温度对体外大鼠睾丸支持细胞增殖及occludin蛋白表达的影响

目的:通过观察不同温度对原代大鼠睾丸支持细胞增殖作用与紧密连接蛋白occludin(OCLN)表达的影响,探讨温度因素在男性生殖功能降低或男性不育中的作用机制。方法:体外分离培养雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC),油红O染色及免疫组化FasL鉴定。实验分为对照组(34℃)和实验组(35℃、36℃、37℃、38℃、39℃)。在相应的温度下培养4 d后,CCK-8法检测SC增殖作用,HE染色观察细胞形态及结构,Western印迹法和免疫荧光法检测OCLN表达水平。结果:体外培养SC的纯度为(96.20±1.95)%,CCK-8结果显示,细胞增殖活性在34～36℃时逐渐增强,36～39℃时逐渐降低,并在镜下观察发现细胞核固缩、裂解明显;免疫荧光及Western印迹显示,36℃时OCLN表达量最高;高于36℃时,OCLN表达量随着温度的增加而降低(P<0.01)。结论:温度升高(>36℃)抑制SC的增殖活性,并降低SC紧密连接蛋白的表达量。因此,高温对SC活性和紧密连接完整性的影响,可能是导致男性生育能力下降或不育的机制之一。

不同温度下体外大鼠睾丸支持细胞胶质细胞源性神经生长因子的表达

目的:通过观察不同温度下体外大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC)胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)表达特点,探讨高温致不育的机制。方法:采用组合酶消化法和选择性贴壁法分离雄性Wistar大鼠睾丸SC,将分离的SC分别置于不同温度进行体外培养,观察其贴壁、形态学变化,FasL免疫组化鉴定。实验分为对照组(35℃)、实验组(36℃、37℃、38℃、39℃)。CCK-8法检测SC增殖情况,HE染色观察细胞形态及结构,RTPCR、免疫荧光及Western印迹检测细胞GDNF的表达。结果:本实验条件下,体外分离培养SC纯度=(95.30±2.15)%(n=10),CCK-8实验结果显示,36℃时细胞增殖率最高(P<0.01),>36℃时,随着温度的提高,增殖率逐渐降低,39℃对细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.01);免疫荧光结果显示,GDNF表达于SC胞质,36℃时荧光最强,RT-PCR及Western印迹检测结果显示,高于36℃时,GDNF mRNA及蛋白的表达随着温度的增加而降低,36℃、37℃、38℃、39℃4组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:不同温度下,体外培养SC的增殖能力和GDNF表达明显不同。>36℃时,随着温度的提高,增殖能力受到抑制,GDNF表达水平显著降低。本研究结果证实,高温下大鼠睾丸SC正常功能受到抑制,从而影响生精功能。

低氧对原代支持细胞增殖能力和occludin蛋白表达的影响

目的:观察低氧对原代大鼠睾丸支持细胞生长活性、occludin蛋白表达的影响。方法:18～22日龄Wistar大鼠,通过两步酶消化法,建立原代支持细胞培养体系,经油红O、免疫荧光法鉴定。传代后随机分为以下氧浓度组进行培养:20%、15%、10%、5%和1%。分别培养至6、12、24、48、72 h,CCK-8测定细胞增殖活性,West-ern印迹测定occludin蛋白表达量,并进行差异性分析。结果:油红O染色见胞质内脂滴染成红色,免疫荧光见FasL蛋白表达阳性,细胞纯度>95%。与20%氧浓度相比,细胞在15%和10%氧浓度下增殖率逐渐降低,5%和1%氧浓度下,细胞增殖率明显下降(P<0.01);从12 h开始,随着氧浓度降低和时间延长,occludin表达量明显下降(P<0.01)。结论:低氧会抑制支持细胞生长,并减少occludin蛋白表达。推测低氧环境损伤支持细胞参与的血睾屏障完整性,影响睾丸的生精过程。

糖尿病并发泌尿系结石感染的常见因素分析及治疗对策

目的:对糖尿病并发泌尿系结石感染因素及治疗措施进行探讨。方法:选取本院2017年8月至2018年8月期间收治的186例泌尿系结石感染患者,其中将合并糖尿病的93例患者作为观察组,未合并糖尿病的93例患者作为对照组,对比分析两组感染因素,并给予患者积极治疗。结果:免疫功能各指标对比,观察组均低于对照组;血糖水平对比,观察组明显高于对照组,两组差异有统计学意义,P<0.05。结论:对糖尿病患者而言,因其血糖水平较高、免疫力低下,因此发生泌尿系结石感染的可能性较大,对糖尿病并发泌尿系结石感染患者积极治疗,对患者临床症状能有效缓解,值得推广。

小蓟饮子联合左氧氟沙星治疗经尿道前列腺电切术后并发症的临床效果分析

目的分析研讨小蓟饮子联合左氧氟沙星治疗经尿道前列腺电切术后并发症的临床效果。方法随机从我院2016年5月-2017年9月期间收治的经尿道前列腺电切术患者中抽取80例进行讨论,用随机数字法分组,其中40例接受左氧氟沙星治疗(对照组),另40例接受小蓟饮子联合左氧氟沙星治疗(研究组),观察比较治疗疗效,如膀胱痉挛次数、血尿转阴时间等。结果研究组治疗总疗效95%高于对照组77.50%,数据差异明显(P<0.05)。比较IPSS、QOL评分,治疗前,数据无明显差异(P>0.05),治疗后,研究组QOL、IPSS评分均低于对照组,数据差异明显(P<0.05)。研究组膀胱痉挛次数、血尿转阴时间低于对照组,数据差异较大(P<0.05)。结论小蓟饮子联合左氧氟沙星治疗前列腺汽化电切术后并发症,疗效确切,可显著改善患者血尿转阴、膀胱痉挛,值得推广。

高温对原代支持细胞增殖能力和occludin紧密连接蛋白的影响(英文)

目的:研究高温对原代大鼠睾丸支持细胞增殖作用和对紧密连接蛋白的损伤机制。方法:体外分离培养雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC),免疫组化FasL鉴定。实验分为对照组(36℃)和实验组(37℃、38℃、39℃)。在相应的温度下培养5d后,CCK-8法检测SC增殖作用,Western印迹法检测OCLN表达水平。结果:体外培养SC的纯度>90%,CCK-8结果显示,细胞增殖活性在36℃时最强,37～39℃时逐渐降低;Western印迹显示,36℃时OCLN表达量最高;高于36℃时,OCLN表达量随着温度的增加而降低(P<0.05)。结论:高温影响SC增殖活性,破坏了支持细胞紧密连接蛋白的正常表达和血睾屏障的完整性,从而影响正常精子的形成。

双酚A对体外大鼠睾丸支持细胞闭锁蛋白Occludin表达的影响

目的观察双酚A（BPA）对体外大鼠睾丸支持细胞增殖能力与闭锁蛋白Occludin（OCLN）表达的影响，探讨BPA对精子发生的损伤机制。方法体外分离培养雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞，油红O染色鉴定。实验分为BPA染毒组（25laM、50uM和100IIM分别处理细胞24h）、溶剂对照组（无血清DMEM／F12＋DMSO＋细胞悬液）和空白对照组（无血清DMEM／F12）。CCK-8法测支持细胞增殖活性，WesternBlot法检测OCLN表达水平。结果分离培养大鼠睾丸支持细胞纯度〉90％。CCK-8实验结果显示：BPA对支持细胞增殖活性具有抑制作用，BPA浓度〉103uM时，存活率明显降低，细胞存活率〈44％，其差异有统计学意义（P〈0．05）。WesternBlot法检测结果显示，OCLN蛋白表达随着BPA染毒剂量的增加而降低，呈剂量依赖性，不同染毒剂量组与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论BPA可抑制睾丸支持细胞增殖活性和OCLN的表达，干扰支持细胞正常的生精过程。