Hela细胞蛋白质分离和肽质量指纹谱鉴定方法的建立

目的研究Hela细胞总蛋白质的分离及利用肽质量指纹谱对蛋白质进行鉴定的方法。方法提取了Hela细胞的总蛋白质,通过双向电泳技术对蛋白质进行了分离,并应用图像扫描仪及图像分析软件获取蛋白质点的数字化信息。对其中不同丰度的蛋白质点,进行胶内酶切后,通过基质辅助激光解吸/电离直角型飞行时间质谱(MALDIO-TOF-MS)分析,再将检测出的多肽质量数通过Mascot搜索引擎检索NCBInr数据库。结果获得了Hela细胞总蛋白质双向电泳图谱及蛋白质点的数字化信息,通过MALDIO-TOF-MS检测得到的肽质量指纹谱再经过网上公共数据的检索从而获得3个蛋白质点分别是α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)、γ-肌动蛋白(γ-actin)和过氧化物酶2(peroxiredoxin 2)。结论Hela细胞总蛋白质双向电泳的分离效果较好,肽质量指纹谱法能有效地对Hela细胞的蛋白质斑点进行鉴定。

围绝经期2型糖尿病患者雌激素与心血管危险因素的相关性研究

目的探讨围绝经期2型糖尿病(T2DM)患者雌激素与心血管危险因素的相关性。方法选取277例围绝经期T2DM患者,根据绝经期分为绝经前期121例(对照组)和绝经后期156例(病例组),收集两组患者的一般资料、空腹血糖(FPG)、血脂、体重指数(BMI)、血压、糖化血红蛋白(HbA1C)、甲状腺功能、雌激素(E2)、颈动脉内膜中层厚度等。对E2与心血管疾病各个危险因素腰围、FPG、HbA1C、总胆固醇(TC)等进行相关性分析。结果 (1)两组糖尿病病程、腰围、游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)等基线数据相比,差异均无统计学意义(均P>0.05)。病例组年龄、BMI、FPG、HbA1C、SBP、TC、颈动脉内膜中层厚度均高于对照组,血清E2水平低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。(2)E2水平与腰围、FPG、Hb A1C、TC之间呈负相关,与LDL呈正相关。多元线性回归分析提示FPG、TC、腰围为血清E2的独立影响因素。结论 T2DM女性患者绝经后多种心血管危险因素如FPG、TC、腰围等水平升高,具备更高的心血管疾病发病风险,并可能通过E2水平的降低而增加发生心血管疾病的风险。

通过液质联用鉴定蛋白质相互作用方法的建立

蛋白质是生命功能的执行者，但大多数蛋白质并不能单独行使其功能，而是通过与其他蛋白质相互作用来参与细胞或组织的生理活动。蛋白质组学研究的轰轰烈烈兴起开启了人们解析各种生命活动以及生理功能的新思路，近些年已经由比较蛋白质组学研究逐渐过渡到功能蛋白质组学研究。构建蛋白质相互作用网络能展示出两种以上蛋白质之间的相互依赖性以及这些蛋白质相互作用所起到的重要生理功能。

利拉鲁肽对2型糖尿病肾病患者肠道菌群的影响

目的观察利拉鲁肽对2型糖尿病肾病(DN)患者肠道菌群的影响。方法选取2017年3月~2019年6月在本院就诊的DN患者60例为研究对象,随机分为两组,A组使用西格列汀片口服,B组使用利拉鲁肽针皮下注射。治疗前检测血清空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿白蛋白/肌酐比值(UACR)、β2-微球蛋白(β2-MG)等。治疗后检测粪便肠道菌群双歧杆菌、普雷沃菌、乳杆菌和肠杆菌的数量。采用Pearson相关性分析分析DN肠道菌群与微量白蛋白尿指标的相关性。结果(1)治疗前两组患者FPG、HbA1c、UACR,β2-MG比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)治疗6个月后,B组双歧杆菌和普雷沃菌的菌落数显著高于A组,A组肠杆菌菌落数高于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)B组的β2-微球蛋白和尿白蛋白肌酐比值较A组均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)双歧杆菌与β2-MG、UACR呈负相关(r=-0.437.-0.612)。普雷沃菌与β2-MG、UACR呈负相关(r=-0.488.-0.435)。而肠杆菌与β2-MG、UACR呈正相关(r=0.650.0.679),以上数值差异均有统计学意义(P<0.05)。结论利拉鲁肽通过增加糖尿病肾病患者肠道菌群益生菌的数量,改善微量白蛋白尿,最终起到额外保护肾脏的作用。

人乳牙牙髓干细胞全蛋白质非胶分级分离电泳分析

目的对人乳牙牙髓干细胞全蛋白质进行非胶分级分离电泳,并用液质联用质谱分析所得蛋白质组分。方法对人乳牙牙髓干细胞进行裂解,将所得的细胞全蛋白质均分到12孔样品槽里进行非胶分级分离电泳,液相回收电泳后的12个组分,对各组分进行SDS-PAGE分离,并对各组分进行溶液酶切后再进行液质联用质谱分析。结果 SDS-PAGE图谱显示人乳牙牙髓干细胞全蛋白质经非胶分级分离电泳分成了12个不同的蛋白质组分,液质联用对各组分进行分析均成功鉴定到一定数目蛋白质。结论非胶分级分离电泳能将复杂蛋白质样品进行预分离,液相回收分离后样品便于进行液质联用分析。

根除幽门螺杆菌对糖尿病血糖变异性的影响

目的观察根除幽门螺杆菌对糖尿病胃轻瘫（DPG）患者血糖变异性的作用。方法选择2012年6月～2014年6月116例幽门螺杆菌阳性DGP患者随机分为两组，A组进行三联根除幽门螺杆菌治疗（埃索美拉唑＋呋喃唑酮＋左氧氟沙星），其中A组加用莫沙比利片。B组仅口服莫沙比利片，两组均进行72h动态血糖监测，比较两组间动态血糖指标，症状积分以及临床生化指标。结果治疗后，与B组比较，A组症状积分、最大血糖波动幅度（LAGE）、日内血糖平均波动幅度（MAGE）、餐后血糖波动幅度（MPPGE）、空腹血糖（FPG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL—c）均降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论根除幽门螺杆菌可明显改善幽门螺杆菌阳性糖尿病患者胃轻瘫症状，有利于改善血糖变异性。

糖尿病足溃疡患者糖化血红蛋白与创面愈合的相关性分析

目的随访并定期监测糖尿病足溃疡(DFU)患者的糖化血红蛋白(HbA1c),分析糖化血红蛋白相关指标与糖尿病足溃疡愈合的相关性.方法收集105例DFU住院患者的临床资料:包括糖尿病用药,并发症,基线HbA1c等.随访糖尿病足溃疡患者的溃疡创面愈合与糖化血红蛋白相关指标变化的相关性.结果随访期间每隔3个月检测HbA1c,随访HbA1c与预期HbA1c比值为1.0.创面溃疡治疗期间,最低HbA1c为6.9%,较基线的中位变化为20.1%.平均糖化血红蛋白中位数为7.5%,较基线的中位变化19.8%.在调整模型中,基线糖化血红蛋白与创面愈合无关.基线HbA1c<7.5%的受试者中,基线HbA1c最低值变化范围分层结果与区间(0.1~2.1)相比,(-1.5^-0.4)区间提示基线HbA1c最低值此范围与长期伤口愈合呈正相关(HR2.10,95%CI 1.05~3.92),但该组HbA1c的平均变化与创面愈合无相关性.结论在DFUs患者中,基线或预期HbA1c与伤口愈合间无临床意义的关联.在血糖基线控制较好的参与者中,伤口愈合加速与糖化血红蛋白较基线降低相关.

西北民族地区农民公共服务需求表达机制研究

西北民族地区的农民公共服务的供给机制存在严重缺陷,公共服务供给不足。在财力约束下,政府在公共服务供给中发挥的作用相对有限。从西北民族地区农民的民族差异性以及地区差异性看,现有的公共服务供给类型和结构与当前农民的实际需求存在一定的差距。必须从西北民族地区现阶段发展的实际情况出发,合理构建农民公共服务需求表达机制,改变自上而下的公共服务供给模式,构建以西北民族地区农民公共服务需求为导向,政府主导、社会参与的公共服务供给模式,加快公共服务供给机制的改革和完善。

匙吻鲟、杂交鲟和鳙肌肉品质的比较研究

分析养殖匙吻鲟(Polyodon spathula)、杂交鲟(hybrid sturgeon)和鳙(Aristichthys nobilis)肌肉理化及营养特性,对3种鱼的肉质进行评价。结果表明:鳙的含肉率显著高于两种鲟鱼(P<0.05),两鲟鱼间差异不显著(P>0.05);匙吻鲟肌肉粗蛋白含量与杂交鲟、鳙之间均无显著差异(P>0.05),杂交鲟肌肉粗蛋白含量显著低于鳙(P<0.05);对于粗脂肪含量杂交鲟与匙吻鲟和鳙之间无显著差异(P>0.05),匙吻鲟显著高于鳙(P<0.05);粗灰分含量鳙显著高于两种鲟鱼(P<0.05)。3种鱼的脂肪酸由3种饱和脂肪酸和6种不饱和脂肪酸组成,杂交鲟不饱和脂肪酸含量显著高于匙吻鲟、鳙(P<0.05);匙吻鲟单不饱和脂肪酸含量显著高于杂交鲟和鳙(P<0.05);多不饱和脂肪酸含量杂交鲟>匙吻鲟>鳙,3种鱼之间差异显著(P<0.05);高不饱和脂肪酸含量3种鱼之间差异显著(P<0.05),鳙>杂交鲟>匙吻鲟。动脉粥样化指数匙吻鲟显著低于鳙(P<0.05);血栓指数匙吻鲟与杂交鲟之间无显著差异(P>0.05),但均显著低于鳙(P<0.05)。杂交鲟熟肉率显著低于鳙(P<0.05),胶原蛋白的含量显著高于鳙(P<0.05);液体流失率、水分流失率匙吻鲟显著低于杂交鲟、鳙(P<0.05);脂质流失率、肌纤维直径匙吻鲟与杂交鲟之间无显著性差异(P>0.05),但脂质流失率两种鲟鱼显著低于鳙(P<0.05),肌纤维直径两种鲟鱼显著高于鳙(P<0.05);生肉硬度匙吻鲟与鳙之间无显著差异(P>0.05),但均显著低于杂交鲟(P<0.05);黏附性、内聚性、回弹力、剪切力杂交鲟均显著高于鳙(P<0.05);弹性匙吻鲟显著高于鳙(P<0.05);黏性、咀嚼性三者之间差异显著(P<0.05),杂交鲟>匙吻鲟>鳙。熟肉硬度匙吻鲟与杂交鲟、鳙之间无显著差异(P>0.05),杂交鲟显著高于鳙(P<0.05);内聚性、回弹力匙吻鲟显著高于杂交鲟、鳙(P<0.05);弹性匙吻鲟显著高于鳙(P<0.05);黏性、咀嚼性匙吻鲟显著高于鳙(P<0.05);剪切力匙吻鲟显著低于鳙(P<0.05)。多汁性、油腻、风味浓度3种鱼之间无显著性差异(P>0.05);嫩度匙吻鲟<杂交鲟<鳙,匙吻鲟显著低于鳙(P<0.05)。研究认为,匙吻鲟风味较好,健康指数较为理想,杂交鲟与之相似。鳙可提供较高水平的蛋白和HUFA等不饱和脂肪酸,其嫩度也相对较好。

蛋白质组学方法分析多T迷宫训练后的小鼠空间记忆蛋白

应用双向凝胶电泳结合质谱鉴定和数据库检索,分析比较C57BL/6J小鼠在多T迷宫(MTM)训练和记忆测试组与未训练组海马蛋白表达的差异,探讨与MTM空间记忆相关的蛋白质.C57BL/6J小鼠经MTM训练后,可对相应的空间线索保持记忆能力,其海马蛋白质表达存在明显差异,14个蛋白质与MTM空间记忆形成显著相关.其中,6个蛋白点表达显著上调,8个蛋白点表达水平显著降低.这些蛋白按功能可分为6类:细胞骨架相关蛋白,物质运输相关蛋白,蛋白合成相关蛋白,能量和物质代谢相关蛋白,信号转导相关蛋白,通道蛋白.这些空间记忆形成相关蛋白的研究深化了对空间记忆机制的认识,为研究和治疗认知相关疾病提供了新靶标.

微波辅助的蛋白质酶解方法

近些年，蛋白质组学研究技术手段不断进步，研究策略不断更新，归纳起来主要分为2种策略：“top—down”策略和“bottom-up”策略。“top-down”策略是先对蛋白质混合物进行分离，然后进行蛋白质酶解和质谱鉴定¨引。将蛋白质混合物通过凝胶电泳分离，从凝胶上切点进行胶内酶解，再通过质谱鉴定蛋白质，这就是最常见的“top-down”策略（3）。“bottom-up”策略是指将蛋白质混合物酶解后得到更为复杂的多肽混合物，经多维高效液相色谱分离后进行串联质谱鉴定获得肽段序列信息，再搜索蛋白质数据库确定最后的鉴定结果（4）。这2种蛋白质组学研究策略都包含了蛋白质酶解这个步骤，虽然目前针对蛋白质分离和鉴定都有一些快速自动化的方法，但是对于蛋白质酶解及质谱上样之前的准备工作仍然步骤繁杂，耗时费力，严重影响了蛋白质大规模鉴定的速度。本文介绍一种快速酶解的方法，通过微波的辅助大大简化了蛋白质酶解步骤，并缩短了酶解所需时间（5-8）

祛湿化浊汤联合饮食、生活方式调整对非酒精性脂肪肝的干预效果

非酒精性脂肪肝(non - alcoholic fatty liver,NAFLD)是一种常见的非过量饮酒而发生的肝脏脂肪样变性疾病,其特征是肝细胞中三酰甘油的积累[1]及无炎症证据的肝脂肪变性[ 2].NAFLD与肥胖、代谢综合征、胰岛素抵抗等因素引起的脂类、葡萄糖和胆固醇代谢紊乱密切相关[3];其呈进行性发展,肝硬化、肝癌是NAFLD发展的最后阶段,严重威胁着患者的生命健康[4].随着人们饮食、生活及工作方式的改变,NAFLD在全世界的发病率越来越高,并且大多数患者伴有肥胖[5].目前 NAFLD尚无特异性治疗手段,改变饮食习惯、调整生活方式、减轻体质量是防治NAFLD 的主要手段,并且对延缓其进展具有积极的作用[6].

变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A的表达、纯化与鉴定

目的在大肠杆菌中高效表达变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A(ribose 5-phosphate isomerase A,rpiA),并对表达产物进行纯化和鉴定。方法根据GenBank中变异链球菌UA159株基因组rpiA的DNA编码序列,设计PCR引物,扩增变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A的DNA编码序列,将其克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达;对培养温度、IPTG用量、诱导时间等条件进行了优化;用亲和层析、离子交换层析纯化目标蛋白;用SDS-PAGE和质谱对目标蛋白进行鉴定。结果变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A在大肠杆菌中高效、可溶性表达,经质谱鉴定及SDS-PAGE分析,表达产物为变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A蛋白。经过纯化,得到纯度高达95%的变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A。结论成功地在大肠杆菌中高效表达了变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A蛋白,并建立了纯化工艺,得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究变异链球菌属核糖-5-磷酸异构酶蛋白的生物学活性及功能奠定了基础。

几种不同提取方法对Hela细胞总蛋白双向电泳结果的影响

目的比较几种不同的提取方法对Hela细胞总蛋白双向电泳图谱的影响。方法采用反复冻融裂解法、超声加冰浴裂解法、室温振摇及试剂盒纯化法提取Hela细胞总蛋白,进行双向凝胶电泳(2-DE)。以7cmpH3-10NL固相pH梯度胶条做一向等电聚焦,上样量为300μg,SDS-PAGE做二向垂直电泳,改进的胶体考马斯亮蓝染色,ImageMaster2D Platinum软件分析电泳图谱。结果反复冻融裂解法得到的2-DE图谱条纹很多,蛋白点数较少(400±);超声加冰浴裂解和室温振摇法得到的2-DE图谱横向条纹明显减少,蛋白点数明显增加(分别为700±和800±);进一步用试剂盒纯化法得到的2-DE图谱基本上没有蛋白拖尾现象,且加Destreak试剂后蛋白点数有所增加(由800±→900±),但纯化的同时有低丰度蛋白的丢失。结论超声加冰浴裂解和室温振摇法处理细胞,可得到条纹较少、蛋白点数较多较全的2-DE图谱;进一步用蛋白纯化试剂盒和Destreak试剂纯化样品能更好地解决碱性端的横向拖尾,得到较多的蛋白点。

人乳牙牙髓干细胞和恒牙牙髓干细胞的蛋白质组学比较

目的采用蛋白质组学方法研究人乳牙牙髓干细胞(SHED)和恒牙牙髓干细胞(DPSC)中的蛋白表达差异。方法应用双向凝胶电泳技术分离SHED和DPSC的细胞总蛋白。通过比较两种细胞的蛋白组学图谱,确定差异表达的蛋白点,而后对差异点进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析和蛋白数据库信息检索,对差异蛋白进行功能分类。结果建立了SHED和DPSC的蛋白质组图谱,经软件分析出45个差异蛋白点,其中26个表达上调,19个表达下调,再经质谱鉴定出48种蛋白,其生物学功能涉及细胞周期、代谢等。结论 SHED与DPSC中蛋白的差异表达体现了两种细胞在结构和功能上的异同性,为进一步研究SHED和DPSC在增殖、分化中的差异,以及牙齿相关干细胞在组织工程和再生医学研究中的应用提供参考。

温肾健脾汤治疗脾肾阳虚型老年亚临床甲状腺功能减退症56例

亚临床甲状腺功能减退症(SCH)是一种全身性代谢综合征,是由于甲状腺激素抵抗或是低甲状腺素血症所导致的,使得促甲状腺激素(TSH)及其相关甲状腺抗体水平显著增高。SCH多发生于老年人群,女性多于男性,患者的临床症状不十分典型,可以危及血脂代谢、心血管系统,导致血脂水平异常,也是冠心病及动脉硬化的独立危险因素。临床上主要采用甲状腺激素替代疗法治疗SCH,虽然可以缓解患者的临床症状,但是对于患者心血管系统的损害难以完全逆转,且长期服用的不良反应也较严重。

全程饮食干预模式对T2DM合并NAFLD患者血糖、血脂达标率及生活质量的影响

目的:探讨全程饮食干预模式对2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者血糖、血脂达标率及生活质量的影响。方法:随机选取为我院于2016年8月间至2018年8月间收治的100例T2DM合并NAFLD患者,并将其均分为对照组(n=50)和实验组(n=50)。其中对对照组患者行常规治疗,对实验组则在前者基础上配合全程饮食干预模式。结果:实验组患者血糖及血脂标达标率均优于对照组,且前者生活质量状况更佳,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:全程饮食干预模式对T2DM合并NAFLD患者具有积极意义,可在提升其血糖及血脂达标率同时.改善其生活质量。

大型离心机集中管理与维护

本文介绍了大型离心机的集中管理、使用和维护。从离心机的实验室配置、维护保养方面加强管理;对使用人员进行安全和操作培训,包括合理选择离心机和转子、设置离心条件和注意事项,以确保离心机的安全应用,发挥其效能。

河南省农村土地保障功能重塑

农村土地保障功能逐步弱化。重塑农村土地保障功能不仅有助于实现农民增收,也可以充分发挥其作为社会保障的替代作用。政府应在土地制度改革和农业科学化发展方面积极作为。

生物活性肽蛋白质组分分离与鉴定方法的建立

目的:评估大规模蛋白质组分离与鉴定技术策略在生物活性肽研究中的应用价值。方法:采用全溶液酶解及胶内分离与酶解方法分离生物活性肽;肽段离子阱串联质谱鉴定时,采用碰撞诱导解离与电子转移解离2种互补的肽段碎裂模式。结果:几种方法联用,鉴定到复杂生物活性肽样品中236个多肽大分子;不同分离和鉴定策略显示出良好的互补性,基于凝胶电泳分离的策略提供了最好的鉴定效果。结论:大规模的蛋白质组学分离与鉴定技术策略可以有效应用于生物活性肽组分的表征。