肝素对人髓系白血病K562细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨肝素对长春新碱诱导的人髓系白血病K562细胞增殖及凋亡的影响。方法：肝素（5、25、50、100、200U／mL）处理K562细胞1h后，加入长春新碱（0．05μg／mL）24h，应用Trypan blue拒染法和MTT法检测不同浓度肝素对K562细胞增殖的影响，DNA琼脂糖凝胶电泳检测肝素对长春新碱诱导的K562细胞凋亡的影响。结果：肝素各组的细胞数量与对照组之间差异均无统计学意义（P均〉0．05），肝素各组的OD值与对照组之间差异均无统计学意义（P均〉0．05）；肝素在5～200U／mL的浓度时能够抑制长春新碱诱导的K562细胞凋亡及DNA凋亡梯带的形成。结论：不同浓度肝素对K562细胞无毒，无刺激或抑制作用，但可抑制由长春新碱诱导的K562细胞凋亡。

抗TNF-α和IL-1βIgY抗体治疗豚鼠过敏性鼻炎机理研究

目的:探讨抗TNF-α和IL-1βIgY治疗豚鼠过敏性鼻炎的作用及机制。方法:随机分正常对照组(C组,17只)、模型组(M组,27只)、0.1%抗TNF-α和IL-1βIgY治疗组(Z1组,21只)、丙酸氟替卡松治疗组(Z2组,21只);应用卵清白蛋白建立豚鼠过敏性鼻炎模型;分别在治疗后2、4、8 h进行鼻灌洗和支气管肺灌洗,收集鼻灌洗液(NLF)和支气管肺泡灌洗液(BALF),观察炎症细胞;HE染色观察鼻黏膜和肺组织病理改变;免疫组化分析其炎症因子原位表达情况。结果:M组鼻黏膜可见大量嗜酸性粒细胞浸润和炎症改变,肺间质水肿、肺间隔和支气管平滑肌增厚,嗜酸性粒细胞浸润,Z1组和Z2组炎症病理改变明显减轻。NLF和BALF中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞在Z1和Z2组显著少于M组(P<0.05)。Z1组鼻黏膜IL-1β和肺组织IL-1β和TNF-α从2 h开始,而IL-5和IL-33从4 h开始表达显著低于M组(P<0.05)。结论:抗TNF-α和IL-1βIgY滴鼻治疗显著减轻了豚鼠过敏性鼻炎伴过敏性支气管哮喘的炎症病理反应,抑制了嗜酸性粒细胞浸润及炎症细胞因子表达。

山药多糖抗神经细胞缺氧性凋亡机制研究

目的探讨山药多糖抗神经细胞缺氧性凋亡作用机制。方法运用SD胎鼠大脑皮层神经细胞建立缺氧性神经细胞损伤体外模型,再使用不同质量浓度山药多糖处理,Rh-123染色检测线粒体损伤,RT-PCR及免疫细胞化学测定Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白表达。结果山药多糖抑制缺氧的神经细胞线粒体损伤,下调Caspase-3蛋白及mRNA的表达,下调Bax mRNA及蛋白的表达,上调Bcl-2 mRNA及蛋白的表达,提高Bcl-2/Bax mRNA及蛋白的比例(P<0.05)。结论山药多糖在一定发范围内能有效地抑制神经细胞缺氧性凋亡,其机理是降低凋亡基因及蛋白产生,上调抗凋亡基因及蛋白产生。

抗IL-1β和TNF-αIgY抗体治疗豚鼠过敏性支气管哮喘的机制

目的：探讨抗IL-1β和TNF-αIgY抗体雾化吸入治疗豚鼠过敏性支气管哮喘的机制。方法：Hartly豚鼠随机分为雾化吸入生理盐水的正常对照组（C组），以及雾化吸入卵清白蛋白（OVA）建立过敏性哮喘模型的哮喘模型组（M组）、1.0％抗IL-1β和TNF-αIgY模型豚鼠治疗组（ Z1组）和布地奈德混悬液模型豚鼠治疗组（ Z2组）。各组豚鼠末次治疗结束后2、4、8、24 h心脏穿刺取血；收集支气管肺泡灌洗液（ BALF）。美蓝及伊红染色计数血液嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、嗜碱性粒细胞。 ELISA法测定血浆和BALF中IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β1、IgE的含量。结果：Z1组嗜酸性粒细胞在2～8 h低于M组。 Z1组血浆IL-1β（4、24 h）、IL-16（2、4、24 h）、TGF-β1（4～24 h）、IgE（24 h）较M组显著降低（P＜0.05），而在BALF中IL-1β和TNF-α（2～8 h），IL-4、IL-6、IL-8和IL-13（4～24 h），IL-16（8 h）、TGF-β1和IgE （4～8 h）显著降低于M组，尤其是IL-1β和TNF-α在2 h就开始显著降低（ P＜0.05）。 IL-1β及TNF-α与IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TGF-β1、IgE等呈正相关（ P＜0.05）。结论：抗IL-1β和TNF-αIgY雾化吸入减轻OVA诱导的豚鼠过敏性哮喘炎症可能是通过降低多种过敏性炎症因子浓度而实现。

白术多糖抗神经细胞缺氧性凋亡的机制研究

目的:探讨白术多糖抗神经细胞缺氧性凋亡的机制。方法:研究分为正常对照组、凋亡阳性组、白术多糖0.025g/L组、白术多糖0.05g/L组、白术多糖0.1g/L组、白术多糖0.25g/L组。采用"Neurobasal+B27"体外神经细胞无血清培养,免疫细胞化学鉴定神经细胞,MTT测定药物毒性,Rh-123染色流式细胞仪检测线粒体损伤,RT-PCR及免疫细胞化学测定Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白表达。结果:与凋亡阳性组比较,白术多糖在0.025g/L^0.1g/L降低缺氧的神经细胞线粒体损伤,0.025g/L^0.05g/L下调缺氧的神经细胞Caspase-3 mRNA的表达,0.05g/L下调缺氧的神经细胞Bax mRNA的表达,0.025g/L^0.25g/L下调缺氧的神经细胞Caspase-3和Bax蛋白表达,0.025g/L^0.25g/L上调缺氧的神经细胞Bcl-2蛋白表达,0.025g/L^0.05g/L提高Bcl-2/Bax mRNA及0.025g/L^0.1g/L提高Bcl-2/Bax蛋白的比例(P<0.05)。结论:白术多糖在一定发范围内能有效地抑制神经细胞缺氧性凋亡,其机理是降低凋亡基因及蛋白产生,上调抗凋亡蛋白产生,提高Bcl-2/Bax比例。

白术多糖对神经细胞毒性及抗缺氧诱导的神经细胞凋亡的影响

目的:探讨白术多糖的毒性及抗神经细胞缺氧性凋亡作用。方法:研究分为正常对照组、凋亡阳性组、白术多糖0.025g/L组、白术多糖0.05g/L组、白术多糖0.1g/L组、白术多糖0.25g/L组。采用"Neurobasal+B27"体外神经细胞无血清培养,免疫细胞化学鉴定神经细胞,MTT测定药物毒性,AnnexinV/PI荧光双染流式细胞仪及Hochest33342荧光染色检测细胞凋亡。结果:白术多糖在1.0g/L之内预处理神经细胞对其无毒性作用。白术多糖在0.025g/L^0.05g/L范围显著地改善缺氧对神经细胞生长的抑制,在0.025g/L^0.25g/L范围内显著地抑制缺氧复氧诱导的神经细胞早期凋亡。结论:白术多糖在一定浓度范围内具有抗缺氧复氧诱导的细胞凋亡作用。

黄精多糖干预长春新碱诱导的骨髓基质细胞生长抑制及凋亡

目的:探讨黄精多糖(PSP,polygonatum sibiricum polysaccharides)干预长春新碱(VCR)诱导的小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)生长抑制及凋亡的作用。方法:①PSP浓度(500、1000、2000、4000mg/L)及VCR浓度(2.5、5、10、15mg/L)分别与骨髓细胞共同培养14d,应用MTT法测定BMSCs增殖。②PSP(500、1000、2000、4000mg/L)与骨髓细胞预培养2h后再分别加入终浓度为5mg/L的VCR继续培养14d,应用MTT法测定BMSCs增殖。③BMSCs培养14d后再加入VCR(2.5、5、10、15mg/L)继续培养24h,经Annexin V/PI双染流式细胞术(FACS)测定细胞凋亡。④PSP(500、1000、2000、4000mg/L)与BMSCs培养14d后再加入5mg/LVCR继续培养24h,经Hoechst 33342荧光染色及Annexin V/PI双染流式细胞术(FACS)测定细胞凋亡。结果:①PSP(1000、2000、4000mg/L)与骨髓细胞培养14d后OD值(3.80、4.48、4.05)均高于正常对照组(3.70),其中PSP 2000mg/L组OD值差异具有显著性(P<0.05);VCR(5、10、15mg/L)组OD值(2.36、1.83、1.67)均显著低于正常对照组(3.70)。②骨髓细胞与PSP孵育2h后再加入5mg/L VCR继续培养14d,PSP 2000mg/L+VCR 5mg/L组OD值(3.51)与VCR 5mg/L组OD值(2.62)比较差异有显著性。③BMSCs培养14d再加VCR继续培养24h后FACS测定VCR(5mg/L、10mg/L、15mg/L)组凋亡率分别为31.12%、39.37%、64.10%,与正常对照组(7.70%)比较差异有显著性。④PSP与BMSCs培养14d再加入5mg/L VCR继续培养24h后,FACS测定PSP(1000mg/L、2000mg/L和4000mg/L)组凋亡率依次为27.77%、24.33%和25.20%,与凋亡诱导组(35.93%)比较差异均有显著性;Hoechst 33342检测,PSP(2000mg/L、4000mg/L)组凋亡率为29.0%和29.67%,与凋亡诱导组(40.33%)比较差异均有显著性。结论:黄精多糖可促进BMSCs增殖,有效地阻止长春新碱对BMSCs生长的抑制及凋亡作用。

人参皂苷Rb1抑制长春新碱诱导的骨髓基质细胞凋亡

目的：探讨人参皂苷Rb1抑制长春新碱诱导的小鼠骨髓基质细胞凋亡的作用。方法：研究分为正常对照组、长春新碱组、长春新碱凋亡诱导组,不同浓度人参皂苷Rb1（1.0、5.0、10.0、15.0μg/ml）抗长春新碱（5.0μg/ml）对骨髓基质细胞的生长抑制和凋亡组;采用MTT法测定骨髓基质细胞增殖,采用Annexin V/PI双染流式细胞术及Hoechst 33342荧光染色法测定细胞凋亡。结果：人参皂苷Rb1在5.0~15.0μg/ml浓度范围内显著地降低了长春新碱对骨髓基质细胞的生长抑制;人参皂苷Rb1在5.0~15.0μg/ml浓度范围内显著地阻断长春新碱对骨髓基质细胞的生长抑制。人参皂苷Rb1抗长春新碱诱导的骨髓基质细胞凋亡具有浓度依赖性。结论：人参皂苷Rb1能够抑制长春新碱诱导的骨髓基质细胞凋亡。

乏氧通过腺苷A2受体调节人成熟树突状细胞骨桥蛋白的表达

目的 探讨乏氧调节人成熟树突状细胞（mDCs）骨桥蛋白（OPN）表达的机制.方法 免疫磁珠法分离人外周血CD14＋单核细胞,分别在常氧和乏氧条件下经GM-CSF及IL-4体外诱导生成mDCs;ELISA检测培养上清中OPN水平,RT-PCR检测OPN基因水平表达;使用腺苷替代物（NECA）、特异性A2R激动剂（CGS21680）和特异性A2R拮抗剂（SCH58261）探讨A2R在调节人mDCs表达OPN中发挥的作用;利用重组人TGF-β1（rhTGF-β1）及抗TGF-β1单克隆抗体（anti-TGF-β1Mcab）检测TGF-β1在这一过程中发挥的作用.结果 乏氧显著增加mDCs对OPN mRNA及OPN蛋白的表达,A2R拮抗剂抑制乏氧对OPN的诱导作用;常氧条件下,腺苷替代物（NECA）和A2R激动剂均能显著上调mDCs对OPN mRNA的表达及OPN蛋白的分泌,A2R拮抗剂可特异性抑制A2R激动剂对OPN的诱导;A2R参与调控免疫调节因子TGF-β1水平,通过rhTGF-β1和阻断抗体证实TGF-β1参与调节OPN的表达。结论乏氧环境下高水平腺苷可通过A2R诱导mDCs表达TGF-β1，继而调节OPN的表达。

山药多糖对神经细胞毒性及抗缺氧/复氧诱导的神经细胞凋亡的影响

目的:探讨山药多糖抗神经细胞缺氧性凋亡作用。方法:研究分为正常对照组、凋亡诱导组、山药多糖0.025g/L组、山药多糖0.05g/L组、山药多糖0.1g/L组、山药多糖0.25g/L组。采用"Neurobasal+B27"体外神经细胞无血清培养,免疫细胞化学鉴定神经细胞,MTT测定药物毒性,AnnexinV/PI双染流式细胞仪及Hochest33342荧光染色检测细胞凋亡。结果:山药多糖在2.0g/L之内预处理神经细胞对其无毒性作用,山药多糖在0.05g/L～0.1g/L范围显著地改善缺氧对神经细胞生长的抑制,0.025g/L～0.25g/L范围内显著地抑制缺氧复氧诱导的神经细胞早期凋亡。结论:山药多糖在一定浓度范围内具有抗缺氧复氧诱导的细胞早期凋亡作用。

妊娠早期CD56^(bright)CD16^- NK细胞CD49d和CD11b的表达分析

目的探讨早期妊娠和稽留流产患者外周血CD56brightCD16- NK细胞及蜕膜组织子宫自然杀伤(uNK)细胞中整合素α4(CD49d)和αm(CD11b)的表达。方法采集18例早期妊娠妇女外周血(其中14例另取蜕膜组织)和9例稽留流产妇女外周血,Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞悬液,流式细胞术检测样本CD56brightCD16- NK细胞中CD49d和CD11b表达。结果 CD49d和CD11b在早期妊娠蜕膜CD56brightCD16- NK细胞表达显著低于早期妊娠妇女外周血CD56brightCD16-NK细胞(P<0.01);稽留流产患者外周血CD56brightCD16- NK细胞的表达较早期妊娠妇女显著降低(P<0.05)。结论 CD49d和CD11b可能在妊娠早期uNK细胞的募集中起重要作用,同时也可能参与了正常妊娠的维持。

质子碳离子笔形束扫描技术治疗头颈部脊索瘤与软骨肉瘤的初步结果

目的采用质子碳离子笔形束扫描技术治疗头颈部脊索瘤软骨肉瘤患者的不良反应和近期疗效。方法2014-2016年共收治61例接受质子重离子治疗作为首程放疗的头颈部脊索瘤及软骨肉瘤患者，其中脊索瘤45例，软骨肉瘤16例；男39例，女22例；中位年龄38岁（14-70岁），中位肿瘤最大直径4．1 cm（0-8．6 cm）。肿瘤原发部位以枕骨斜坡及颈椎为主。结果单纯质子治疗8例，质子＋碳离子治疗21例，单纯碳离子治疗32例，所有患者均顺利完成治疗。患者中位随访时间21个月（7-47个月）。未见3-4级急性不良反应，晚期不良反应仅1例放射性颞叶损伤。2年无进展生存率91％，2年总生存率100％。结论质子重离子治疗脊索瘤软骨肉瘤取得了较好的短期疗效．长期疗效及不良反应仍需要进一步随访。

质子碳离子治疗复发性颅底及颈椎脊索瘤和软骨肉瘤的初步临床结果

目的探讨采用质子碳离子笔形束扫描技术治疗复发性颅底及颈椎脊索瘤和软骨肉瘤患者的不良反应和近期疗效。方法收集2014年6月30日至2018年7月30日收治的45例复发性颅底及颈椎肿瘤患者,其中脊索瘤39例,软骨肉瘤6例,中位肿瘤体积57 cm3(6.6~231.7 cm3)。术后复发患者31例,术后放疗后复发14例。行单纯质子治疗1例,质子加碳离子放疗21例,单纯碳离子治疗23例。结果所有患者均顺利完成治疗。患者中位随访时间29个月(8~57个月),2年总生存率、局部控制率及无进展生存率分别为82.7%、85.3%及73.8%。除1例3级急性口腔黏膜炎外,未见其他3~4级急性或晚期不良反应。粒子射线放疗作为再程放疗的患者与第1次放疗的患者,其总生存率分别为50.3%和96.2%(χ^2=16.969,P<0.05)。结论质子重离子治疗复发性颅底及颈椎脊索瘤软骨肉瘤取得了较好的短期疗效,长期疗效及不良反应仍需要进一步随访。

碳离子治疗IMRT后局部区域复发鼻咽癌初步研究——上海市质子重离子医院临床经验

目的分析再程调强碳离子放疗(IMCT)对IMRT后局部区域复发鼻咽癌的疗效及不良反应。方法纳入112例于2015-2018年接受挽救性再程IMCT的局部区域复发鼻咽癌患者,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者分别为10例(9%)、26例(23%)、41例(37%)、35例(31%),中位年龄48岁(17~70岁),中位照射剂量为60GyE(50~69GyE)。结果中位随访20个月(5~45个月),共20例患者死亡,42例患者局部复发,2年总生存(OS)率与无局部进展生存(LPFS)率分别为85%与52%。单因素与多因素分析中Ⅳ期患者OS均显著差于其他患者,未发现与LPFS显著相关的预后因素。治疗期间未见≥3级急性不良反应。≥3级晚期不良反应包括1例口干、2例听力下降、1例大脑颞叶损伤与19例鼻咽黏膜坏死。结论再程IMCT治疗局部区域复发鼻咽癌取得了较好疗效且严重不良反应发生率较低,远期疗效及不良反应有待进一步随访。

26例脑膜瘤的质子放射治疗初步临床结果

目的考察质子射线放射治疗世界卫生组织(WHO)Ⅰ/Ⅱ级脑膜瘤的初步疗效及不良反应。方法回顾性分析2015年5月至2018年10月上海市质子重离子医院治疗脑膜瘤患者26例,其中18例为颅底脑膜瘤。患者的中位年龄为42岁(范围15~79岁)。病理诊断为WHOⅠ级脑膜瘤的患者8例,病理诊断为WHOⅡ级的脑膜瘤患者9例,影像学诊断患者9例。7例患者为术后放疗(SimpsonⅠ~Ⅲ级切除2例,SimpsonⅣ~Ⅴ级切除5例),10例患者为术后复发后放疗。结果中位随访时间为22.2个月,所有患者均完成了既定的质子射线放射治疗,中位等效剂量为54 GyE(范围50.4~60 GyE),单次剂量为1.8~2.0 GyE。治疗后70%患者症状部分缓解,2年无进展生存率(PFS)和总生存率(OS)均为100%。治疗期间急性放射反应轻微,仅出现1级脱发(n=22)和黏膜反应(n=2),无2级及以上急性反应,目前尚未观察到晚期不良反应。结论质子治疗颅内及颅底脑膜瘤安全有效,长期疗效及不良反应需进一步随访。

碳离子放射治疗泪囊泪腺肿瘤的剂量学研究

目的比较碳离子治疗泪囊泪腺肿瘤相对于光子放疗的剂量学差异.方法利用上海市质子重粒子医院治疗的10例术后残留的泪囊腺肿瘤患者CT图像,重新制定碳离子计划,光子容积调强计划(VMAT)与固定野光子调强计划(IMRT),所有患者处方均为给予临床靶区54Gy相对生物学效能(RBE)/18次,并给予临床加量靶区同步加量至63Gy(RBE)/18次.在计划靶区覆盖相似情况下,比较正常组织受量.结果在计划靶区覆盖差异无统计学意义的情况下,与光子VMAT和与IMRT相比,碳离子计划患侧与健侧的眼球平均剂量、视神经近似最大剂量(D2%)与平均剂量均降低(患侧:t=7.35、3.79、4.66、8.48、2.52、2.76,P<0.05;健侧:t=3.87、10.49、9.16、4.43、6.53、5.12,P<0.05);脑组织平均剂量由(5.65±3.58)和(5.76±2.09)Gy(RBE)降至(0.81±0.90)Gy(RBE),差异具有统计学意义(t=6.76、17.33,P<0.05).结论与光子VMAT与IMRT相比,碳离子计划能有效降低泪囊泪腺肿瘤周围视觉器官受照体积与剂量,具有降低放疗不良反应的潜在优势.