热带假丝酵母不同培养条件下丝化的研究

研究了热带假丝酵母在不同培养条件下的丝化情况，实验中发现丝化率与菌体生长有着密切关系，对数期中后期丝化率处于低谷，稳定期早期丝化率达到最高。在液体培养条件下丝化率随着生长曲线呈“W”型波动；固体培养条件下丝化率随着生长曲线变化分为：持续增长型，“W”型，平缓“N”型。丝化率因培养基不同而有较大差异，不同培养基中丝化率最大能差近60％，其中以麦芽汁平板上的平均丝化率最高，稳定期平均丝化率达到了82％，液体YPD中最低。丝化率随时间变化幅度大小也因培养基而异。

影响热带假丝酵母丝化的因素

研究了影响热带假丝酵母丝化的因子,发现菌体形态与细胞的生理活性有关。在高温、加入前发酵残液这样的不利环境下,球形细胞比例明显上升,丝化率随前发酵残液加量的增加而降低。高温环境中,开始时,菌体生长受到抑制,当菌浓有所增加后,丝化率几乎下降为0,上述结果初步显示了球形细胞更能够抵抗不利环境。另外,热带假丝酵母在限氮的条件下,菌体的丝化明显增加。丙二酸的加入明显地抑制了菌体的丝化。随丙二酸浓度的增加,丝化率逐渐下降,0.02 mol/L以上几乎无丝化的细胞,这进一步证明了菌体形态的变化有其生理生化基础。

热带假丝酵母诱变菌株筛选的两步浓缩与影印技术

为提高热带假丝酵母转化烷烃生产长链二元酸的能力 ,建立了通过两步浓缩和双重影印技术筛选获得 α、ω-氧化增强、β-氧化减弱的热带假丝酵母诱变菌株的筛选体系。热带假丝酵母经过硫酸二乙酯和紫外诱变 ,其中的 β-氧化减弱或阻断的细胞在含有制霉菌素的 SEL1-1培养基中得到浓缩 (浓缩效率为 8倍 ) ;α、ω-氧化增强的突变株在含有氯丙嗪的 YPD培养基中被进一步浓缩 (浓缩效率为 3倍 )。此外 ,应用 SEL1影印技术 ,Alk-突变株可以被快速地分离出来。在 5× 10 8个诱变处理的细胞中应用上述体系筛选获得了 43株 β-氧化减弱或阻断的菌株。接着 ,通过 SEL2影印技术 ,获得了 10株 α。