应用双功能经颅彩色多普勒测定正常人脑动脉血流速度

对１８０名健康自愿者，１６２０段颅内动脉进行彩色多普勒超声检测。每例观察包括左右大脑前、中、后动脉，椎动脉（颅内段）及基底动脉，分别测量各段血管的收缩期峰值流速、舒张末期流速、搏动指数、阻力指数。并将其分成２０～２９岁，３０～３９岁，４０～４９岁，５０～５９岁，６０岁以上五个年龄组进行比较。统计学处理后结果显示：同名血管相同年龄组不同性别血流参数无显著差异（Ｐ＞０．０５）；同一受检者左、右两侧同名血管血流参数无显著差异（Ｐ＞０．０５）；血流速度随年龄增加而呈逐渐降低趋势（Ｐ＜０．０５）。并列出了正常人脑动脉血流速度的参考值。

鲨鱼软骨血管生成抑制因子的抗体制备与组织特异性表达的检测

纯化鉴定了鲨鱼软骨血管生成抑制因子 (SharkCartilage derivedAngiogenesisInhibitoryFactor Ⅰ ,SCAIF Ⅰ )的纯度及分子质量 .采用新西兰大白兔背部皮下多点注射法制备了SCAIF Ⅰ的多克隆抗体 ,测定了抗体的效价 .通过Westernblot检测 ,证明了SCAIF Ⅰ相关蛋白在哺乳动物中的广泛分布及SCAIF Ⅰ在鲨鱼软骨中的组织特异性表达 .

一种新的血管生成抑制因子—TSF的设计及表达

目的 选择 PF4和 TSP1的高活性片段设计融合基因— TSF,在大肠肝菌表达 ,细胞水平上检测表达产物的生物学活性。方法 PF4的 C—末端 13肽和 TSP1的 4 2 9～ 4 5 9片断 31肽通过 Gly-Pro- Gly肽桥设计为融合蛋白— TSF。采用 p GEX- 2 T载体在 E.coli JM10 9中表达 TSF蛋白。采用 MTT方法测定 TSF及其相关物 GST- TSF、PF4 (5 8- 70 )、TSP1(42 9～ 4 5 9)等对血管内皮细胞、平滑肌细胞、QGY772 1人肝癌细胞、HL F人肺成纤维细胞等生长的抑制效应。结果 合成的 TSF融合基因 ,克隆到p GEX- 2 T载体 ,转化 E.coli JM10 9,获得了 TSF蛋白的高效表达。建立了 TSF蛋白的纯化复性方法 ,获得了 GST- TSF融合蛋白及 TSF蛋白。TSF、GST- TSF、PF4 (5 8～ 70 )和 TSP1(42 9～ 4 5 9)均特异抑制血管内皮细胞的生长 ,其中 TSF的活性最强 ,活性大小次序为 TSF>GST- TSF>PF4 (5 8～ 70 ) >TSP1(42 9～ 4 5 9)。结论 融合表达蛋白— TSF在细胞水平上能高效特异抑制血管内皮细胞的生长。

口服丙型肝炎复合多表位DNA减毒鼠伤寒沙门活菌苗的实验研究

目的 利用减毒鼠伤寒沙门菌作为载体，探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） 口服ＤＮＡ 疫苗的可行性。方法 把ＨＣＶ 复合多表位抗原基因ＰＣＸ 克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３（ＣＭＶ 启动子） ，构建ＨＣＶ 真核表达载体ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ，转化减毒鼠伤寒沙门菌ＳＬ３２６１ ，获得ＨＣＶ 重组口服ＤＮＡ 活菌苗ＳＬ３２６１ （ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ） ，免疫小鼠及家兔后，检测特异性免疫应答及安全性。结果 ＳＬ３２６１（ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ） 在小鼠及家兔中均可诱发低水平的特异性体液免疫及细胞免疫应答，免疫动物未见明显的毒性反应。结论 ＨＣＶ 口服减毒鼠伤寒沙门菌ＤＮＡ 疫苗可诱发特异性的免疫应答，为ＨＣＶ

血管生成抑制因子TSF的设计、表达及其对血管生成的抑制效应

ＰＦ４的Ｃ－末端１３肽和ＴＳＰ１的４２９～４５９片段３１肽通过Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ肽桥设计为融合蛋白ＴＳＦ．采用ｐＧＥＸ－２Ｔ载体在 Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９中获得了 ＴＳＦ蛋白的高效表达．采用 ＭＴＴ方法、损伤细胞迁移实验。鸡胚绒毛尿囊膜实验和小鼠移植肿瘤抑制实验，测定了ＴＳＦ及其相关物ＧＳＴ－ＴＳＦ，ＰＦ４（５８－７０），ＴＳＰ１（４２９～４５９）等对血管生成和肿瘤生长的抑制效应．结果显示ＴＳＦ特异抑制小牛主动脉血管内皮细胞的生长，并有明显的剂量依赖关系；非常显著抑制血管内皮细胞的运动迁移；显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管生成；上述抑制活性ＴＳＦ＞＞ＧＳＴ－ＴＳＦ＞ＰＦ４（５８～７０）＞ＴＳＰ１（４２９～４５９）．ＴＳＦ显著抑制小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的生长，１．０μｍｏｌ／ｋｇ·ｄ的ＴＳＦ对Ｌｅｗｉｓ肺癌的抑瘤率达到６８．７５％．结果说明ＴＳＦ的重组设计是成功的，ＴＳＦ为一个人工重组的有效的血管生成抑制因子．

tTSF基因的酵母表达及其基因治疗研究

目的选择PF4,TSP1的高活性片段及肿瘤细胞靶向肽,设计合成融合基因-tTSF,进行酵母表达及小鼠基因治疗研究。方法根据PF4和TSP1的抑制血管生成高活性片段设计合成TSF基因,并在N-端接上肿瘤细胞靶向肽,设计合成了tTSF。将tTSF基因构建到pPIC9质粒,重组质粒pPICg／ tTSF转化GS115酵母菌株进行表达,并检测表达产物对血管内皮细胞生长的抑制作用。将tTSF基因克隆到pcDNA3．1(+)载体,重组质粒pcDNA3．1(+)／tTSF通过皮下注射治疗C57BL／6小鼠移植肿瘤 Lewis肺癌。结果重组质粒pPIC9／tTSF转化GS115酵母菌株后,获得了tTSF的高效表达,表达产物对血管内皮细胞生长产生明显的抑制作用;皮下注射重组质粒pcDNA3．1(+)／tTSF后,C57BL／6小鼠移植肿瘤Lewis肺癌的生长受到明显抑制。结论 tTSF基因设计成功,其酵母表达产物对血管内皮细胞生长产生具有明显的抑制作用,tTSF基因的体内基因治疗也具有显著的抗肿瘤效应。

丙型肝炎病毒及恶性疟原虫复合抗原基因表达及诱导小鼠免疫应答的研究

将合成的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）复合多表位抗原基因ＰＣＸ及恶性疟原虫（Ｐｆ）多价抗原基因ＡＢ（ＳＰｆ６６＋ＳＰｆ１０５）克隆到表达载体ｐＷＲ４５０ｌ中，以β半乳糖甘酶（ＧＺ）ＨＣＶＰｆ复合多肽抗原的形式在大肠杆菌中高效融合表达了目的蛋白ＧＺＣＡＢ，表达量约３０％。所表达的重组抗原可被ＨＣＶ患者血清及鼠抗Ｐｆ抗体特异识别，显示了该融合蛋白质具有ＨＣＶ和Ｐｆ的免疫原性。该蛋白免疫小鼠后，诱发针对ＧＺＣＡＢ、ＧＺＰＣＸ及ＰｆＡｇ的特异性体液免疫应答及针对ＧＺＣＡＢ、ＧＺＰＣＸ的迟发性超敏反应，ＣＤ８＋Ｔ细胞明显升高，提示该复合抗原作为ＨＣＶＰｆ双价疫苗的可行性。