原料乳及牧场环境中的微生物多样性及嗜冷菌污染源分析

原料乳中嗜冷菌超标会产生较高水平的耐热蛋白酶和脂肪酶,这两种酶是导致产品进入货架期后出现质量问题的重要原因。为探究牧场奶牛生活环境以及原料乳在流转过程中不同环节的微生物多样性,找出牧场中嗜冷菌的污染来源,本研究选取河北地区某规模化奶牛养殖场,采集TMR饲料、牛舍垫土、头三把奶、头三把奶之后的常规乳以及储奶罐中的原料乳等样品,利用宏基因组测序技术对所有样品的菌群结构、嗜冷菌种类及丰度进行分析。结果表明:在门水平上,主要微生物为变形菌门、厚壁菌门、放线菌门,在属水平上主要是无形体属、链球菌属、肠球菌属、短螺菌属、芽孢杆菌属、假单胞菌。此外对样品中的关键嗜冷菌(假单胞菌)进行分析,牛舍垫土的多样性最丰富的,包含了牧场中常规乳及储奶罐中乳假单胞菌种类的99.63%和96.39%,说明牛舍垫土是各类假单胞菌潜在的污染源。

原料乳和牧场环境中嗜冷菌多样性及蛋白酶水解特性研究

为探究原料乳和牧场环境中嗜冷菌多样性及产酶性能,该研究从中国4个地区的规模化牧场采集不同环节的原料乳及牧场环境样品,基于纯培养技术对嗜冷菌进行分离鉴定,分析中国地区嗜冷菌多样性,明确嗜冷菌的污染分布,并进一步对其中的假单胞菌(Pseudomonas)的蛋白酶活力测定及碱性肽酶基因(aprX)进行检测。结果显示,从64份样品中共分离到329株嗜冷菌,归为21个属,76个种。假单胞菌属是牧场中分布最广的污染菌株,占总分离菌株的57.45%,在28℃下,61.38%的假单胞菌株能产生蛋白酶,其中高达92.24%的假单胞菌株携带aprX基因,所产生的蛋白酶经135℃处理5 s后仍有21.55%的酶残留率超过60%。该研究牧场中原料乳及牧场环境嗜冷菌种类丰富,产耐热蛋白酶能力较强。

具有缓解犬腹泻功能乳酸菌的分离鉴定及益生功能评价

研究旨在从健康犬粪便中分离筛选具有缓解犬腹泻功能的乳酸菌。通过革兰氏染色、16S rDNA序列分析对健康犬粪便中分离的30株菌进行鉴定,对菌株抑菌能力、抗生素敏感性、耐酸耐胆盐能力及细胞黏附能力进行评价,选出最佳菌株进行动物试验。结果显示:J40、J48等9株乳酸菌对大肠杆菌、志贺氏菌、沙门氏菌和空肠弯曲杆菌等具有较好抑菌效果,J40抑菌效果最强。抗生素敏感性试验显示:9株乳酸菌对青霉素、氨苄西林及头孢噻吩等3种抗生素均高度敏感,表明9株菌株不携带上述耐药基因,具有一定安全性和可控性。试验筛选的4株菌株在pH值2、胆盐浓度0.1%条件下培养2 h的存活率均不低于50%,具有较好的耐酸耐胆盐能力;4株菌对Caco-2细胞的黏附个数均大于6,J40黏附性能最佳。选用J40作为治疗组对志贺氏菌攻毒幼犬进行体内试验,结果显示:菌株J40可有效降低幼犬腹泻率,治疗细菌性腹泻。研究表明,J40可作为宠物用微生态制剂的潜在益生菌株。

变质原料乳中假单胞菌的分离鉴定及产蛋白酶特性研究

[目的]为了解导致原料乳变质的微生物种类及其产蛋白酶活力。[方法]对广东省恒远市某规模化牧场提供的蛋白水解、脂肪上浮的变质原料乳稀释,涂布在MPC琼脂平板上。将平板于6.5℃恒温培养箱培养10 d,挑取形态不同的单菌落在LB液体培养基复壮增菌,提取其DNA,利用16S rDNA方法对分离的菌株进行鉴定,并对该菌株的蛋白酶活力及高温钝化后酶残留率进行测定。[结果]MPC琼脂板菌落形态单一,原料乳中分离鉴定出的两株菌均为霍氏假单胞菌,该菌株在28℃下对乳平板的水解圈为(15.35±0.56)mm,经135℃处理5 s,其蛋白酶残留率为43.63%。[结论]变质原料乳中分离到两株霍氏假单胞菌,并且该菌可产生热不敏感的蛋白酶,该酶的存在会造成原料乳中蛋白质水解,导致UHT乳在货架期内出现蛋白水解、胀包等质量问题。