方法7日龄C57BL/6J新生小鼠暴露于75%的高氧5d后回到空气中,制成ROP动物模型,应用Trizol法抽提17日龄小鼠ROP模型及同时期对照组小鼠的视网膜总RNA,逆转录并用Cy3和Cy5标记,与小鼠Oligo表达谱芯片杂交,扫描后获取基因表达信息,进行差异分析、聚类分析和基因分类等生物信息学分析。结果与正常小鼠比较,视网膜病变小鼠有1347个基因呈差异表达。SOM聚类显示12类不同的表达差异变化模式,基因本体学分析显示变化的基因并不局限于血管生成相关因子,发育相关基因及G蛋白信号通路相关基因改变亦很明显(P<0.05)。结论ROP小鼠视网膜基因表达谱有较大改变,为今后从分子生物学角度探索该病发病机制和进行基因治疗奠定基础。

人胚胎干细胞来源多巴胺前体细胞治疗帕金森病猴

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见于中老年人的神经系统退行性疾病,由中脑腹侧的多巴胺能(dopaminergic,DA)神经元缺失造成。这类疾病可通过移植由人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESC)或其他途径获得的多巴胺能神经元实现治疗。然而,在应用于临床之前,需要对这些多巴胺能神经元的安全性和有效性在合适的动物模型中进行充分、全面的评价。为评价由临床级人胚胎干细胞分化的多巴胺能神经元是否安全、有效,根据先导专项部署,我们建立了MPTP诱导的帕金森病猴模型,并将由人胚胎干细胞定向分化的多巴胺能神经元植入受损猴脑区。结果表明,在所有接受细胞移植的猴中,未发生移植细胞形成的肿瘤和继发肿瘤。移植细胞可分化为多巴胺能神经元并使局部多巴胺水平提高,带来不同程度的行为学改善。这些发现提示,多能干细胞分化的多巴胺能神经元移植治疗帕金森病安全、有效,可进一步应用于帕金森病的治疗。