用蛋白A胶体金免疫电镜技术观察绵羊进行性肺炎病毒

本实验应用蛋白A胶体金免疫电镜技术与IEM、DEM、SPA-SPIEM比较观察了OPP-CMV_(40)-1株和CMV-33AN株。蛋白A胶体金方法所制备的样品在透射电镜下可观察到抗原—抗体复合物形成的抗体桥,在抗体桥上可看到病毒粒子。胶体金通过抗体桥分布在病毒颗粒的周围,胶体金周围还有多量病毒粒子。病毒颗粒呈球形,直径为80～100nm、外有一层囊膜,囊膜上有长约8nm的纤突。

慢病毒病OPP和CAE的抗原相关性对比试验

近几年我们在慢病毒OPP和CAE病的流行病学调查和诊断上研究了许多血清学方法,而且对两种病毒的分子生物学方面也进行了探索。 这些病毒颗粒都具有结构蛋白(Strucfu reproterin)和包膜糖蛋白(Glyccpro-terin—GP)两种蛋白抗原成分,出现琼脂凝胶免疫扩散(AGIDtest)交叉沉淀抗体反应,其核苷酸序列虽各不相同,但据新疆兽医所分离的两种病毒颗粒,实质是同一亚科病毒的不同毒株,主要抗原性是一致的,OPP病毒和CAE病毒的抗原组分在血清学上是相关的。特别是病毒囊膜上的主要糖蛋白(GP)和一种结构多肽(P30)。 首先用AGID检查血清阳性山羊,然后再用阳性反应山羊的CAE病变及病毒的分离来证实慢病毒OPPV和CAEV的抗原相关性。

口蹄疫病毒VP1基因的原核可溶性表达

针对重组原核表达载体表达目的蛋白以包涵体形式存在的问题,作者对影响外源蛋白表达的IPTG的浓度、温度、时间等因素均进行了探索,以观察VP1蛋白的可溶性情况。通过PCR技术将VP1基因克隆至pGEM-T载体中,然后将pET-28a(+)和pGEM-T载体分别进行双酶切,构建重组的pET-28a-VP1载体,将重组载体转化至BL21中,诱导后经SDS-PAGE检测可见约29 ku的目的蛋白条带。插入的外源目的蛋白主要以包涵体的形式存在,上清中的可溶性蛋白甚微。试验结果表明,这可能与蛋白本身的氨基酸组成有重要关联。

O型口蹄疫病毒VP1基因在2种原核表达载体上的表达

设计1对引物将口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)VP1基因克隆到T载体上,通过NdeI和XhoI双酶切VP1基因和pET-28(a),在T4连接酶的作用下构建重组表达载体pET-28a-VP1;然后用EcoR I和XhoI双酶切VP1基因与pET-41(a),在T4连接酶的作用下构建重组表达载体pET-41a-VP1;然后将这2个新构建的载体分别通过热冲击法转化BL21(DE3),37℃不同IPTG浓度和32℃、0.01 mmol/L IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示pET-28a-VP1的表达量高于pET-41a-VP1,在DTT和乙醇的作用下,二者均没有可溶性蛋白出现。

牛O型口蹄疫AD10新型佐剂灭活疫苗免疫持续期试验

对自行研发的实验室条件下制备的牛O型口蹄疫AD10新型佐剂灭活苗进行了3个批次疫苗免疫持续期试验,同时设置现行常用的油佐剂灭活苗作为对照组。其评估方法为在首免后每间隔第15天采用液相阻断ELISA试剂盒检测血清中O型口蹄疫抗体水平,并选择在一定免疫时段进行攻毒保护试验以确认疫苗的免疫效果,真实评价牛O型口蹄疫AD10新型佐剂灭活苗免疫牛的免疫持续期和对口蹄疫的抗感染能力。试验结果表明,本次试验AD10佐剂免疫组与现行常用油佐剂组免疫抗体水平和免疫持续期大致相同,对幼畜的免疫程序应在首次免疫60d后进行第二次加强免疫,免疫效果可达到6个月的免疫持续期。