耐高温α-淀粉酶高密度高表达发酵条件的优化

通过摇瓶实验对产耐高温α-淀粉酶的重组菌E.coli BL21的高密度高表达发酵条件进行研究。考察不同培养基和不同发酵条件对该菌株产耐高温α-淀粉酶的影响,并利用正交试验进行优化。结果表明:在葡萄糖0.5g/L,酵母粉15g/L,pH6.5,诱导时机为接种后发酵4h,诱导时间为6h,IPTG添加量为0.8mmol/L,接种量为体积分数3%的优化条件下,该重组菌发酵液菌体生物量为原来的1.29倍,酶活力达到8.754U/mL,是原来的1.55倍,目的蛋白的表达量也为原来的1.24倍。

牡蛎蛋白水解产物中α-葡萄糖苷酶活性抑制组分的分离与纯化

采用硫酸铵沉淀法从大连湾牡蛎Ostrea talienwhanensis crosse软体部分中获得水溶性蛋白质,发现胃蛋白酶水解牡蛎蛋白质产物的部分组分具有α-葡萄糖苷酶(AGD)抑制活性,其AGD抑制活性IC50值为40 mg/mL。经过色谱分离纯化,并经MALDI-TOF/MS质谱检测,最终在离子交换HPLC纯化中反映出的单一吸收峰,表现出4个核质比不同的质谱峰,说明是非单一物质,因而没有进行结构分析。根据牡蛎蛋白质水解产物的AGD抑制作用,牡蛎蛋白具有开发为降血糖产品的可能性。

鱿鱼肝脏鱼油的制备及其脂肪酸组成分析

系统地研究了从鱿鱼肝脏中提取油脂与精炼鱼油的方法,并对其理化性质及脂肪酸组成进行了分析。结果表明:精炼后的鱿鱼油澄清透明,略显淡黄色,并有淡淡的鱼腥味,其各项指标均符合SC/T3502-2000鱼油一级标准;应用气相色谱/质谱法分析了鱿鱼油的脂肪酸组成,精炼鱿鱼油中多不饱和脂肪酸(PUFA)的含量较高(36.5%),其中C20∶5(EPA)和C22∶6(DHA)的含量分别为13.1%和20.3%。

植物雅龙果的化学成分研究

目的 研究植物雅龙果的化学成分。方法 利用多种柱色谱进行分离,通过理化性质和光谱数据确定化合物结构。结 果 得到5个植物多酚类化合物:异槲皮苷(Ⅰ),芦丁(Ⅱ),咖啡酸(Ⅲ),氯原酸(Ⅳ),槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅴ)和2个 植物甾醇类化合物:β-谷甾醇(Ⅵ),胡萝卜苷(Ⅶ)。结论 化合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅴ-Ⅶ均为首次从该植物中分离得到。

超声波辅助提取鱼脑磷脂的研究

以鲣鱼脑为原料,对鱼脑磷脂超声提取方法进行了研究。以磷脂提取率为评价指标,通过单因素和正交试验优化了鱼脑磷脂提取的条件。结果表明:以正己烷-乙醇(体积比2∶1)为提取溶剂,超声提取时间为40 min,超声温度为35℃,固液比为1∶9(g∶mL),超声提取2次,在此条件下鱼脑磷脂的提取率达到氯仿-甲醇法的87.1%;通过薄层色谱分析,确定鲣鱼脑磷脂中含有磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和神经鞘磷脂3种磷脂;用气相色谱法测定鲣鱼脑磷脂的脂肪酸组成,高不饱和脂肪酸中DHA和EPA的含量分别为21.1%和2.4%。研究表明,用超声法提取鱼脑磷脂具有可行性,鱼脑磷脂中含丰富的不饱和脂肪酸,在食品加工中具有一定的应用前景。

刺参性腺中6种磷脂含量的HPLC-ELSD分析

为了研究刺参Apostichopus japonicus性腺的磷脂组成,对刺参性腺中的磷脂进行分离纯化,利用高效液相色谱-蒸发光散射检测器,以ChromolithPerformance-Si正相整体硅胶柱(100 mm×4.6 mm)为固定相,使用正己烷(含0.04%三乙胺)、异丙醇和13%乙酸为流动相进行三元梯度洗脱,流速为1.5 m L/min,柱温为25℃,整个洗脱程序仅需24 min,蒸发光检测器温度为45℃,雾化气(空气)流速为1.7 L/min,在此条件下,对所提取的磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰胆碱(PC)、鞘磷脂(SM)和溶血磷脂酰胆碱(LPC)进行测定。结果表明:刺参性腺磷脂中PC含量最高,为4.637 g/kg,其次为PE和PS,分别为1.884、0.847 g/kg。研究表明,用此方法测定刺参性腺中的磷脂快速、准确,各磷脂组分分离良好,重复性高,对其他磷脂样品的测定也具有重要的参考价值。

海带ACE酶抑制剂的浸提工艺研究

以海带为研究对象,采用RP-HPLC法测定其水浸提液对ACE酶活性的抑制作用,从而探讨海带浸提液的降血压活性。通过单因素实验和正交实验,考察浸提料液比、浸提时间、浸提温度对海带浸提液活性的影响。结果表明,浸提的最佳工艺条件是料液比1:200,在30℃的水浴中浸提24h。在此条件下所得的海带根部浸提液、中部浸提液和假根浸提液对ACE酶活性的抑制率分别为66.7%、22.8%及80.7%,海带假根浸提液的活性最强。对浸提液的成分分析结果表明,海带假根浸提液中蛋白质、碘、总糖及岩藻聚糖硫酸酯含量最低,而氨基酸、钙离子和硫酸根含量最高。钠、镁、钾三种元素在海带根部、中部及假根浸提液中的含量差别不大。

利用高效液相色谱-蒸发光检测器法分析鮰鱼脑中磷脂组成

对鮰鱼脑中的磷脂进行提取纯化,利用高效液相色谱-蒸发光检测器法对鮰鱼脑的磷脂含量进行检测。结果表明:鮰鱼脑磷脂中磷脂酰胆碱含量最高,占磷脂含量的45.73%,磷脂酰乙醇胺次之,含量为17.39%,磷脂酰丝氨酸含量为5.01%,磷脂酰肌醇含量为1.20%,相对较低。磷脂标准品在各自的质量浓度检测范围内线性关系良好,并且鮰鱼脑的磷脂中各组分分离效果良好,对于其他磷脂样品的测定也具有重要的参考价值。

大型海藻纤维素的提取与分析

大型海藻富含多糖类物质,尤其是其细胞壁中纤维素含量较高。我国是世界第一大经济海藻生产国,主要养殖大型褐藻及红藻供食用及提取藻胶等化学品。目前,对海藻纤维素资源的利用尚处于研究开发阶段,海藻纤维素因其独特的结构与性质,在能源、材料、保健食品等领域展示出良好的应用前景而受到广泛研究关注。本文对近年来国内外文献报道的海藻纤维素相关研究,重点对其分离提取及理化性质分析等内容进行了梳理总结,以期为我国经济海藻精深加工领域研究工作提供参考。

血红蛋白片段的合成及生物活性

采用多肽固相合成方法,以Wang树脂为载体,Fmoc为N-端氨基酸保护基,HOBt-HBTU为缩合试剂,合成了一系列血红蛋白α链的片段,产物经RP-HPLC和质谱进行了确定.生物活性研究结果表明,该系列多肽具有较高的血管紧张素Ⅰ转换酶抑制活性,但不具有α-葡萄糖苷酶抑制活性.

源于食品蛋白质的血管紧张素I转换酶抑制肽

血管紧张素I转换酶(ACE)是一种重要的血压调节因子,该酶的一些抑制剂有较好的降压效果,并作为预防和治疗高血压的食品和药物被广泛地使用。本文对不同食品来源的ACE抑制肽降压机理、结构和功能关系、应用前景进行了概述。

鱿鱼肝脏活性肽的制备及生物活性研究

[目的]为鱿鱼肝脏的高值化利用提供基础研究数据。[方法]以鱿鱼肝脏蛋白为原料,通过蛋白酶水解来制备生物活性肽,研究了多种蛋白酶水解鱿鱼肝脏制得水解液的抗凝血活性、抑制血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)活性及抗氧化活性。[结果]当鱿鱼肝脏水解液浓度为5 mg/ml时,中性蛋白酶的水解液对ACE抑制率为68.0%;APTT值为59.8 s,TT值为34.2 s,比空白对照组分别延长26.7和20.6 s,表明鱿鱼肝脏的中性蛋白酶水解液具有抗凝血活性。中性蛋白酶解液对Fe3+的还原力为0.588,羟自由基清除能力为64.5%,说明鱿鱼肝脏中性蛋白酶水解液具有较好的抗氧化活性;而其余的木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶的鱿鱼肝脏水解液的抗凝血活性和ACE抑制活性均低于中性蛋白酶水解液的酶解液活性。[结论]鱿鱼肝脏蛋白质具有较好的综合利用价值。

新疆盐生植物对α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究

对10种新疆盐生植物提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性进行初步研究。在10种盐生植物的70%乙醇提取物中,大叶补血草的α-葡萄糖苷酶抑制活性较高,IC50值为1.77mg/mL;水提取物中,琵琶柴、多枝柽柳、花花柴的α-葡萄糖苷酶抑制活性较高,IC50值分别为2.53、1.21、1.52mg/mL。本文选取的10种新疆盐生植物中部分植物提取物具有一定的抑制α-葡萄糖苷酶活性。

酶法水解珠蛋白制备血管紧张素Ⅰ转换酶抑制肽

分别用3种不同的蛋白酶对珠蛋白进行水解,测定不同水解时间所得产物对血管紧张素I转换酶(ACE)的抑制活性,并对抑制活性最高的水解液进行分离.结果表明:胃蛋白酶水解珠蛋白所得的水解液对ACE的抑制率最高,其半抑制浓度(IC50)为1.19 mg/mL,用SephadexLH20对其进行分离,所得的第5组分的IC50为0.10 mg/mL,活性比水解液提高了12倍.

斑点叉尾鮰鱼肠蛋白酶的分离纯化及其酶学性质

以斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus鱼肠道为原料提取蛋白酶,对分离条件进行了优化,并对部分酶学性质进行了研究。结果表明:鱼肠内的蛋白酶在硫酸铵饱和度为70%时,所得沉淀中酶活力最高。经过阴离子交换层析分离后,蛋白酶的纯化倍数达到了218倍。该蛋白酶的最适温度为55℃,最适pH为7.5,具有良好的低温稳定性和酸碱稳定性,米氏常数为5.4 g/L。K+和Ca2+离子对该蛋白酶活性有较弱的激活作用,Mg2+则能显著激活蛋白酶活性;Na+和Zn2+对蛋白酶的活性有较弱抑制作用,而Cu2+和EDTA能显著抑制蛋白酶活性。

胃蛋白酶水解珠蛋白的研究

以从猪血中提取的珠蛋白为原料,用正交实验法对胃蛋白酶水解珠蛋白的工艺进行了深入研究.探讨了酶用量、底物浓度、温度、pH值及作用时间对水解度及水解产物对血管紧张素I转换酶(ACE)抑制率的影响,确定了水解珠蛋白的最适工艺条件.实验结果表明,胃蛋白酶水解珠蛋白的最适条件为:用1.0%(酶与底物比,w/w)的胃蛋白酶在37℃和pH 2.0的条件下作用底物浓度为3%珠蛋白溶液12 h,此时水解度可达12.55%,产物对ACE的抑制率达到94.68%.

植物雅龙果叶抑制ACE活性的研究

为研究植物雅龙果叶子降血压活性,利用HPLC对其50%丙酮-水提取物、正丁醇和水萃取部分及其从正丁醇萃取部分中分离得到的两种单一化合物进行了ACE抑制活性的检测。结果表明上述样品均具有一定的抑制ACE活性,50%丙酮-水提取物、正丁醇萃取部分以及芦丁和咖啡酸的EC50值分别为53、30、4.1、2.2mg/mL。

Thermococcus siculi HJ21 α-淀粉酶Asp186定点突变对酶活性的影响

为确定超嗜热古菌Thermococcus siculi HJ21 α-淀粉酶(TSA)中特定氨基酸及所在位点与酶活性间的关系,以含TSA基因的pEt-28a-His6质粒为模板,利用定点突变技术,将第186位点的天冬氨酸(Asp)突变为天冬酰胺(Asn),突变子转化至E.coli BL21(DE3)并经IPTG诱导表达,测定突变前后的酶活性,定点突变后的TSA无酶活性;采用DNAStar和Deepview蛋白分析软件,预测突变前后TSA蛋白的二级结构和三级结构,结果表明Thermococcus siculi HJ21 α-淀粉酶的186位点对维持TSA的酶活性具有重要意义,它的突变导致酶蛋白二级结构组件及氢键网络的改变。

植物糖基转移酶在植物抗病过程中的研究进展

植物在复杂的环境中进化出了各种反应来应对危害,其中糖基化作用就是植物利用的一种主要的生理机制。糖基化作用通过改变受体化合物的生物活性及其细胞内的定位来降低外源物质对自身的影响,从而达到植物体生理代谢的稳态。植物中的糖基转移酶就是专门负责实现这种糖基化反应的酶类。简要概述了糖基转移酶在植物抗性过程中的研究方法、分类及生物学功能,并对其研究方向加以展望。

HPLC-ESI-MS对珠蛋白酶解液中的血管紧张素I转换酶抑制肽的分离鉴定

本实验利用ESI-MS/MS对反相高效液相色谱分离的具有血管紧张素I转换酶(ACE)抑制活性的珠蛋白小肽的结构进行鉴定。结果表明:此肽的序列为Val-Val-Tyr-Pro-Trp-Thr(VVYPWT),位于猪的血红蛋白β链的34-39氨基酸序列片断,它对ACE有很好的抑制活性,其IC50为6.02μmol/L。